稳定阻断前列腺癌细胞中p65的shRNA基因序列的获得及蔓病毒载体的构建

目的 获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中核因子[NF-κB(p65)]表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3 3条针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH Ⅰ)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19 bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将合成的序列插入空载体pSI H1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time聚合酶链反应(PCR)检测不同序列片段对p65的mRNA抑制效果,通过Western blot检测对p65蛋白表达的抑制效果.从而获得可以稳定高效抑制前列腺癌细胞中p65表达的shRNA序列.结果 设计的3条针对p65的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于p65(NM_021975)的1096～1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中p65的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中p65表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.     

膀胱癌细胞株T24中侧群细胞的分离和功能鉴定

目的 观察膀胱癌细胞株T24中是否存在侧群(SP)细胞及其比例,并鉴定其功能.方法 利用双波长流氏细胞仪(FACS)检测T24中SP细胞的比例,并证实这些SP细胞是否具有癌干细胞的特点.结果 T24中SP细胞占34.7%;与非侧群(NSP)细胞比较,SP细胞有更强的生长增殖能力和克隆形成能力(P＜0.05),表达更高的ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和干性基因,对放化疗有更强的抵抗能力,有更多的细胞处于G_0/G_1期(87.4%比63.3%,P＜0.05);分选后的sP和NSP细胞经过约10 d的常规培养,SP细胞中NSP的比例占76.2%,而NSP细胞中SP的比例只占2.6%.结论 膀胱癌细胞株T24中存在很高比例的SP细胞,而且这些SP细胞有癌干细胞的特点.     

荆感胶囊中胡薄荷酮的溶出度研究

目的 考察荆感胶囊中胡薄荷酮的溶出行为.方法 采用HPLC法,色谱条件为色谱柱,汉邦Megres3 C18柱(4.6mm× 150 mm,5μm);流动相CH3OH-H2O(90∶10);检测波长252 nm;体积流量1 mL/min;筛选出溶出度测定条件;计算并绘制胡薄荷酮的累积溶出曲线.结果 溶出度测定条件为采用浆法,转速100 r/min,以0.3％ SDS溶液900mL为溶出介质.荆感胶囊中胡薄荷酮的溶出量45 min达到70％以上.结论 荆感胶囊中胡薄荷酮溶出度良好.     

经尿道前列腺汽化电切术治疗高龄高危前列腺增生症56例临床分析

目的 总结经尿道前列腺汽化电切术(TUVP)对高龄高危良性前列腺增生症(BPH)的疗效和安全性.方法 对56例高龄高危BPH患者行TUVP手术.总结手术中的技巧以及手术后并发症.对比观察手术前、后国际前列腺症状评分、残余尿量、最大尿流率等指标的差异.结果 手术时间40～100 min,平均55 min;切除腺体重20～80 g,平均48.5 g;术中出血量50～150 ml,平均100 ml.平均随访12个月,患者国际前列腺症状评分由(27.5±3.0)分降至(8.9±2.9)分,残余尿量由(280±30)ml降至(28±10)ml,最大尿流率由(8.7±3.8)ml/s升至(21.2±6.7)ml/s.2例由于其他基础疾病死亡,1例出现尿道狭窄经门诊行尿道扩张后治愈.结论 TUVP可作为治疗高龄高危BPH患者安全有效的方法.     

芳基三氮烯甲氧嘧啶选择性抗小鼠Lewis肺癌转移的作用

本实验对比研究了芳香三氮烯甲氧嘧啶(ATMP)和环磷酰胺(CY)对小鼠Lewis肺癌的作用。ATMP在不影响原发瘤生长的同时,可明显减少自发性转移的发生,而CY对原发瘤及转移瘤都有抑制作用。³H-TdR部分参入实验证明,ATMP对Lewis肺癌的细胞毒作用很弱。ATMP对人工转移无影响;提前给药不影响自发性转移;不改变小鼠腹腔巨噬细胞Fc受体的活力。上述实验提示,ATMP具有选择性的抗转移作用,其作用环节可能是抑制肿瘤细胞从原发部位的脱落以致不能进入血液循环。     

牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡差异表达mRNA的生物信息学分析

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)W83与ATCC33277外膜囊泡mRNA表达谱的差异.方法 超速离心法分离W83和ATCC33277来源的外膜囊泡,进行粒径检测、电镜及Western blot鉴定;高通量测序检测W83和ATCC33277外膜囊泡mRNA表达谱,筛选差异表达的mRNA,进行基因本体...     

中药复方天仙丸对小鼠肿瘤转移的抑制作用

本文研究了中药天仙丸的抗转移作用。结果表明,天仙丸有抗小鼠LA-795肺腺癌自发性转移的作用,对U14肿瘤人工转移也有抑制作用,截肢切除原发瘤加用天仙丸可有效地阻止肺转移的发生。     

普萘洛尔抑制前列腺癌发展的分子机制

目的探讨普萘洛尔抑制前列腺癌发生、发展的分子机制。方法采用Real-Time qPCR检测miR-382和SETD8 mRNA的表达,Western blotting检测细胞内SETD8、p53、p21、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和Caspase 9)和转移相关蛋白(N-cad、E-cad和Vimentin)的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,双荧光素酶报告基因系统检测miR-382对SETD8的靶向调控作用,Transwell侵袭实验检测细胞迁移能力,构建荷瘤小鼠动物模型验证普萘洛尔在动物体内对前列腺癌的抑制作用。结果 miR-382在前列腺癌组织和细胞中显著下调,而SETD8显著上调,两者呈负相关。普萘洛尔能够通过miR-382调控SETD8/p53/p21通路,抑制前列腺癌细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡,延长荷瘤小鼠存活时间。结论普萘洛尔能够通过miR-382/SETD8/p53/p21分子轴抑制前列腺癌的发展和转移。     

Rezūm热蒸汽消融系统治疗良性前列腺增生的安全性和有效性

目的探讨Rezūm热蒸汽消融系统治疗良性前列腺增生(BPH)的有效性和安全性。方法回顾性分析2020年12月至2021年1月在海南博鳌一龄生命养护中心收治的22例BPH患者的临床资料。年龄(61.0±5.9)岁。前列腺体积(43.7±8.4)ml。国际前列腺症状评分(IPSS)(19.3±3.7)分, 生活质量(QOL)评分(4.2±0.8)分。最大尿流率(Qmax)(11.9±3.4)ml/s, 残余尿量(PVR)(14.0±19.0)ml。19例有性生活者, 术前国际勃起功能指数问卷表-5(IIEF-5)(17.0±5.5)分;男性性健康问卷-射精功能障碍评分(MSHQ-EjD)中射精功能评分(10.0±3.2)分, 射精满意度评分(1.5±1.0)分。22例均采用Rezūm热蒸汽消融系统行经尿道前列腺热蒸汽消融术。Rezūm系统由可重复使用的热蒸汽治疗设备和一次性前列腺热蒸汽治疗器械组成。热蒸汽治疗设备利用射频能量将无菌蒸馏水加热, 产生103℃高温水蒸汽, 在9 s的时间里将每个治疗区域内的组织温度提高约70℃, 导致细胞死亡, 从而使前列腺组织体积缩小。一次性前列腺热蒸汽治疗...