老年大鼠肝细胞活性染色质DNA的甲基化

DNA甲基化在基因表达调控和细胞分化中起重要作用,据报道,衰老过程中DNA甲基化水平降低,但活性染色质与非活性染色质的DNA甲基化在衰老过程中的变化有何差别,文献报道不多,我们对此进行了研究。     

老年细胞原癌基因c-fos、c-myc基因可诱导性减退与特异转录因子的关系

目的观察人胚肺二倍体成纤维细胞的老年细胞中原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达的变化及其与特异转录因子的关系。方法使用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法检测ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ基因表达情况，使用Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交法检测特异转录因子。结果表皮生长因子（ＥＧＦ）对老年细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ转录的可诱导性下降，使与ｃ－ｆｏｓ基因片段特异结合的蛋白质Ｐ９１和与ｃ－ｍｙｃ基因片段特异结合的蛋白质Ｐ８０明显降低。结论老年细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ基因转录对ＥＧＦ可诱导性下降，可能与其结合的转录因子活性改变有关。     

衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达

目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素.方法:用Northern blot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2 kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IGFBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件.结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30 bp序列存在一个新的增强子元件IEE (IGFBP-3 enhancer element),对IGFBP-3的表达起到调控作用.     

垂体瘤转化基因1与前列腺癌分期、分级的关系

前列腺癌的生物学行为极为复杂，其中绝大多数由雄激素依赖性转化为非依赖性，导致治疗无效。我们用基因芯片技术筛选到的垂体瘤转化基因1（pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1）受雄激素调控。本研究检测前列腺癌组织中的PTTG1的表达，探讨PTTG1与前列腺癌分期、分级的关系。     

人衰老成纤维细胞c-fos基因对DNaseⅠ的敏感性分析

目的：研究人衰老成纤维细胞c-fos基因染色质结构状态。方法：DNaseⅠ敏感性分析法。结果：衰老细胞c-fos基因在表皮生长因子（EGF）诱导后对DNaseⅠ的敏感性无明显变化，而年轻细胞对DNaseⅠ的敏感性显著升高。结论：衰老细胞的c-fos基因可能在异染色质上，处于关闭状态，因而不易为EGF所诱导。     

Induction of c-fos/c-myc expression by epidermal growth factor decreases with alteration of their gene binding proteins in senescent fibroblasts.

Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｆｏｓ／ｃｍｙｃｅｘｐｒｅｓｉｏｎｂｙｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｄｅｃｒｅａｓｅｓｗｉｔｈａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｇｅｎｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｓｅｎｅｓｃｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ...     

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的探讨甲状旁腺素(PTH)对小肠细胞钙结合蛋白(CaBP)D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1,25-(OH)2-D3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法以人结肠癌上皮细胞株Caco-2细胞作为小肠细胞体外模型,PTH分三个剂量10-8、10-9和10-12mol/L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,溶剂对照为0.1%乙醇;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,溶剂对照亦为0.1%乙醇。运用RT-PCR方法进行CaBP-D9k mRNA测定,以GAPDH作为内对照。结果10-8mol/LPTH作用20min,10-12mol/L作用10min,CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组,其余时间点低于空白组;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,CaBP-D9k mRNA的表达均高于溶剂对照(0.1%乙醇);与10-8mol/L1,25-(OH)2-D3单独作用比较,10-8mol/L1,25-(OH)2-D3联合以上三剂量PTH作用,CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论10-8mol/L、10-12mol/LPTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时(1~20min)合成增加;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达;PTH可能抵消或者抑制1,25-(OH)2-D3促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。     

57kD肺癌抗原的分离纯化、免疫抗体的制备与各型肺癌免疫组织化学分析

目的制备肺癌抗原和抗体。方法用胰蛋白酶酶解肺癌细胞膜取得多肽混合物，经琼脂糖凝胶和纤维素层析柱分离、纯化，获取肺癌表面抗原，再用电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法确定其性质。用此抗原免疫动物制备相应抗体，并用免疫组织化学方法对８５例肺癌、１０例正常肺和１８例非癌性肺病进行测定。结果此抗原为等电点５．６、分子量为５７０００（５７ｋＤ）的膜蛋白。正常肺和非癌性组织中此抗原表达很低，呈阴性表达；肺癌阳性表达率为８０％，其中鳞癌、腺癌、小细胞肺癌的阳性表达率分别为９４．８０％、７８．２６％和２８．５７％，高分化型鳞癌和腺癌阳性表达率在９０％以上。结论此抗原为不带糖或含糖量很低的多肽，是肺鳞癌和腺癌的共同抗原。     

骨性关节炎的联合基因治疗研究

目的:探讨白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)及白细胞介素10双基因转染在关节中的表达及在骨性关节炎(OA)治疗中的作用。方法:构建PLXRN-IL-1Ra、PLXRN-IL-10逆转录病毒载体,体外转染同种异体原代滑膜细胞,将转染了外源基因的滑膜细胞注射入兔骨性关节炎膝关节腔。外源基因注射后第7天,用PBS灌洗兔膝关节,ELISA分析转基因表达;外源基因注射后第14天处死动物,ELISA及免疫组化分析转基因表达,软骨滑膜常规石蜡切片观察病理改变,并进行软骨组织学评分。结果:外源基因转移后14天表达尚很稳定,治疗基因在受体关节的滑膜衬里部位表达。只接受人IL-1Ra基因治疗的兔膝关节软骨损坏明显减轻;单纯人IL-10基因治疗膝关节也有一定效果;两种基因同时导入时,有非常明显的抑制软骨破坏和软骨基质降解的作用。结论:以逆转录病毒为载体将IL-1Ra、IL-10同时转移入早期骨关节炎关节内,有稳定的外源基因表达,且联合基因治疗效果明显优于单独转移入其中任何一种基因,提示靶向于多种炎性因素的治疗更为有效。