利用红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法监测个体嵌合状态

本研究建立红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术以监测个体嵌合状态。根据红细胞Kidd血型等位基因的差异设计TaqMan MGB探针和特异性引物,进行实时荧光定量PCR检测个体嵌合状态,利用倍比稀释的方法模拟个体DNA嵌合状态并进行敏感性分析。结果表明,实时荧光定量PCR法可有效区分JK*A和JK*B等位基因。人工嵌合JK*A和JK*B的DNA标本实测值与理论值无显著差异(P>0.05)。在104个嵌合型细胞中存在156个供者型细胞时,该方法可有效检出供者型细胞。结论:建立的红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法检测嵌合体具有可行性,可以在一定范围内用于定量监测嵌合样本。     

α1,2岩藻糖基转移酶基因复合突变引起类孟买型血型一例

患者女，浙江籍汉族，交叉配血时出现疑问。1名无血缘关系的健康献血者作为对照。突变点频率调查所采集的140份随机无血缘关系的样本来自本中心的无偿献血者。     

流式细胞仪检测HLA-B_(27)抗原初探

目的　建立一种快速、准确的HLA B2 7检测技术。方法　利用流式细胞仪 (FCM)检测HLA B2 7抗原 ,并将结果与基因定型法比较 ,74例临床样本分别用FCM法、PCR ASP基因定型法检测HLA B2 7抗原和基因。结果　FCM法有 2 2例HLA B2 7阳性 ,5 2例阴性 ,与PCR ASP法结果比较 ,阳性符合率 88% ,阴性符合率 10 0 % ,总观察一致率 95 .9% ,二种检测方法无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　可以认为 ,FCM法检测HLA B2 7具有快速灵敏、多参数检测等优点 ,针对不同的样本来源和临床要求 ,与PCR ASP法配合使用 ,能在临床强直性脊椎炎等疾病诊断中发挥重要作用     

流式细胞仪法用于血小板相关抗体检测和血小板交叉试验

目的 应用流式细胞仪(FCM)进行血小板相关抗体检测和血小板交叉试验。方法 利用血小板抗体阳性、阴性血清探寻FCM法实验条件,血小板经血清致敏,洗涤后,加入荧光标记鼠抗人IgG反应,由FCM获取和分析。52人次正常人血清经FCM法检测后,统计界定正常值范围。1份阳性血清经9个稀释度倍比稀释,分别用FCM法和固相ELISA抗体筛选法检测。31名临床血小板输注无效患者分别用FCM法和抗原捕获酶免分析法(MACE)进行102人次血小板交叉配合试验。结果 FCM法检测正常值为荧光强度比值R<1.156,9个稀释度的阳性血清检测表明,FCM法最高可检稀释度为86.67,固相ELISA法最高可检稀释度为56.34(抗-HPA)和67.25(抗-HLA)。102人次血小板交叉结果显示,FCM法和MACE法无显著性差异(P>0.05)。结论 FCM法可用于血小板相关抗体检测和血小板交叉配血,是一种快速、灵敏的新方法。     

ABO基因c.398T>C新变异导致Bweak表型的分子特性研究

目的探讨1例Bweak亚型个体的分子机制。方法选取2016年12月5日于浙江省血液中心献血的1例受试者为研究对象。利用血清学方法鉴定受试者的ABO表型, 用体外酶活性试验测定其血清中B糖基转移酶(GTB)的活性。用PCR扩增ABO基因第5 ～ 7外显子及侧翼序列并确定其基因型, 采用T-A克隆技术分离单倍体并进行测序验证。用ProtParam和PSIPRED软件分析蛋白的一级理化性质和二级结构。用PolyPhen-2、SIFT、PROVEAN三种软件分析错义变异对蛋白的作用效应。结果受试者血清学检测为Bweak亚型, 血清中存在抗B抗体。体外酶活性试验显示其GTB活性显著降低。单倍体克隆测序分析发现B等位基因上存在c.398T>C错义变异, 为一个新的B等位基因, 可导致GTB第133位的苯丙氨酸替换为丝氨酸(p.Phe133Ser)。生物信息学分析提示上述替换对蛋白的一级和二级结构影响不明显, 但变异蛋白的热力学能量增加6.07 kcal/mol, 严重降低了热稳定性, 生物信息学预测该变异对蛋白功能有害。结论新等位基因ABO*B.01-398C是引起Bweak亚型抗原弱表达的...     

