大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定

目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取p NZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63。采用nisin诱导重组乳酸菌表达m LT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 k D和40 k D。结论本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用。     

传染病防治中的新问题及其对策

新中国成立以后,由于党和政府的高度重视,我国的传染病防治工作取得了举世瞩目的重大成就.     

霍乱弧菌O1群毒力基因分布和DNA分子特征

由于霍乱弧菌Ｏ１群菌株中仅有部分可以引起霍乱流行，研究其主要毒力基因分布和ＤＮＡ分子特征，已成为目前学者们关注的重要课题，应用原位杂交法对４７１株Ｏ１群ＶＣ的主要毒力基因分布情况进行检测，用核酸脉冲场凝胶电泳对其中３４株进行染色体ＤＮＡ特征和ＣＴ基因Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析。     

霍乱弧菌非O1群菌株多位点酶电泳分型

对非Ｏ１群霍乱弧菌进行准确分型和分类，是目前亟待解决的重要问题。应用多位点酶电泳地对来源不同的９８株非Ｏ１群乱弧菌进行１２个酶基因位点的检测和分子分型研究。结果：９８例非Ｏ１群霍乱弧菌可以分为５９个ＥＴ型，每个型别所包含的菌株数较少。     

基于CRISPR/Cas的大肠埃希菌分子标志物的监测研究

目的 探讨基于CRISPR/Cas的大肠埃希菌分子标志物的监测研究。方法 通过BLAST收集GenBank数据库中135株全基因组测序大肠埃希菌、203株鸟枪法测序大肠埃希菌的CRISPR/Cas和PCR扩增、测序获得本实验室保存361株大肠埃希菌（包括38株大肠埃希菌O157：H7）的CRISPR序列,应用CRISPR Finder在线软件分析CRISPR特征、DNAMAN软件进行间隔序列的比对,使用Clustal Ⅹ进行cas多序列比对和Mega 5.1软件构建系统进化树。结果 本研究以全新的视角对大肠埃希菌的CRISPR/Cas位置进行描述;结果显示,135株全基因组测序、203株鸟枪法测序和361株本实验室测序的大肠埃希菌中分别有77.04%、100.00%和75.62%的大肠埃希菌具有CRISPR1,分别有74.81%、100.00%和92.24%的大肠埃希菌具有CRISPR2,分别有11.85%、0和1.39%的大肠埃希菌具有CRISPR3和CRISPR4;GenBank数据库下载的全基因组测序的1株和本实验室测序的2株大肠埃希菌存在4个CRISPR位点;缺少cas的CRISPR1下游有插入序列存在。在699株大肠埃希菌中,8株O55：H7、180株O157：H7、8株O157：HNM、40株O104：H4、4株O145：H28有独特的CRISPR;间隔序列的缺失可发生在CRISPR中间;依据I-E和I-F的cas构建系统发育树,均可分为两类。结论 大肠埃希菌的CRISPR/Cas可能作为鉴定强毒株大肠埃希菌或者新型菌株的分子标志物。间隔序列的缺失或获得可能与噬菌体有关。     

郑州某高校学生甲型H1N1流感防控知识与心理焦虑调查

甲型H1N1流感病毒为A型流感病毒,遗传物质为RNA,该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段,是一种新型流感病毒,可以人传染人,严重的会导致死亡[1].目前部分高校已经出现甲型H1N1流感确诊病例和疑似病例,部分学生有一定的焦虑和紧张情绪.为了解大学生甲型H1N1流感防治知识与心理焦虑情况,2009年10月至11月作者对郑州市某综合大学部分院系的学生进行了调查.     

河南省农村集中式供水微生物污染卫生现状及其影响因素分析

目的：了解河南省农村集中式供水微生物污染卫生现状,分析影响水质微生物的影响因素,为制定农村饮用水安全发展规划提供科学依据。方法：2011-2014年对河南省新乡市8个县（市）农村集中式供水进行采样,并开展卫生学状况调查（水源类型、水期类型、供水规模、季节、地方病和消毒情况等）,依据《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750-2006）对出厂水和末梢水进行微生物检测,包括菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌,并采用Logistic回归分析集中式供水菌落总数超标的影响因素,采用Poisson回归分析集中式供水菌落总数和总大肠菌群数的影响因素。结果：2011-2014年分别采水样824、820、526和636份。供水水源以深井水为主（90.0%）,未经任何处理的饮用水水样占70.6%。4年水样的菌落总数合格率分别为76.0%、75.5%、66.5%和72.6%;总大肠菌群合格率依次为97.3%、94.9%、99.6%和94.3%。2011-2014年消毒供水的菌落总数超标率均低于未消毒供水（P<0.05）;2012-2014年末梢水中菌落总数超标率高于出厂水（P<0.05）;2013年和2014年中型供水能力（100~1 000t）工程的供水中菌落总数超标率低于大型供水能力（≥1 000 t）和小型供水能力（<100 t）的供水工程（P<0.05）。Logistic回归分析,丰水期的水样中菌落总数超标率高于枯水期（χ²=12.31,P<0.001）;消毒能够降低菌落总数超标率（χ²=85.32,P<0.001）;以除氟和解决苦咸水为目的的供水工程供水中菌落总数超标率较低（χ²=34.44,P<0.001;χ²=39.44,P<0.001）。Poisson回归分析,丰水期（χ²=6972.75,P<0.001）、未消毒（χ²=5415.46,P<0.001）、末梢水（χ²=97.64,P<0.001）、运营时间长（χ²=26.57,P<0.001）、供水能力小（χ²=4502.57,P<0.001）、以除氟和解决苦咸水为目的的改水工程（χ²=6226.68,P<0.001;χ²=13441.50,P<0.001）的水样中菌落总数较高。而100~1 000t的供水能力工程（χ²=802.18,P<0.001）及以除氟和苦咸水为目的供水工程（χ²=2711.88,P<0.001;χ²=1470.91,P<0.001）水样中的总大肠菌群数较低,丰水期（χ²=16583.10,P<0.001）、未消毒（χ²=276.34,P<0.001）、末梢水（χ²=1205.26,P<0.001）和运营时间长（χ²=3220.58,P<0.001）的水样中总大肠菌群数较高。结论：河南省农村集中式供水消毒比例较低,菌落总数合格率不高,总大肠菌群合格率高。水期类型、是否消毒、水样类型、运行年、供水能力和供水工程目的均不同程度地影响农村集中式供水的水质微生物。     

O26:H11及NM大肠埃希菌CRISPR的分子分布特征及其与stx噬菌体的关系

目的 探讨O26：H11及NM血清型大肠埃希菌中成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）的分子分布特征及其与stx噬菌体的关系。方法 135株O26：H11及NM血清型大肠埃希菌从NCBI数据库获取,利用CRT软件及CRISPR Finder提取CRISPR信息,并用Excel软件对间隔序列进行编号及分析CRISPR亚型,并分析CRISPR与stx噬菌体之间的关系。结果 135株O26：H11及NM血清型大肠埃希菌中均存在CRISPR结构,CRISPR1包括19个亚型,CRISPR 2.1包括22个亚型,CRISPR2.2包括1个亚型,CRISPR3-4包括1个亚型。stx噬菌体在CRISPR群组C中出现,stx⁺ 菌株比stx^-菌株拥有更多的间隔序列。结论 CRISPR位点在O26：H11或NM血清型大肠埃希菌中广泛存在,且存在着不同的亚型,stx噬菌体与CRISPR的分子分布特征有关,可能作为鉴定高毒菌株的分子靶标。