中国人前列腺特异性膜抗原基因的克隆及鉴定

【目的】克隆中国人前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen，PSMA)的cDNA全长，并将其连接到原核表达载体pET-30(a)，构建PSMA的原核表达重组子。【方法】从前列腺癌患者活检组织中提取RNA，利用PSMA的cDNA中的EcoR I位点，将PSMA分成两段分别做RT-PCR，然后再将其分别连接到pET-30(a)中，从而得到完整PSMA的cDNA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA，并对其进行鉴定。【结果】首次成功克隆到全序列的中国人PSMA的cDNA，并构建了PSMA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA，为以后的PSMA表达、纯化及其抗体库的筛选奠定了基础。【结论】分段克隆基因，然后将基因分别连接到同一载体，是有效地对一些长片段基因进行克隆的方法之一。     

异种膀胱无细胞基质替代尿道的研究

目的探讨异种膀胱无细胞基质(ACM)管状替代尿道的可行性。方法19只成年雄性新西兰白兔分成3组：A组3只，为假手术对照组；B组10只，切除一段1．0cm尿道；C组6只，切除一段3．5～4．0cm尿道，之后应用已经事先制备好的异种膀胱ACM制成相当长度的管状替代被切除的尿道。术后1、2、4、8、16周动态观察替代尿道的尿道上皮、平滑肌和血管的再生情况。结果所有实验动物在术后7d拔除尿管后都恢复了自主排尿，没有排斥、尿瘘、感染等并发症发生。组织学检查显示实验组术后2周尿道上皮再生良好，4周完全覆盖尿道内腔，术后8周平滑肌见于近吻合口处，平滑肌生长缓慢，观察期内未能覆盖全长尿道。尿道造影未见明显尿道狭窄和憩室。结论异种膀胱ACM是一种良好的尿道修复和替代的材料。     

构建PSMA shRNA慢病毒载体转染293T细胞后PSMA mRNA和蛋白的表达变化

目的：利用基因工程技术筛选获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP中前列腺癌特异性膜抗原 (PSMA) 表达的shRNA序列，并构建慢病毒载体。观察转染前列腺癌细胞后对PSMA mRNA和蛋白表达的影响。方法：〖HTSS〗根据PSMA基因信息，设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对PSMA基因cds区的siRNA序列，组建shRNA对应的4对互补的单链DNA，包括siRNA的正义链和反义链；正义链序列按5向3顺序依次为：酶切位点（BamHⅠ）、干扰序列（19 bp）、loop环（TTCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19 bp）、终止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoRⅠ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA vector中，转染前列腺癌细胞后，通过real-time PCR检测对PSMA mRNA表达，通过Western blotting检测PSMA蛋白的表达。结果：〖HTSS〗设计的3条针对PSMA的序列中第2条的抑制效果最好，目的序列位于PSMA（NM_004476）的1207到1226，茎环序列为5-GATCC GTCTCAAAGTGCCCTACAA TTCAAGAGA TTGTAGGGCACTTTGAGAC TTTTT G-3。其对前列腺癌细胞株中PSMA mRNA表达的抑制率为60%，对PSMA蛋白表达的抑制率为86%。转染细胞后，细胞可以稳定低表达PSMA。结论：〖HTSS〗成功获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP PSMA表达的shRNA序列，并构建慢病毒载体，pSIH-PSMA-siRNA2转染前列腺癌细胞后对PSMA mRNA 表达的抑制率为60%，对PSMA蛋白表达的抑制率达86%。为后期研究PSMA在前列腺癌发病中的作用机制以及免疫导向治疗等提供了实验基础。     

保留前列腺包膜的膀胱全切除-原位回肠新膀胱术

目的探讨保留前列腺包膜的膀胱根治性切除一原位回肠新膀胱术的手术方法及疗效。方法2002年5月至2008年9月,对35例浸润性膀胱癌患者施行了保留前列腺包膜的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术,其中开放手术22例,腹腔镜手术13例。术中保留患者的前列腺包膜、精囊、输精管、神经血管束。术后对患者进行定期随访,了解患者的生活质量、排尿情况,并检测患者的残余尿量、新膀胱压力及性功能情况等。结果全部患者均顺利完成保留前列腺包膜和勃起神经的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术。其中开放手术时间为210～330min,平均271min;术中出血200-800ml,平均460ml。腹腔镜手术时间为210-420min,平均343min;术中出血80-800ml,平均377ml。术后3个月IVU及代膀胱造影检查,显示双肾显影良好,无输尿管返流及梗阻,代膀胱充盈良好,容量约250-350ml。术后6个月随访,所有患者均能自行排尿,2例患者有夜间尿失禁。术后71．4％（20／28）的患者保留了阴茎勃起功能。无患者出现尿道残端或前列腺包膜肿瘤复发,有2例发生盆腔淋巴结转移,1例骨转移。结论保留前列腺包膜的膀胱根治性切除术与标准的膀胱前列腺根治性切除术相比,具有操作简单、控尿效果好、可保留勃起神经等特点,适用于对性功能要求较强、肿瘤未累及膀胱颈及前列腺的较年轻的患者。然而,其肿瘤控制效果坏有待于讲一彤观察．     

