乙酰乳香酸抑制日本血吸虫虫卵肉芽肿形成及其机制的探讨

摘要：目的 探讨乙酰乳香酸（acetyl boswellia acid, ABA）抑制日本血吸虫虫卵肉芽形成及其作用机制。方法 6周龄SPF级C57鼠随机分成5组： A、B、C和D四组经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴20±2条,E组为未感染血吸虫尾蚴同期正常鼠。小鼠尾蚴感染21天后,A和B组分别腹腔注射ABA 280 mg/(kg?d)×20d、140mg/(kg?d)×20d,C组经腹腔注射溶剂环糊精280mg/(kg?d)×20d,D组感染后不加治疗。所有小鼠12周龄时处死取血收集血清,转氨酶试剂盒检测血清ALT、AST;ELISA法检测血清白三烯B4（LTB4）。取小鼠肝组织中叶组织固定、切片做苏木素-伊红（HE）染色,观察并测量肝虫卵肉芽肿面积,计算与正常肝组织的比值。结果A组ALT,AST和LTB4的水平均显著低于C和D组（P<0.05）,B组ALT,AST和LTB4的水平虽均低于C和D组,但无统计学差异（P>0.05）。A组虫卵肉芽肿面积与正常肝组织的比值均显著小于C和D组（P<0.05）,B组虫卵肉芽肿面积比值虽均小于C和D组,但无统计学差异（P>0.05）。结论 ABA对抑制血吸虫虫卵肉芽肿炎症有一定效果,实验结果说明ABA可降低LTB4的生成,是抑制肉芽肿炎症反应的机制之一。     

抗日本血吸虫单抗识别曼氏血吸虫表面蛋白的研究

【目的】 证明本实验室所制备的抗日本血吸虫表面蛋白(Sj29)的单克隆抗体可识别曼氏血吸虫表面蛋白(Sm29),拓宽抗Sj29单克隆抗体的用途,为今后研发检测血吸虫病的通用型试剂盒打下基础。 【方法】 通过基因工程技术和分子生物学技术扩增曼氏血吸虫表面蛋白基因(Sm29)并与T载体连接,连接产物转化至感受态细胞(大肠埃希菌),挑取单菌落,摇菌,提质粒双酶切鉴定,测序,再将测序正确的Sm29基因与真核表达载体pEGFP-C2连接,构建重组真核表达质粒,再将该重组质粒转染至真核细胞COS-1中表达,荧光显微镜观测转染效率。最后用蛋白质印迹技术和细胞爬片免疫组化两种方法验证抗Sj29单克隆抗体和兔日本血吸虫感染血清能否识别Sm29蛋白。 【结果】 经酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定显示,所得的条带的位置及大小均与目的基因的位置及大小相一致,并且目的基因测序结果的相似度为99%,其中1%突变的碱基为无义突变类型,对蛋白的表达没有影响。荧光显微镜下观察转染效率为30%~40%。用日本血吸虫表面蛋白(Sj29)和曼氏血吸虫表面蛋白(Sm29)分别作为一抗进行蛋白质印迹,其结果显示此株抗Sj29单克隆抗体均能识别上述两种蛋白,并且其识别日本血吸虫表面蛋白(Sj29)的位置位于20 kd左右,而其识别曼氏血吸虫表面蛋白(Sm29)的位置位于55 kd左右,这两种结果均符合预期结果。以抗Sj29的单克隆抗体和日本血吸虫感染的兔血清分别为一抗作免疫组化,其结果均呈阳性,其对照组分别以PBS和正常兔血清为一抗,结果均呈阴性。说明抗Sj29的单抗不仅可以识别Sm29蛋白,同时感染兔血清中的抗体也可以识别曼氏血吸虫表面蛋白(Sm29),进一步提高了以后研发检测血吸虫病通用试剂盒的可行性。 【结论】 抗Sj29单克隆抗体能识别Sm29蛋白,为今后研发检测血吸虫循环抗原的通用型试剂盒打下基础。     

紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子,分析其主要表位,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果经三轮筛选,共获20个阳性克隆,序列同源性分析表明其中有5种已知基因(GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶),6种未知基因,软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子,可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。     

多重聚合酶链反应用于人血小板抗原-2、-4、-5系统基因分型的研究

目的 建立用于检测人血小板抗原（HPA）,2、-4、-5系统基因型的多重聚合酶链反应（PCR）。方法 在一个反应体系中同时扩增HPA-2、-4、-5系统特异性目的基因片段。用琼脂糖凝胶电泳确定HPA-2、-4、-5系统基因型;再用多重PCR对75名健康的单采血小板者进行HPA-2、-4、-5系统基因分型,分型结果与PCR-序列特异性引物（PCR—SSP）获得的结果进行比较。结果 HPA-2、-4、-5系统分型的结果为：70名为2a／2a型,5名为2a／2b型;73名为4a／4a型,2名为4a／4b型;66名为5a／5a型,9名为5a／5b型。未发现2b／2b、4b／4b及5b／5b纯合子个体。多重PCR结果与PCR-SSP方法获得的结果一致。结论 多重PCR具有操作简便、快速、准确等特点,可以用于血小板血型抗原基因分型。     

重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断研究进展

目前,用于血吸虫病免疫诊断的最常用的抗原是成虫抗原和虫卵抗原,由于这两种粗抗原的成分复杂,且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应,血吸虫病诊断的特异性不高,生产的试剂不宜标准化。近年来,随着分子生物学的迅猛发展,很多生物学技术已经用于寄生虫学(病)研究。运用分子克隆等技术可以获得大量纯化的     

免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库基因的亚克隆与鉴定

目的 亚克隆免疫筛选日本血吸虫ｃＤＮＡ文库得到的基因。方法 在体外将血吸虫ｃＤＮＡ文库基因的ＰＣＲ产物和ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,转染大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经抗生素及呈色底物Ｘ－ｇａｌ粗筛,再用限制性内切酶及ＰＣＲ方法进一步鉴定。结果 成功地将文库中４个大小不同的日本血吸虫基因片段连接到载体中,获得４个重组子。结论 为可能编码保护性抗原的血吸虫基因测序和将其亚克隆入真核表达质粒奠定基础。     

色素性紫癜性皮病血浆血栓素B_2和前列环素的临床研究

目的：探讨血栓素B_2（TXB_2）和6-酮-前列腺素F_1（6－K－PGF_1）在色素性紫癜性皮病发病中的作用机制及其在防治中的可能影响。方法：采用酶联免疫吸附法对42例色素性紫癜性皮病及36例正常健康者进行血浆TXB_2和6K－PGF_1。测定。结果：色素性紫癜性皮病患者的血浆TXB_2增高,6－K－PGF_1降低,与正常对照比较有显著性差异（P＜0．05）。结论：TXB_2和6-K-PGF_(1α)平衡失调与该病的发病有一定的病理生理作用,了解其血浆浓度变化对该病的防治有一定临床意义。     

七年制医学生早期科研能力训练的探讨

现代医学的发展要求培养兼备临床综合知识和科学研究能力的高层次医学人才。然而,目前高等医学教育工作中,临床医学生的科研能力培养并未得到应有的重视。结合安徽医科大学实际,详细解析在基础医学阶段,对七年制医学生进行早期科研训练的有效途径和存在的问题。     

日本血吸虫重组SjTsp2/Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组,前两组各10只,空白对照组9只。蛋白疫苗组,第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白,第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白,免疫方法同前。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠,计算减虫率和减卵率。眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型,同时检测血清细胞因子γ干扰素( IFN-γ)、白介素4( IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较,减虫率和减卵率显著升高( P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义( P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组( P<0.01)。结论日本血吸虫 Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性;该重组蛋白免疫引起的是 Th1/Th2混合型免疫反应。