GLDC基因复合杂合突变致非经典型非酮性高甘氨酸血症家系的临床和遗传学分析

非酮性高甘氨酸血症(NKH)是由甘氨酸裂解系统缺陷引起的常染色体隐性遗传疾病,分经典型和非经典型,而非经典型表现复杂多样,诊断较为困难。该文报道1个NKH家系,父母表型正常,兄妹均非新生儿期起病,哥哥表现为难治性癫癎、严重的双侧痉挛性瘫痪和智力低下,血和脑脊液的甘氨酸浓度增高,尿甘氨酸与肌酐的比值增高,脑脊液与血甘氨酸浓度的比增高;妹妹表现为语言发育迟缓、共济失调、舞蹈病和发热诱发的精神行为异常和肌张力减退,脑脊液甘氨酸浓度增高、脑脊液与血甘氨酸浓度比增高。高通量测序提示兄妹均存在GLDC基因母源c.3006CG(p.C1002W)错义突变和父源c.1256CG(p.S419X)无义突变,生物学软件预测均提示致病突变。转染两种突变体GLDC基因的H293T细胞甘氨酸脱羧酶活性均有下调。NKH表型多样,二代高通量测序有利于疑似病例的确认,非经典NKH与基因突变导致的甘氨酸脱羧酶活性下调相关。     

慢性粒细胞白血病疾病转化及停药的研究进展

自BCR-ABL融合基因的鉴定和针对性的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)问世后,慢性粒细胞白血病(CML)患者已经在慢病化的道路上“行走”了约二十年。近年来,二代、三代TKI为CML患者的长期生存提供了进一步的保障。但TKI停药和少数TKI耐药或携带不良预后基因患者的预后情况仍是CML相关研究的热点问题。文章对2020年第62届美国血液学会年会上关于CML研究进展的报道作一介绍。     

下调NPM基因表达对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的抑制作用研究

目的:运用RNA干扰技术抑制核仁磷酸蛋白(NPM)的表达,研究NPM基因在慢性髓系白血病细胞株(K562细胞)增殖中的作用及其机制。方法:采用shRNA抑制NPM的表达,应用实时荧光定量PCR技术检测NPM基因的表达,MTS法检测抑制NPM基因对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的改变,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:成功构建了针对NPM基因的shRNA慢病毒载体,并感染K562细胞。检测结果显示,与对照组相比较,抑制K562细胞NPM基因的表达可以抑制细胞的增殖,减少细胞集落形成。干扰NPM基因可使G0/G1期延长,细胞周期阻滞,这可能与下调NPM基因后激活p21蛋白的表达,进而抑制CDK2/Cyclin E复合物形成有关。结论:下调K562细胞NPM基因的表达,可以通过诱导细胞周期阻滞抑制K562细胞的增殖。     

miR-155表达与FLT3-ITD+急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及机制研究

目的:研究miR-155的表达与FLT3-ITD⁺急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及潜在的调控机制。方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑工具在FLT3-ITD⁺AML细胞系MV411中实现miR-155编码基因敲除,筛选单克隆细胞,PCR及Sanger测序鉴定单克隆细胞的基因型,实时荧光定量逆转录PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。MTT法计算半数抑制率,比较MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼以及米哚妥林的药物敏感性。转录组测序分析miR-155敲除后MV411细胞mRNA水平的变化,基因集富集分析获得miR-155敲除后的信号通路的变化水平,Western blot验证信号通路关键分子的表达。结果:通过PCR初筛和Sanger测序获得了4个基因敲除的杂合子和1个基因插入的杂合子。实时荧光定量逆转录PCR结果显示,这些单克隆细胞中成熟miR-155的表达显著低于野生型克隆。MTT结果显示,与野生型相比,miR-155基因敲除后MV411细胞对多种抗FLT3-ITD⁺AML的药物敏感性有了显著增加。RNA测序显示m...     

癫(癎)诱发后CB1受体在睡眠剥夺大鼠海马表达的研究

目的探讨癫痫诱发后大麻素CB1受体在睡眠剥夺大鼠海马的表达变化及其意义。方法50只Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫诱发前和癫痫诱发后2组,每组25只。每组大鼠又随机分为空白对照组（CC）,环境对照组（TC）和睡眠剥夺1d、3d、5d组（SD1d、SD3d、SD5d）。用改良多平台睡眠剥夺法建立快速眼球运动（REM）睡眠剥夺模型,戊四氮诱发癫痫。应用RT-PCR方法检测癫痫诱发前后大麻素CB1受体mRNA表达,并电镜观察其海马的超微结构改变。结果SD1d组神经元轻度固缩,染色质轻度边聚,SD3d组神经元凋亡,SD5d组超微结构改变基本同SD3d组。癫痫诱发后发现CC组与TC组大鼠无抽搐,CB1受体mRNA表达较癫痫诱发前明显升高（P〈0．01）。SD1d、SD3d、SD5d组大鼠抽搐严重,CB1受体mRNA表达与癫痫诱发前相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论睡眠剥夺能够造成神经元凋亡,影响大麻素CB1受体mRNA表达。大麻素CB1受体表达增高可能是一种自身稳定调节的保护机制,能抑制癫痫发作。     

