蛋白质组计划

人类基因组计划，是一项堪称在规模和意义上大大超过曼哈顿原子弹计划和阿波罗登月计划的划时代科学工程，其核心任务是测出人体23条染色体上全部30亿个碱基(或称核苷酸)的序列，把总数约10万个的基因，都明确定在染色体上；所采取的策略是，首先将染色体敲成大片段，再将大片段敲成小片段，对其进行测序，然后把小片段初步组装，     

基质金属蛋白酶-9表达与舌鳞癌浸润转移的关系

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在舌鳞癌中的表达及其肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学法检测59例舌鳞癌组织中MMP-9的表达。结果59例舌鳞癌原发灶均有MMP-9蛋白表达,随细胞分化程度增加呈递增趋势,但无统计学意义(P>0.05),TNM分期Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ~Ⅳ相比有显著性差异(P<0.001),原发灶MMP-9表达强度与颈淋巴结转移无关(P<0.001)。结论舌鳞癌原发灶中MMP-9表达与临床分期及颈淋巴结转移有关,可作为舌癌颈淋巴结转移的预测指标。     

稀土硝酸铈对喉癌细胞株Hep-2生长的影响

目的：探讨硝酸铈对Hep-2喉癌细胞体外增殖生长的影响。方法：在硝酸铈浓度为0．05－3．2mmol/L的培养条件下,采用MTT实验方法检测喉癌生长抑制率并测定喉癌细胞的克隆形成率。结果：0．4－3．2mmol/L范围内,硝酸铈表现为提高喉癌细胞生长抑制率与降低其克隆形成率。结论：硝酸铈在体外培养中对喉癌细胞增殖有一定的抑制作用。     

香烟烟雾对大鼠癌基因和抑癌基因表达、氧化-抗氧化系统及一氧化氮水平的动态影响

目的从基因表达水平、氧化-抗氧化系统以及一氧化氮水平变化等多角度探讨香烟烟雾对大鼠机体的影响.方法采用香烟烟雾刺激Wistar大鼠,选取2,4,12,24,48周等时点进行样本取材,其中肺支气管粘膜上皮c-fos、ras、c-myc、p53基因所表达的蛋白采用免疫组化染色法检测,并分别采用TBA比色法、邻苯三酚一氯化硝基四氮唑蓝法、Griess比色法,对红细胞、血浆、血清、肺泡灌洗液(BALF),肺组织匀浆等样本中丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)水平等指标进行检测.结果肺支气管粘膜上皮c-fos基因表达水平增高(P＜0.05),而ras、c-myc、p53基因所表达的蛋白阳性率较低;MDA、LPO、NO水平有持续升高的趋势,而SOD活性下降(P＜0.05).结论长期香烟烟雾刺激大鼠,可导致氧化-抗氧化系统与NO水平调节失衡,以及肺部癌基因、抑癌基因表达的调控异常.     

大鼠骨髓间质干细胞基本生物学特性的研究

目的:研究成年大鼠骨髓间质干细胞(rBMMSCs)的基本生物学特性,并与成人骨髓间质干细胞(hBMMSCs)作比较。方法:分别采用贴壁法和Ficoll-Paque淋巴细胞分离法分离获得rBMMSCs和hBMMSCs,进行体外传代、扩增、纯化,比较分析不同代数的rBMMSCs和hBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力,观察传代次数对rBMMSCs的神经分化能力的影响,流式细胞仪检测rBMMSCs表面抗原表达;采用中期分裂相秋水仙素阻抑法分析rBMMSCs的核型。结果:原代rBMMSCs和hBMMSCs在体外扩增后可分别获得(7-8)×10⁵和(5-6)×10⁵个细胞,体外扩增5代后可分别获得1.7×10⁸和l×10⁸个细胞,体外扩增15代后,可分别获得(4-8)×10¹²和(3-4)×10¹²个细胞,随着传代次数的增加,细胞的增殖能力、克隆形成能力和神经分化能力有所下降,但各代rBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力都比hBMMCs较强。流式细胞仪检测结果显示rBMMSCs的CDllb、CD45、CD61、CD71、CD8O、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ表达为阴性,而CD29和CD44表达阳性。rBMMSCs为正常大鼠二倍体核型。结论:rBMMSCs具有极强的自我更新能力和神经分化能力,是一种具有正常二倍体核型的间质干细胞,在组织工程中具有广阔的应用前景。     

