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41.
背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。 相似文献
42.
目的探讨造血干细胞移植(HSCT)治疗恶性血液病并发症的发生情况及其防治。方法45例急慢性白血病、恶性淋巴瘤患者中,30例选择自体造血干细胞移植(auto-HSCT),15例接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT),包括HLA不全相合3例及非血缘关系移植4例,混合移植2例;预处理auto-HSCT主要选用BE-AC、CBV方案,allo-HSCT采用BU/CY2及改良的BU/CY方案;移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用环孢菌素A(CsA)+甲氨喋呤(MTX)或CsA+MTX+骁悉(MMF)方案。结果30例auto-HSCT患者中70%出现口腔黏膜炎;40%出现不同部位的感染。15例allo-HSCT患者中80%出现口腔黏膜炎;53%出现不同部位的感染;巨细胞病毒(CMV)感染发生率20%;出血性膀胱炎(HC)发生率13%;7%出现肝静脉闭塞病(HVOD);33%出现急性移植物抗宿主病(aGVHD);7%出现慢性移植物抗宿主病(cGVHD);移植相关死亡率27%。结论移植相关并发症是影响造血干细胞移植成功的重要因素,移植期间需要进一步探索、加强移植相关并发症的防治,以提高移植成功率。 相似文献
43.
小干扰RNA是一种依赖Dicer酶的长度为21~23nt的双链RNA,它具有很强的基因关闭功能,能够介导RNA干扰作用,降解特定的靶mRNA,在基因功能分析领域发挥了重要的作用,近年在抗病毒、抗肿瘤方面又成为国内、外研究的一大热点,为临床病毒感染和肿瘤疾病的防治提供了新途径。 相似文献
44.
目的探讨沙美特罗替卡松联合脑心通治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期的临床治疗效果。方法选取2008年11月—2011年11月慢性阻塞性肺疾病稳定期患者100例,随机分为观察组与对照组,观察组给予沙美特罗替卡松联合脑心通药物治疗,对照组给予氨茶碱口服药物治疗。结果观察组治疗后1s用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)以及FEV1占预计值的百分比与治疗前以及对照组比较均明显升高(P〈0.05),稳定期急性复发率明显低于对照组(P〈0.05)。结论沙美特罗替卡松联合脑心通治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期临床效果显著。 相似文献
45.
目的 利用红色荧光蛋白(DsRed)标记的小鼠淋巴瘤EL4细胞株,建立荧光标记的小鼠白血病模型,并对模型进行分析和鉴定。方法 将EL4/DsRed细胞以低剂量(5×102/只)、中剂量(5×103/只)、高剂量(2.5×104/只)经尾静脉注入经清髓照射的C57BL/6小鼠体内,同时接种骨髓细胞5×106/只,采用流式细胞术(FCM)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、组织病理等方法鉴定小鼠成模情况。结果 C57BL/6小鼠接种不同剂量EL4/DsRed细胞后白血病发病率达100 %,移植后第2周FCM示受鼠肝、脾、骨髓和外周血中有大量EL4/DsRed细胞;各组组织器官病理检查呈现出不同程度的肿瘤细胞浸润。结论 用DsRed标记的EL4细胞以5×102/只植入C57BL/6小鼠,即可成功建立荧光标记的小鼠白血病模型,可为白血病发病机制、微小残留病检测等研究提供有价值的动物模型。 相似文献
46.
背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7, CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。
目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。
方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7 DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒 ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。
结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7 DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293 FT细胞后,24 h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108 U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。
关键词:趋化因子受体7;未成熟树突状细胞;慢病毒载体;真核表达;组织工程
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.01.029 相似文献
47.
随着生活水平的提高,糖尿病严重危害人们的健康,已成为我国面临的一个重大的公共卫生问题。2001年,苏州市大力推进糖尿病管理工作并取得显著效果,但是在实地调研中,还存在一些有碍于全面、顺利开展糖尿病社区管理的问题。拟对苏州市J社区糖尿病管理的现状、存在问题加以阐释,在此基础上提出优化糖尿病社区管理的路径对策。 相似文献
48.
近年来,随着对CD4+T细胞研究的深入,对Th1和Th2细胞的免疫生物学活性及免疫调节也有了进一步的认识.CD4+T细胞新亚型CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及Th17细胞受到了人们广泛的关注,尤其是细胞的分化调节、功能及相关疾病的发病机制.本文就CD4+T细胞各亚群的生物学特征及分工、亚群间的相互调节、免疫应答与疾病的关系等作一综述. 相似文献
49.
目的探讨端粒酶活性定量检测在诊断良恶性胸腹水中的应用价值。方法采用TRAP-银染定性方法和rrRAP-PicoGreen定量方法,对102例已确诊患者的胸腹水细胞进行端粒酶活性分析。结果恶性胸腹水细胞端粒酶活性明显高于良性胸腹水细胞,其定性检测诊断率明显高于细胞病理学。乳腺癌患者胸腹水细胞的端粒酶活性明显高于卵巢癌、肝癌患者胸腹水细胞的端粒酶活性;肺癌患者胸腹水细胞端粒酶活性明显高于肝癌。在良性胸腹水中,感染性胸腹水细胞端粒酶活性高于非感染性胸腹水。结论恶性胸腹水细胞端粒酶活性明显升高。端粒酶活性定量检测较定性检测更敏感、简便,对良恶性胸腹水的诊断和鉴别诊断有一定应用价值。 相似文献
50.
目的研究慢性粒细胞性白血病(CML)细胞冻融抗原(CLA)负载的树突状细胞(DC)对特异性抗白血病T细胞的作用.方法将CML患者外周血单个核细胞(PBMNC)来源的DC在体外用CLA负载,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养,应用乳酸脱氢酶(LDH)释放法观察其对自身CML细胞杀伤活性(A组),与未负载的DC+CIK(B组)、CIK(C组)及CIK+CLA(D组)进行比较.结果效靶比为10∶1条件下,A、B、C、D4组的杀伤活性分别为(63.69±8.35)%、(45.02±5.49)%、(27.28±4.64)%、(29.63±5.71)%.A组比B组杀伤活性强(P<0.01);C组与D组比无显著性差异.结论CLA负载的DC可进一步提高DC介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞的杀伤活性. 相似文献