间质性膀胱炎治疗方案选择

目的 探讨间质性膀胱炎各种治疗方案的可行性及其疗效.方法 对57例间质性膀胱炎患者的病例资料进行分析,其中29例患者行口服药物治疗,21例患者进行了口服药物与膀胱灌注治疗,5例患者行膀胱液压扩张与膀胱逼尿肌内注射肉毒毒素A,2例患者行尿流改道术治疗,通过对不同治疗方案的疗效进行对比,对间质性膀胱炎的治疗方案进行总结.结果 行口服药物治疗和膀胱灌注的患者有34例(68%)症状缓解或部分缓解,患者生活质量明显提高,疼痛缓解,尿频症状也部分缓解,排尿间隔时间明显延长.5例行膀胱液压扩张与膀胱逼尿肌内注射肉毒毒素A的患者,术后疼痛完全缓解,尿频症状也部分缓解,排尿间隔时间明显延长,膀胱容量与术前相比明显增大,达到180～270 ml.到目前为止,5例患者均可以正常学习、工作.1例患者术后6个月后尿频、尿痛症状有所反复;1例患者术后出现排尿无力;但是较术前生活质量明显提高,并不影响正常工作与生活.行尿流改道的患者无并发症发生,尿频、尿痛等IC相关症状完全消失.结论 膀胱液压扩张与口服药物或膀胱灌注治疗是间质性膀胱炎治疗的常规方案,多数患者可取得一定效果;膀胱黏膜下和逼尿肌内注射肉毒毒素A是治疗间质性膀胱炎是一种新的有效、安全、简单的治疗方法,对口服药物和膀胱灌注无效的患者可试用,对改善患者膀胱区疼痛具有良好效果;膀胱切除尿流改道是间质性膀胱炎治疗的最终方案,可完全缓解尿频、尿急、膀胱区疼痛的症状,但是患者生活质量相对较差.     

腹部脏器损伤合并肾损伤的诊治分析(附32例报告)

目的 提高腹部脏器损伤合并肾损伤的诊治效果。方法 回顾分析32例腹部脏器损伤合并肾损伤的诊治资料。结果 治愈28例,死亡4例。8例在剖腹手术中未切开后腹膜探查肾损伤,切开后腹膜行肾探查引流5例,肾修补5例,肾部分切除7例,肾切除7例。结论 准确进行伤情评估,早期诊断及恰当处理合并伤,是提高腹部脏器损伤合并肾损伤疗效的关键。     

MALAT1对膀胱癌UMUC3细胞功能的影响及下游基因的筛选

【摘要】目的 研究MALAT1对膀胱癌UMUC3细胞系增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力的影响,探讨MALAT1在膀胱癌中的作用机制。方法 化学合成针对MALAT1的siRNA,脂质体法转染UMUC3细胞。反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定转染效率,MTS法检测增殖变化,Transwell法检测迁移、侵袭改变,克隆形成实验观察克隆形成能力变化,5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)法检测增殖及周期改变,基因芯片筛选潜在作用通路。结果 干扰MALAT1表达后,膀胱癌UMUC3细胞株增殖、侵袭、迁移、克隆形成能力下降,基因芯片结果发现肿瘤通路相关基因MMP9等明显改变。 结论 MALAT1促进UMUC3膀胱癌细胞的增殖、侵袭、迁移、克隆形成能力,提示可能与其引起肿瘤通路相关基因的激活和失活相关。     

护士长素质与护理管理技巧

护理管理学既属于护理学,又属于管理学的分支学科范围。护理管理是一种行为过程,是护理管理者为了实现管理目标,采用一定的组织形式和方法,指挥、协调和控制被管理者完成预定护理目标的一种活动过程。作者参考有关文献结合多年的工作经验就护士长应具备的素质,护理管理中应注意的技巧探讨如下:     

针式腹腔镜精索内静脉结扎术

目的:探讨针式腹腔镜行精索内静脉结扎术的手术方法和效果。方法:行针式腹腔镜精索内静脉结扎术72例,双侧33例,左侧39例,共105侧。采用硬膜外复合静脉麻醉,分别于下腹正中线作2个2 mm切口,1个5mm切口,利用结扎速血管闭合系统凝闭精索内静脉。结果:72例顺利完成手术,平均手术时间单侧15 m in,双侧21 m in,术后住院3~5 d。术后随访6~12个月,未见复发。结论:针式腹腔镜精索内静脉结扎术效果确切,创伤小,恢复快,是治疗原发性精索静脉曲张的较好选择。