RNA测序联合CRISPR/Cas9基因编辑技术鉴定调控维甲酸诱导分化功能的miRNA

目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定具有诱导分化功能的miRNA.方法:首先应用miRNA测序技术分析ATRA作用后miRNA的变化水平.选取上调和下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现mi...     

宫内感染致脑损伤对仔鼠认知发育和海马神经发生的影响

 目的:探讨宫内感染致仔鼠脑损伤后对认知发育和海马神经发生的影响。方法: 15只Sprague-Dawley孕鼠（孕15 d）按随机数字表法分为造模组（8只）和对照组（7只）。繁殖后的2组雄性仔鼠按随机数字表法分为宫内感染组（35只）和对照组（35只），进行大脑解剖学观察、神经细胞凋亡检测、Morris水迷宫实验、神经细胞增殖及存活分析。结果: （1）宫内感染组仔鼠大脑较对照组萎缩，TUNEL阳性细胞数和caspase-3阳性细胞数均较对照组显著增加 (P<0.05)。（2）宫内感染组仔鼠近期记忆及远期记忆保持能力均较对照组降低，潜伏期显著延长（P<0.05）。（3）细胞增殖分析显示宫内感染组3 、7 和14日龄仔鼠BrdU阳性细胞数较对照组显著增加（P<0.05）；细胞存活分析显示，28日龄的2组仔鼠BrdU阳性细胞数无显著差异（P>0.05）。结论: 宫内感染可致仔鼠脑损伤，海马神经细胞凋亡可能与认知发育障碍密切相关。宫内感染诱导的神经发生可能与脑损伤后神经自身修复有关。     

巨细胞病毒性肝炎尿CMV-DNA及血PP65检测的临床意义

巨细胞病毒性肝炎是巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染,损害肝脏而引起的以黄疸、肝脏肿大、肝功能异常为主要临床表现的疾病.该病在婴幼儿期多见,若未及时诊治,严重者可致颅内出血、消化道出血、肝硬化、癫痫等并发症.故早期诊断活动性CMV感染并给予抗病毒药治疗是减轻症状,降低死亡率的关键.现将本院2002～2003年间收治的62例巨细胞病毒性肝炎报道如下.     

原发性强直-阵挛性发作癫痫患儿的免疫指标及临床意义

癫痫因其类型多，病因复杂，发病机制迄今尚未完全阐明，自1969年Walker提出癫痫免疫学发病机制和1997年Besedevdsky提出“神经-内分泌-免疫”网络（NEIN）以来，大量的研究表明，在癫痫的发病过程中可伴发免疫紊乱或异常，但结果不完全一致。本研究通过检测原发性强直-阵挛性发作癞痫患儿于服药前血清免疫球蛋白IgA、IgG，IgM，IsE及补体C3、C4、T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋及CD8^＋的数量变化，旨在探讨该型癫痫与免疫的关系。     

13例早发型腓骨肌萎缩症的基因分型研究

目的 探讨早发型腓骨肌萎缩症（CMT）的临床特征及遗传变异分析。方法 以临床诊断为早发型CMT的患儿为研究对象，收集相关临床资料，进行肌电图及CMT相关基因检测并分析。结果 早发型CMT病例共13例，男9例（69%），女4例（31%），平均就诊年龄4.0±2.1岁，其中12例（92%）患儿起病年龄 < 2岁。9例（69%）诊断为CMT1型（其中Dejerine-Sottas综合征6人），1例（8%）为中间型，3例（23%）为CMT2型。13例患儿的基因检测结果显示6例（46%）患儿存在外周髓鞘蛋白22（PMP22）基因重复突变、3例（23%）髓鞘蛋白零（MPZ）基因插入突变及点突变、3例（23%）线粒体融合蛋白2（MFN2）基因点突变、1例（8%）人轻肽神经丝蛋白（NEFL）基因点突变，其中11例（85%）为已知致病突变，2例（15%）为新变异。MPZ基因新变异c.394C > G（p.P132A）评级为"可能致病的"及MFN2基因新变异c.326A > G（p.K109R）评级为"致病的"。结论 早发型CMT以PMP22基因重复突变及MPZ基因突变为主，临床分型以CMT1型为主，其中Dejerine-Sottas综合征占有相当比例。