三氧化二砷对胃癌细胞杀伤作用的初步研究

三氧化二砷对胃癌细胞杀伤作用的初步研究顾琴龙１纪玉宝１陈雪华１沈佰华２朱正纲１尹浩然１林言箴关键词三氧化二砷胃癌细胞作者单位：１．上海第二医科大学附属瑞金医院外科（上海２０００２５）２．上海市免疫研究所近几年来，继全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导分化治疗...     

中国猪种DQA新等位基因的克隆和分析

目的：克隆和序列分析中国猪种DQA基因cDNA，为猪异种器官移植的免疫识别机理的研究提供基础。方法：采用RT-PCR方法扩增广西巴马猪(GXP)、贵州香猪(GZP)及云南小耳猪(YNP)DQA基因cDNA，克隆入测序载体，然后进行测序及其序列分析。结果：获得具有阅读框架的3个结构和已有序列不同的DQA新等位基因(GXPDQA、GZPDQA和YNPDQA)，基因序列号分别为AY102473，AY102474和AY102475，其长度分别为765、768和768个核苷酸，除末端终止密码外，分别编码254、255和255个氨基酸残基。结论：发现了3个猪DQA新等位基因，同时发现中国猪种DQA基因及其推导的氨基酸与人相应基因的同源性职显高于小鼠。     

类风湿关节炎患者自身反应性T细胞受体氨基酸序列研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者体内自身反应性T细胞的抗原瓦补区3（CDR3）的序列特性。方法 采用实时定量聚合酶链反应（PCR）的方法扩增带有BV14和BV16的自身反应性T细胞抗原受体β链，用基凶扫描的方法分析抗原互补区3的片断长度，用序列测定的方法分析CDR3的氨基酸序列。结果 RA患者关节滑膜浸润T细胞呈寡克隆扩增，带有BV14和BV16的自身反应性T细胞分别收用不同VDJ片段组合，自身反应性T细胞CDR3长度有15bp、21bp和24bp三种形式，在不同患者自身反应性T细胞CDR3中发现相同氨基酸序列。结论 RA患者自身反应性T细胞在病灶部位受到某些抗原的驱动而发生受体取用的偏移和CDR3的特异性扩增。     

DNA断端标记法分析HL—60和U937白血病细胞株凋亡

使用DNA断端标记法（TDT法）定量观察了白血病细胞株HL－60和U937对顺氯氨铂，羟基喜树碱，长春新碱3种抗肿瘤药物所发生的凋亡变化。HL－60对顺氯氨铂很敏感。U937对羟基树碱、长春新碱敏感。比较了核酸电泳检测的结果。并首次报道了用TDT法在荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的三种不同形态。     

人Fas配体蛋白在大肠杆菌中的融合表达与应用

目的：在大肠杆菌中融合表达人Fas配体蛋白。方法：应用RT-PCR技术，从激活的人外周血淋巴细胞中提取总RNA，扩增Fas配体cDNA，克隆入PCR2.1载体，测序验证后，克隆入带有组氨酸盒的表达载体pQE-31，在大肠杆菌中表达，经亲和层析柱纯化后，用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果：表达的融合蛋白为人Fas配体，其相对分子质量（Mr)为40000。；经透析复性后，具有诱导Jurkat细胞凋亡的作用，用该蛋白分子免疫BALB/c小鼠制备抗血清，以间接ELISA检测了部分自身免疫病与肿瘤患者血清中可溶性的F 苛的含量。结果与进口试剂盒的灵敏性相似。结论：获得FasL单克隆抗体，深入研究FasL的应用提供了材料。     

环磷酰胺和嗜水气单胞菌对暗纹东方免疫抑制的研究

对暗纹东方分别注射 8、 0 8、 0 0 8mg/kg·bw的环磷酰胺 ,5d一次 ,连续 3次 ,并与一次性注射嗜水气单胞菌 (1× 1 0 5CFU/kg·bw )相比较 ,研究其对暗纹东方免疫功能的影响。结果显示 ,注射适当浓度的环磷酰胺和嗜水气单胞菌可明显减弱暗纹东方肝胰脏溶菌酶活性、脾脏NK细胞杀伤率、脾脏B淋巴细胞转化能力 ,显著降低白细胞吞噬指数和血清干扰素 (IFN α )含量 (P <0 0 5 )。选择 8mg/kg·bw环磷酰胺和 1× 1 0 5CFU/kg·bw的嗜水气单胞菌作为注射浓度可以抑制暗纹东方的免疫功能。相比之下 ,在试验范围内 ,环磷酰胺对暗纹东方免疫能力的抑制程度更大 ,范围更广 ,稳定性更好。     

