白细胞介素-1β在人肾小管上皮细胞转分化中的作用及Janus激酶2抑制剂AG490的影响

目的 探讨Janus激酶2抑制剂AG490对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响. 方法 将体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs)分为空白对照组、IL-1β(5 ng/ml)刺激组及AG490干预组(IL-1β 5 ng/ml+AG490 10 μmol/L).分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测细胞角蛋白-18(CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达. 结果 正常肾小管上皮细胞内其自身标志物CK-18高表达(1.25±0.08),而α-SMA表达很少(0.17±0.01).IL-1β刺激组随刺激时间延长CK-18表达逐渐减少(24 h:0.69±0.04,48 h:0.52±0.03,72 h:0.30±0.01),而α-SMA蛋白合成逐渐增加(24 h:0.56±0.04,48 h:1.05±0.07,72 h:1.43±0.07),与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).AG490干预能使CK-18的表达逐渐恢复(24 h:1.07±0.07,48 h:0.93±0.06,72 h:0.83±0.06),并减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用(24 h:0.33±0.01,48 h:0.52±0.01,72 h:0.61±0.04),且作用显著(均P＜0.05).免疫细胞化学染色观察结果与其一致. 结论 炎症因子IL-1β通过降低肾小管上皮细胞CK-18表达,上调α-SMA表达,促使肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞;Janus激酶2抑制剂AG490能部分阻断IL-1β对肾小管上皮细胞的促转分化作用.     

靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响

目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。     

高糖通过SREBP-1促进人肾小管上皮细胞转化生长因子β1和纤维黏连蛋白表达

高糖刺激人肾小管上皮细胞(HKC)48 h后,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、转化生长因子β(TGF-β1)和纤维黏连蛋白(FN)表达增Jm(均P<0.01).以RNA干扰技术下调SREBP-1表达后,高糖刺激的TGF-β1和FN蛋白表达分别减少17.9%和24.6%(均P<0.01).     

戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.     

缬沙坦对高糖培养系膜细胞信号转导和转录活化因子1、3表达的影响

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中信号转导和转录活化因子1、3的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用W estern印迹检测信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)和放免法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(F ibronectin,FN)和IV型胶原的含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA的表达。结果与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原含量增加,TGF-β1mRNA的表达增加。缬沙坦组p-STAT1和p-STAT3的表达明显下调,TGF-β1、FN和IV型胶原的含量减少,同时TGF-β1mRNA的表达降低。结论高糖状态下p-STAT1和p-STAT3表达明显升高,缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。     

FEZ1 Survivin在肺小细胞癌及低分化鳞状细胞癌蛋白表达及其在凋亡中的作用

目的：探讨抑癌基因FEZ1与抗凋亡因子Survivin在肺小细胞癌和低分化鳞状细胞癌中的表达及其作用．为临床在肺癌的诊断、治疗方面提供可靠的依据。方法：应用免疫组化及流式细胞定量分析技术检测肺小细胞癌和低分化鳞状细胞癌中FEZ1、Survivin蛋白的表达；并比较分析正常肺组织、小细胞癌和低分化鳞状细胞癌的凋亡率与增殖指数．结果：肺小细胞与低分化鳞状细胞癌相比，FEZ1、Survivin蛋白阳性表达存在显著性差异（P〈0．05）。正常肺组织、低分化鳞状细胞癌、及小细胞癌；其凋亡率及增殖指数依次升高，三者之间差别均有统计学意义（P〈0．05）。结论：本实验表明FEZ1、Survivin基因的蛋白表达水平在小细胞肺癌、低分化鳞状细胞癌间存在明显差异。因此．在肺癌的诊断、治疗方面为临床提供了可靠的依据。     

NO、ONOO-在大鼠离体肾缺血再灌注肾功能损伤中的作用

[目的]探讨一氧化氮（nitric oxide，NO）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite，ONOO^-）在大鼠离体肾缺血再灌注损伤时对肾功能的影响。[方法]应用离体灌流肾（isolated peffused kidney，IPK）技术观察肾I-R对菊粉清除率（Cin）、尿钠排泄指数（FENa）、肾血管阻力（RVR）的影响；阻断内源性NO生成对肾I-R所致的上述指标变化的影响；外源性直接给予NO供体硝普钠（SNP）、ONOO^-对大鼠IPK肾功能的影响。[结果]①缺血再灌注导致大鼠IPK肾血管阻力（RVR）明显增大（P〈0．05），IPK的Cin降低（P〈0.05），肾I-R后IPK的FENa有较大幅度的增加（P〈0．05）。②SNP能够使健康大鼠IPK的RVR降低、Cin增加和FENa增大（P〈0．05）。而ONOO^-使RVR增高、Cin降低和FENa增加（P〈0．05）。③iNOS抑制剂氨基胍（aminoguanidine，AG）使大鼠IPK的功能I-R后5 h RVR降低、Cin增大和尿钠减少（P〈0.05）；而应用NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸（L-NNA），加重了肾I-R大鼠IPK肾机能的损伤，I-R 1h和I-R 5h均出现了RVR增大、Cin降低和尿钠排泄增多（P〈0．05）。[结论]肾I-R所致NO大量生成后产生的ONOO^-损伤了大鼠的肾功能。     

洛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织的保护作用及其调控

目的探讨洛伐他汀对糖尿病大鼠肾功能的保护作用及核转录因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)的作用。方法雄性Wistar大鼠行右肾切除术2周后,随机分为3组右肾切除对照组、糖尿病组和洛伐他汀治疗组。4周后各组选取6只大鼠,收集血尿测定生化指标;免疫组化检测肾皮质磷酸化CREB1(PCREB1)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特征,Western印迹及RTPCR检测肾皮质CREB1磷酸化(活性)及mRNA的变化。结果4周时糖尿病组血脂、尿素氮、肌酐清除率和尿蛋白排泄率增加,同时PCNA、PCREB1蛋白及mRNA表达明显增强;而洛伐他汀组虽然血脂无明显改善,但肾功能损伤明显减轻,同时PCNA、PCREB1蛋白及mRNA表达有不同程度的降低。结论洛伐他汀对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用,机理是通过调节PCREB1蛋白及mRNA的表达从而减轻糖尿病早期细胞增殖肥大来实现。     

河北引种枸杞药效学研究

对河北引种的枸杞子进行了升高白细胞、增加免疫功能和抗衰老作用研究。结果表明：河北引种枸杞水提液连续ig可抑制环磷酰胺所致白细胞减少并促使其回升，能提高小鼠胸腺指数，显著延长小鼠死亡时间。证明河北引种的枸杞具有促进造血机能，增强机体免疫能力，延缓衰老的药理作用。     

核转录因子κB/环氧化酶-2参与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)/环氧化酶-2(COX-2)信号与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖的关系.方法 单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型,16周后切除左肾.用免疫组织化学检测肾皮质NF-κB和COX-2蛋白的表达;用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、48和72 h后收集细胞,用免疫细胞化学检测PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测NF-κB和COX-2蛋白的表达.结果 (1)糖尿病模型组肾脏肥大指数增加.肾小球体积增大,系膜基质增多;(2)糖尿病模型组肾组织中活化的NF-κB和COX-2蛋白表达高于对照组,两者呈显著正相关;(3)高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达强于正常糖组;(4)高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB和COX-2蛋白的表达,两者呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关.结论 活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾脏固有细胞的增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一.