抗李斯特氏菌单抗反应特性的测定

本研究应用淋巴细胞杂交瘤技术产生20株针对李斯特氏菌单抗,经间接ELISA试验测定了这些单抗的反应特性,结果表明,单抗B_18、C_(11)、B_5、J_(01)、J_(02)可与绝大多数李斯特氏菌发生反应,具有属内的广谱反应性;其余单抗反应谱不尽相同。且20株单抗均不与葡萄秋菌、粪链球菌、枯草杆菌、沙门氏菌和大肠杆菌反应,表现出高度特异性。由此可见,B_(18)、C_(11)'、B_5、J_(01)、J_(02)等可用作组建李斯特氏菌属特异单抗捡测试剂,而且在该菌抗原分析等方面有应用前景。     

异硫氰酸荧光黄直接标记小鼠腹水McAb的新方法

<正> 高质量FITC标记抗体的制备是免疫荧光试验的关键之一,但其制备过程中受到抗体纯度及其活性、标记试剂及标记程序,特别是荧光素与蛋白质的比例等影响。Goding氏报道了一种简便的改良标记程序,用于标记提纯的兔抗小鼠IgM免疫球蛋白,效果良好。鉴于单克隆抗体(McAb)的匀质性、其理化特性不及常规免疫血清稳定,往往在提纯过程中抗体变性较大。作者将 Goling氏方法进一步改进后用于将FITC直接标记小鼠腹McAb获得了较为满意的结果,现报告如下。     

单核细胞增生李斯特菌快速检测的靶基因及其生物学特性

单核细胞增生李斯特菌(Listeria m onocytogene,s Lm)是一种重要的人畜共患病原菌,该菌在自然界分布广泛,极易通过各类污染食品进行传播,感染人和动物引起食源性李斯特菌病。Lm可使孕妇、婴儿以及免疫力低下的易染人群产生腹泻发热等症状,严重的会导致孕妇流产、脑膜炎和败血症     

市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析

目的：了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌（Lm）的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法：分离菌株鉴定应用聚合酶链反应（PCR）；以PCR产物直接测序，对780bp片段作序列分析。结果：市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1．08％（4／370）；分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96．4％～98．6％和95．0％-97．2％，而两分离株之间的同源性仅为95．9％。结论：合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染，且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险；分离菌株WLD1和FCY1，尤其是FCY1分化程度较高．Lm hly基因核苷酸序列蒡异的距离与地理分布、菌株的样品来源无相关性。     

重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8+ T细胞表位的运送研究

目的：分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8^＋T细胞表位的效应。方法：将携带融合表达绿色荧光蛋白（GFP）与OVACD8^＋T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A（pG2F）感染抗原提呈细胞（APC）IX^b和骨髓源树突状细胞（BMDC），应用体外抗原提呈试验检测APE对重组菌运送的CD8^＋T细胞表位的提呈效应。同时，重组菌13A（pG2F）以静脉注射方式免疫C57BL／6小鼠，应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞。结果：感染试验表明，大肠杆菌13A能向APE中运送真核表达质粒，并且外源GFP基因获得了表达。体外抗原提呈试验结果显示，在感染的早期（2小时），LK^b和BMI）C均可提呈重组菌13A（pG2F）运送的T细胞表位；在感染的晚期（48小时），LK^b细胞对CD8^＋T细胞表位的提呈效应增强。在同样的作用条件下，BMI）C对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LK^b细胞。体内结果显示，大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8^＋T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答。结论：重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8^＋T细胞表位，为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。     

重组沙门菌表达结核分枝杆菌ESAT-6及其特异性免疫应答分析

Objective To determine the immune responses induced by recombinant Salmonella ty-phimurium expressing the secreting antigen ESAT-6 of Mycobacterium tuberculosis. Methods ESAT-6 cod-ing gene was cloned and identified by PCR and sequencing. Prokaryotic expression plasmid pYA33-esat car-rying the ESAT-6 coding sequence was constructed firstly and electro-transformed into an attenuated strain X4550 of Salmonella typhimurium, the recombinant bacteria was named as X4550(33-esat). C57BL/6 mice were immunized intranasally (I. N) with 108 CFU recombinant bacteria at day 0 and 18. Cells from spleen, lung, mesenteric lymph node (MLN) and Peyer's patch (PP) were collected from mice after second immu-nization, and the specific IFN-γ-secreting cells and IL-4-secreting cells were detected by ELISPOT assay u-sing ESAT-6 peptide as stimulus. Furthermore, CTL effects were in vivo evaluated by CFSE assay. Results The results showed that cellular immune responses specific for ESAT-6 could be detected by ELISPOT assay. In lung and PP cells, immune responses against ESAT-6 were biased toward Th1 type, the frequency of IFN-γ-secreting cells was much higher than that of IL-4-secreting cells. In splenocytes and MLN cells, the anti-gen specific immune responses acted as Thl and Th2 balance, the frequency of IFN-γ-secreting cells was close to that of IL-4-secreting cells. CFSE assay indicated that recombinant bacteria could induce the high level of CTL effects specific for ESAT-6 peptide. Conclusion These results suggested that recombinant Sal-monella typhimurium X4550(33-esat) not only can induce cellular immune responses, but also can elicit specific CTL responses after I. N immunization. It also provided the useful information for the control of infec-tious disease of tuberculosis.     

表达GFP的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌体内感染抗原呈递细胞的动态变化

目的：阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞(APC)的动态变化规律。方法：用一定剂量的表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550(pY．AG-FP)口服接种BALB／c小鼠。3d后，取腹腔巨噬细胞培养24h，用荧光显微镜观察。另以该细菌静脉注射小鼠，于感染后3、6和12h，制备脾脏、肝脏低浮密度细胞。用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率。结果：巨噬细胞感染X4550(pYAGFP)的百分率，腹腔中约为50％，肝脏和脾脏中约为20％～40％。树突状细胞感染X4550(pYAGF、P)的百分率，脾脏中约为4％～10％，肝脏中约为10％～20％。巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞。结论：感染早期，重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取，为诱导有效的免疫应答提供了先决条件。     

鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌分类中的作用探讨

应用４株鞭毛蛋白共同抗原单抗ＣＢ８、ｄｅ７、ｃｃ６和ＤＤ４，在直接ＥＬＩＳＡ试验中测定了鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌７个ＤＮＡ同源群２１９株菌株中的分布情况。结果表明，它们广泛存在于各个ＤＮＡ同源群内，在沙门氏菌属内的检出率分别高达９５．４％，９３．６％，９５．４％和９２．２％，其中ＣＢ８＋ｄｅ７可达９９．１％。经与脂多糖Ｏ－Ｉ噬菌体识别的共同表位比较研究表明，鞭毛蛋白共同抗原表位更加特异和准确，前者在ＤＮＡ同源群Ⅲａ、Ⅳ中的分布很低或检测不出。这些结果为沙门氏菌属新分类概念提供了新的科学依据，同时预示着鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌分类中具有重要作用。