自体角质形成细胞在混合皮肤移植中诱导免疫抑制

目的 探索混合皮肤移植中,自体皮岛诱发移植免疫耐受的免疫机制,方法 在体外建立混合表皮淋巴细胞（MELC）培养体系,以反映移植受者对皮肤移植物的免疫排斥反应,同时,将自体表皮细胞引入已建立的混合表皮淋巴细胞培养体系,以模仿混合皮肤移植中的自体皮岛效应,并分析发挥抑制效应的细胞来源,结果 自体角质形成细胞可抑制淋巴细胞对同种异体抗原的增殖,结论 自体皮岛中的角质形成细胞参与对同种异体抗原的的呈而诱导移植物耐受。     

人特异性T细胞系间接识别猪抗原

SLA (swineleukocyteantigen )特异性CD4+T细胞系和自身APC以及猪PBMC共同孵育时 ,T细胞增殖反应很强 ,而同仅有自身APC或猪PBMC刺激时的T细胞增殖有显著差异。提示抗原特异性CD4+T细胞系以间接途径识别SLA抗原。该识别能被抗人CD4和HLAII类抗体阻断 ,而抗SLAII类抗体阻断作用很弱 ,表明HLAII类分子在间接识别中起重要作用 ,这一结果不同于直接从外周血中分离的未经抗原致敏的T细胞。直接识别猪APC递呈的抗原。有可能异种移植初期以直接识别为主导 ,随着移植物存活时间的延长逐渐转为间接识别     

外源性CYR61基因转染与整合素分子表达的关系

目的探讨外源性CYR61在人外周血单个核细胞(PBMC)中表达后诱导其配体——整合素表达上调的生物学特性。方法构建人源全长CYR61真核重组表达质粒pcDNA-CYR61-Fc,经DNA测序确认其序列正确后,将该质粒转染COS7细胞并用蛋白免疫印迹实验检测其蛋白的表达;用脂质体法转染人PBMC,实时定量PCR检测CYR61表达量和相关整合素的表达格局。结果测序显示所构建的CYR61重组表达质粒序列正确;将该质粒转染COS7细胞后,免疫印迹实验表明转染的细胞胞浆和营养液上清中都含有CYR61-Fc融合蛋白;将该质粒转染人PBMC,经植物凝集素刺激后,外源性CYR61迅速表达,24 h后表达量达到高峰,然后迅速下降,48 h后基本回落,整合素分子αv、αM、β3及β5表达明显上调(P<0.05),以β5最为显著(P<0.01)。结论成功构建的pcDNA-CYR61-Fc真核表达质粒能有效地表达和分泌CYR61-Fc融合蛋白;表达的融合蛋白通过自分泌或旁分泌途径上调PBMC整合素分子的表达。     

Cyr61、TNF-α、IL-6和IL-1β与颈动脉损伤后再狭窄的关系

目的 探讨富含半胱氨酸61蛋白(Cyr61)及组织炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β与颈动脉损伤后再狭窄发生的关系.方法 36只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组(n=18).模型组大鼠经2F Fogarty球囊导管损伤左颈总动脉建立颈动脉血管成形术模型,分别于建模后1、4、7、14、28 d和3月取材,观察血管壁组织的病理学改变;免疫组化和Real-time PCR技术检测血管壁组织中Cyr61、TNF-α、IL-6和IL-1β的表达变化;ELISA法测定血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平.结果 球囊损伤后血管壁新生内膜在术后7 d出现,术后28 d时达到高峰;形成的新生内膜厚度不均,较对照组明显增厚(P<0.01);大鼠颈总动脉损伤后,血管壁组织Cyr61、TNF-α、IL-6和IL-1β表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);而血清炎症因子水平无明显变化.结论 大鼠颈总动脉球囊损伤后血管壁Cyr61、TNF-α、IL-6和IL-1β表达明显增强,提示Cyt61可能与炎症因子相互协同作用,使血管壁组织增生而最终导致再狭窄的发生.