p表型个体的血清学特点和分子机制研究1例

目的分析1例p表型个体的血清学特征和分子机制。方法选取2021年5月在嘉兴市中心血站进行血型鉴定的1例p表型个体为研究对象。用血型血清学方法鉴定其ABO、RhD、P1PK血型和意外抗体。采用PCR-直接测序法(PCR-SBT)对编码P1和PK抗原的α1, 4-半乳糖基转移酶基因(A4GALT)的编码区进行测序分析。结果该个体的血型为A型、RhD阳性、P1PK系统为罕见的p表型, 血清中存在抗-PP1Pk。测序结果显示其A4GALT基因编码区存在c.343A>T纯合变异。结论 A4GALT基因c.343A>T纯合变异很可能导致了p表型个体。     

GTB等位基因278C＞T导致的BW变异型

B抗原是在α1,3半乳糖基转移酶(GTB酶)催化下,将供给底物UDP-Gal的半乳糖基转移到接受底物H糖链上形成的.目前确认的B变异型主要有B3、Bx、Bm、Bel和Bw等5类,Bw是一类频率相对较高的B变异型,共发现10种遗传性Bw等位基因,均由GTB等位基因错义突变引起[1～4],笔者在前期研究中报道了中国人群中因721C＞T突变导致的Bw03等位基因[3],在对1个B抗原弱表达的研究中发现,在GTB等位基因第6外显子存在一个新的碱基错义突变.     

中国人Rh部分D表型的分子机理研究

为了研究部分D表型的分子机理,用间接抗人球蛋白方法（IAT）筛选弱表达的D变异体,PCR-SSP（polymerase chain reaction-sequence sepecific primer）方法扩增RHD基因特异的外显子及其侧翼序列,用PCR产物直接序列分析测定核苷酸的变异.结果表明：从22例弱D中检测到10例部分D表型,其中D Va（Kou.）、D Va（Hus.）和D Va-like（YH.）各1例,D Ⅵ typeⅢ表型7例.结论：10例部分D表型的分子机理得到明确,其中D Va（Kou.）、D Va-like（YH.）表型为国内首次报道.     

浙江汉族DEL表型基因分型方法的建立

为了快速鉴定DEL表型，建立浙江汉族DEL表型的基因分型方法，根据RHD1227A等位基因序列设计等位基因特异性．聚合酶链反应（allele specific-polymerase chain reaction，AS-PCR），用于DEL表型的基因分型。用已知RHD1227A多态性的样本和已知DEL表型的样本评价基因分型方法的灵敏度和特异性。结果表明：在50例RHD1227A阳性和50例RHD1227A阴性的Rh阴性样本中基因分型方法的灵敏度和特异性都是100％；在33例DEL阳性样本和89例DEL阴性的样本中，基因分型方法的灵敏度为100％，有2例样本血清学结果为阴性而基因分型结果为阳性，重新用血清学方法和序列分析方法复核这2例样本，发现2例都是血清学漏检，因而基因分型方法的特异性是100％。结论：设计的基因分型方法可以有效地鉴定浙江汉族Rh阴性人群中的DEE表型。     

应用血清学和分子生物学方法筛选浙江汉族人群中部分稀有血型

本研究探讨浙江汉族人群部分红细胞血型系统稀有表型的分布情况。利用血清学技术或分子生物学方法分别筛选H系统H-、MNS系统GPA-和s-、Rh系统Rhnull、Rhmod、D--、CCDEE和CCdEE、Gerbich系统GPC-、I系统i+、Lutheran系统Lub-、Kell系统k-和Jsb-、Duffy系统Fya-、Ok系统Oka-、Diego系统Dib-。利用尿素溶血试验筛选Kidd系统Jk(a-b-)表型。结果表明:1 618例献血者中检出1例Di(a+b-),1 007例献血者检出3例Fy(a-b+),633例Rh阴性献血者检出1例CCdEE。大规模筛选中未发现Jk(a-b-)、H-、GPA-、s-、GPC-、成人i+、Lub-、k-、Jsb-、Lub-和Oka-稀有血型。结论:在献血人群中发现Di(a+b-)、Fy(a-b+)、CCdEE稀有表型,提供了浙江汉族人群部分红细胞稀有血型的分布数据。