RIP1介导的坏死性凋亡通过NF-κB通路调节肾小管上皮细胞炎症反应

目的:探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)介导的坏死性凋亡对肾小管上皮细胞炎症的影响及其机制。方法:体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合Z-VAD-FMK刺激24 h。乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞坏死百分比,Western blot检测观察RIP1、IKK-α和NF-κB p65的表达,Western blot和ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,real-time PCR检测NF-κB p65的mRNA表达水平。进一步应用RIP1抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)进行干预,检测上述指标。结果:与对照组比较,TNF-α联合Z-VAD-FMK刺激组(T/Z组)的HK-2细胞中cleaved RIP1蛋白水平明显升高,IKK-α和NF-κB p65的蛋白水平明显增高,LDH释放明显增多(P<0. 01)。Western blot和ELISA检测炎症相关指标IL-1β和MCP-1的水平均有明显升高,real-time PCR检...     

NF-KB、COX-2在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及意义

目的探讨核因子KB（nuclearfactor-kappaB，NF-KB）／环氧化酶-2（cyclooxygenase2，COX-2）信号途径在高糖培养的肾小管上皮细胞增殖中的作用及意义。方法用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞，24、48、72h后收集细胞，采用免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear autigen，PCNA）和NF-KB蛋白的表达变化，流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-KB和COX-2蛋白的表达情况。结果①与正常糖组比较，高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强；②正常糖组，NF-KB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内，而高糖组NF-KB表达增强，阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内；高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-KB和COX-2蛋白的表达；③NF-KB和COX-2呈显著正相关；同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关。结论活化NF-KB，上调COX-2蛋白表达从而引起肾小管上皮细胞增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之     

厄贝沙坦对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径表达的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Western印迹检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-catenin mRNA表达水平。结果高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞质及核蛋白表达增强。Wnt4和β-catenin核蛋白表达在高糖诱导24h达高峰;厄贝沙坦下调Wnt4、α-SMA及β-catenin核蛋白表达,升高E-cadherin表达水平。结论Wnt/β-catenin信号途径可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。厄贝沙坦可能通过调节Wnt/β-catenin信号途径活性而抑制该过程。     

5/6肾切除大鼠残肾细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的：观察5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas和Fas-L的表达变化及其意义。方法：SD大鼠行5／6肾切除,术后6周、12周采集标本,除常规光镜、电镜观察外,利用TUNEL及流式细胞术,观察肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化,并结合肾功能变化分析肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达与肾小球、肾小管及间质病变的关系。结果：5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡增加,凋亡相关基因表达增强,这些变化与肾脏形态和功能变化相平行。结论：肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化可能参与肾小球硬化、肾小管萎缩及间质纤维化的病理过程。     

SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2 wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±0.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%。原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。     

Wnt/β-catenin信号途径与肾脏疾病

Wnt/β-catenin信号途径参与了肾脏发育及肾肿瘤、肾纤维化、多囊肾、急性肾衰竭、糖尿病肾病等肾脏病的发病。该途径控制输尿管芽的发育并调节间充质细胞的肾形态发生过程;其表达异常参与了多种肾肿瘤的发病;Wnt/β-catenin信号的异常激活诱导肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞等肾脏固有细胞增殖或凋亡,导致多种慢性肾脏病的发生与发展。因而,Wnt/β-catenin信号途径在肾脏发育与疾病中的作用日益受到重视。     

MAPK信号转导途径与糖尿病肾病

糖尿病状态下,多种因素激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。MAPK激活后,使肾脏细胞肥大,细胞外基质积聚,最终导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化。应用MAPK阻断剂可以有效对抗上述作用,为临床上有效治疗糖尿病肾病提供一条新的思路。     

NF-κB、COX-2在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及意义

目的 探讨核因子kB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)/环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)信号途径在高糖培养的肾小管上皮细胞增殖中的作用及意义.方法 用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、48、72 h后收集细胞,采用免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear autigen,PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 ①与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强;②正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB和COX-2蛋白的表达;③NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关.结论 活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾小管上皮细胞增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一.     

高糖对肾小管上皮细胞系细胞因子表达的影响

目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western blot检测JAK2磷酸化的表达;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及信号蛋白STAT1、STAT3等的水平;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌;RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1mRNA表达增加;细胞上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导的HKC中TGF-β1和细胞外基质的分泌。     

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾皮质胞外调节蛋白激酶活性水平的影响

目的:探讨HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀对实验性糖尿病大鼠肾皮质胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)活性水平的影响.方法:将实验动物随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)和氟伐他汀治疗组(DF组),于第2、6周末常规检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、血糖(BG)、尿白蛋白排泄率(UAER)及肾脏肥大指数;Western Blot测定肾皮质磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、TCF-β1表达,免疫组化方法测定肾皮质Ⅳ型胶原;光镜PAS染色及透射电镜观察第6周各组大鼠肾皮质组织学改变.结果:第2、6周末DF组TC、TG、LDL、肾脏肥大指数、UAER、肾皮质Ⅳ型胶原、pERK1/2及TGF-β1表达水平均低于DC组(P＜0.05),但高于NC组(P＜0.01);第6周末光镜、电镜观察DF组较DC组肾组织病变明显减轻.结论:氟伐他汀能下调糖尿病大鼠肾皮质ERK1/2活性、抑制TCF-β1过多生成,降低肾皮质Ⅳ型胶原表达,减轻肾脏病理学改变,抑制和延缓肾小球硬化.