成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(adult rat marrow mesenchymal stem cells,rMSCs)的体外增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力.方法 分别采用3种不同的诱导方法体外定向诱导第三至五代的rMSCs向神经元样细胞分化,并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达的神经元特异性标志[神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和神经丝蛋白(neurofilament,NF)]及星形胶质细胞特异性标志[胶质纤维酸性蛋白(glia fiber acid protein,GFAP)],并进行神经元样细胞定量分析.结果 所采用的3种定向诱导方法都能使rMSCs特异性诱导分化为神经元样细胞,此神经元样细胞都能特异性地表达出NSE和NF,而不表达GFAP.经过定量计数分析发现用上述方法处理rMSCs 后出现NSE阳性的细胞约为75.5%±3.5%,出现NF阳性的细胞约为77.2%±2.8%.结论 rMSCs能在体外扩增、传代,并能被定向诱导分化为神经元样细胞.     

长期传代的大鼠骨髓间质干细胞的生物学特性分析

目的:通过对大鼠骨髓间质干细胞(BMMSC)体外长期传代培养, 进一步了解其增殖、表型变化及是否有突变倾向。方法:用流式细胞仪分析80％融合生长的传代细胞的细胞周期、表型变化;并对早期和长期传代的BMMSC进行核型对比分析。结果:早期和长期传代(30代)的BMMSC均呈现旺盛的的增殖力, 但40代BMMSC的表型与20代以前则有所不同;早期和长期传代的BMMSC均显示正常核型。结论:大鼠BMMSC可简便迅速地在体外长期扩增, 在保持这种高增殖力的同时, 核型仍保持正常二倍体;长期传代的BMMSC的表型变化提示其有一定自发分化趋势。     

大鼠肾功能衰竭细胞免疫功能变化的研究

目的 :利用甘油致肾衰的模型 ,系统地检测了肾衰时全身以及呼吸道局部的特异性与非特异性细胞免疫功能。材料和方法 :健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 65只 ,随机分为对照组和肾衰组 ,予肌注 50 %甘油生理盐水( 1 0ｍＬ/ｋｇ)复制肾衰模型。测定并计算胸腺指数 ;并采用免疫细胞学方法系统地检测反映全身及呼吸道细胞免疫功能的多项指标 :外周血中性粒细胞 (ＰＭＮ)及肺泡巨噬细胞 (ＡＭ)对金葡菌的吞噬率、外周血及支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中Ｔ淋巴细胞的百分比、外周血白细胞移行抑制试验。结果及讨论 :( 1 )外周血中性粒细胞是全身非特异性免疫…     

骨髓间质干细胞对大鼠移植物抗宿主效应和脾脏结构的影响

【目的】探讨骨髓间质干细胞（MSC）对同种大鼠骨髓移植后移植物抗宿主反应（GVHD）的影响，尤其是MSC对脾脏结构重建的作用。【方法】建立Fischer344（RT-1A1）大鼠至Wistar（RT-1Au）大鼠的同种异体骨髓移植模型，观察移植后大鼠的基本生活情况，病理学分析靶器官皮肤、肝脏、肠道和脾脏的组织学改变，尤其注意MSC对同种骨髓移植后脾脏结构重建的影响。【结果】①在移植后30d的观察期内，共移植组显示较高的生存率。②组织学分析显示：在共移植组，靶器官皮肤、肝脏、肠道的损伤相对较轻。③脾脏组织学分析显示：在骨髓与MSC共移植组，受体脾脏结构接近正常；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量T细胞，无典型脾小结形成。【结论】MSC与骨髓共移植对GVHD有抑制作用，并显著促进脾脏结构重建。     

快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系

背景：目前常用的成脂刺激剂主要由胰岛素、地塞米松、IBMX 和吲哚美辛组成,该体系涉及处理因素多、诱导周期长且对细胞毒性大,不利于脂肪形成抑制效应的研究.目的：建立快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系.方法：大鼠全骨髓细胞原代培养,胰酶消化传代,富集形态均质的间充质干细胞,利用过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂噻唑烷二酮类药物罗格列酮和吡咯列酮体外单独诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,设立无糖、低糖和高糖 DMEM 三种基础培养体系,以经典的成脂刺激剂作为阳性对照,在诱导的不同时间点对分化细胞进行形态学观察和油红O染色.结果与结论：与经典成脂刺激剂相比,罗格列酮或吡咯列酮单独均能诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化,吡咯列酮诱导48 h和罗格列酮诱导72 h均可观察到富含脂滴或脂泡以及油红O染色的阳性细胞,吡咯列酮与罗格列酮的最佳诱导浓度分别为0.125 mmol/L和10μmol/L,而高糖环境利于大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化.说明基于高糖培养环境的以吡咯列酮或罗格列酮做为成脂刺激剂的培养体系可快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化.