黄柏胶囊与抗生素的体外联合抗菌作用研究

目的研究黄柏胶囊的体外抗菌及与抗生素联合抗菌作用,为拓展临床使用奠定实验基础。方法运用微量液体稀释法检测黄柏胶囊对常见病原性细菌和单细胞真菌的最小抑菌浓度（MIC）。采用棋盘格法检测黄柏胶囊与不同抗生素及抗真菌药物对常见病原性细菌和单细胞真菌的MIC,并计算出FIC指数。结果黄柏胶囊对金黄色葡萄球菌（MIC=2．5g／L）和大肠埃希菌（MIC=12．5g／L）,以及单细胞真菌（MIC=2．5g／L）具有较好的抑制作用。黄柏胶囊与林可霉素联合用药后对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌、及与头孢曲松联合用药对肺炎克雷伯菌的抗菌作用,与阿米卡星联合用药的抗菌作用表现为拮抗作用外,黄柏胶囊分别与头孢曲松、阿米卡星、林可霉素联合用药后对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌联合用药的抗菌作用均表现为协同作用（FIC：0．1～0．506）。黄柏胶囊与氟康唑联合用药后对白假丝酵母菌和新生隐球菌均表现为协同作用（FIC：0．314）。结论黄柏胶囊对部分病原性细菌和单细胞真菌具有较好的抑制作用,与抗菌药物联合应用时主要表现出协同抑菌作用,为临床中西药联合使用黄柏胶囊提供了实验依据。     

小鼠β-防御素3的原核表达、表达条件优化及其抗菌活性

目的 运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素3(MBD3),优化表达条件,并研究其抗菌活性.方法 通过反转录PCR方法从小鼠肺组织中扩增Mbd3基因,构建其原核表达质粒,将该质粒转入大肠埃希菌表达菌株Rosetta-gami(2).优化融合蛋白的表达条件.通过亲和层析、凝血酶酶切、超滤浓缩得到MBD3的重组成熟肽(rMBD3),并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和Western blot鉴定其正确性.采用微量液体抗菌实验检测rMBD3对多种常见病原性细菌和真菌的抗菌活性.结果 获得表达MBD3融合蛋白(fMBD3)的工程菌,fMBD3的表达量可达菌体总蛋白的62.9％,可溶性fMBD3约为1.15 g/L.纯化的rMBD3对单细胞真菌和革兰阳性菌显示出较好的抑菌活性.结论 rMBD3具有一定的抗菌活性,为进一步研究该多肽的其他生物学活性及其应用提供参考依据.     

细胞壁缺陷对伤寒沙门菌苹果酸脱氢酶活性影响的实验观察

目的 了解细胞壁缺陷对伤寒沙门菌苹果酸脱氢酶（MDH）活性的影响。方法 采用分光光度法检测伤寒沙门菌及其细胞壁缺陷突变株的苹果酸脱氢酶（MDH）的活性。结果 伤寒沙门菌具有明显的MDH活性,其反应A值于20分钟时达最高峰;细胞壁缺陷株的MDH活性明显降低。其反庆A值于60分钟时达到最高峰,且峰值小于细胞型所得峰值。结论 伤寒沙门菌具有较高的MDH活性,细胞壁缺陷可使其MDH的活性显著降低。     

甲型流感病毒M2e与CtB基因融合表达及其免疫特性初步研究

目的: 构建真核表达重组质粒pcDNA3.1a( )-M2e/CtB, 并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性.方法: 重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因, 将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1a( )中, 再转化E.coli JM109.将酶切鉴定、 PCR扩增及序列鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1a( )-M2e/CtB.用KEGEN TRANS Ⅲ阳离子聚合物将重组质粒pcDNA3.1a( )-M2e/CtB转染NIH3T3细胞, 经免疫荧光、 RT-PCR产物序列分析、 Western blot检测其稳定表达产物.结果: 重组质粒pcDNA3.1a( )-M2e/CtB含完整的M2e和CtB基因, 与相对应基因的序列同源性分别为100%.重组质粒转染NIH3T3细胞后获得了有效表达, 并且稳筛株细胞裂解物和上清均能用抗霍乱毒素抗体和抗流感病毒抗体检测到Mr约18 000的蛋白条带.结论: 成功构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1a( )-M2e/CtB, 初步证明其在体外表达的重组蛋白可分泌至胞外, 且有M2e和CTB的双特异反应原性和免疫原性, 为流感病毒核酸疫苗的进一步研究奠定了坚实基础.     

不同剂量野百合碱联合异丙肾上腺素对大鼠血流动力学变化及心指数、右心肥厚指数研究

目的研究不同剂量野百合碱联合异丙肾上腺素对大鼠血流动力学变化及心指数、右心肥厚指数。方法采用SD大鼠64只,雌雄各半,体重200~250 g,随机分为空白对照组(n=16);模型组(n=48)。模型组分为高剂量组(n=16):80 mg/kg野百合碱采取腹腔一次性注射;10 mg/kg异丙肾上腺素采取腹腔连续注射1周;中剂量组(n=16):55 mg/kg野百合碱采取腹腔一次性注射;8 mg/kg异丙肾上腺素采取腹腔连续注射1周;低剂量组(n=16):30 mg/kg野百合碱采取腹腔一次性注射,3 mg/kg异丙肾上腺素采取腹腔连续注射1周。动物饲养到第6周后,行肺动脉压和右心室内压检测,心系数和右心室肥厚指数测定。结果与对照组比较,低剂量平均肺动脉压和右室收缩压均无差异变化;中剂量组平均肺动脉压、右室收缩压均有差异变化(P0.05),低剂量组心系数和右心室肥厚指数均无差异显著。中剂量组心系数差异极显著(P0.01),右心室肥厚指数差异显著(P0.05)。结论说明采用一次性注射野百合碱55 mg/kg,联合连续注射8 mg/kg异丙肾上腺素1周。既保证了大鼠的存活率,又保证了肺动脉高压的成功形成,野百合碱和异丙肾上腺素能对大鼠产生肺动脉高压,导致心气虚弱。