单克隆抗体MC5与人体胃癌组织反应性的研究

本文用抗结肠单克隆抗体MC5,以ABC免疫组化染色方法,对187例胃癌标本及22例胃转移癌标本进行了组化定位。187例胃癌标本中160例阳性(85.6％);22例胃癌转移标本中17例阳性(77.3％)。结果证明MC5对胃癌组织有较高的敏感性,对胃癌的早期组织诊断,微小胃癌的发现,以及对胃癌的浸润和转移的判断也有重要意义。     

V型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达

目的：构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法：采用限制性内切酶技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒,用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS-7细胞,于转染后72h,用Western blot法检测所表达的蛋白。结果：克隆成功纤维蛋白基因,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性,Western blot结果显示,新表达蛋白在变性条件下大小为62kD,而在非变性条件下为186kD。结论：纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达,产物具有三聚体结构。可用于腺病毒靶向性载体的构建。     

癌基因ras的表达抑制抗体交联物诱导的胃癌细胞凋零

凋零又称程序性细胞死亡,是细胞普遍具有的一种自我消亡机制,是细胞对外界信号刺激所作出的一种主动性死亡应答反应,是细胞的“自杀”。近年来的研究表明,凋零不但是正常生理性控制过程之一,同时也是化疗、放疗等抗肿瘤疗法杀伤瘤细胞的重要途径。因此,阐明凋零是否参与抗体交联物的细胞毒效应这一问题,对于深刻理解导向治疗的机理将具有重要的理论与实际意义。     

蛋白激酶C同工酶PKC-α及PKC-βⅠ在胃癌及其耐药细胞中的表达和功能

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）不同的同工酶亚型在胃癌细胞多药耐药中的作用。方法应用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜及Western blot,观察传统型PKC（cPKCs)的PKC-α与PKC－βⅠ在胃癌细胞SGC7901及其不同剂长春新碱（VCR0．3,0．7,1．0mg/L)诱导的耐药细胞SGC7901／VCR中的表达与分布;以阿霉素（AMD）为指示剂,通过流式细胞仪检测PKC-αP与PKC－βⅠ的相应抗体对SGC7901／VCR细胞内药物蓄积浓度的影响。结果（1）KC-α在SGC7901呈阳性表达;在SGC7901／VCR呈强阳性,其表达强度随耐药剂量的增加而呈增加趋势。（2）PKC－βⅠ在SGC7901及其不同耐药剂量的耐药细胞SGC7901／VCR中均呈弱阳性有表达,相互之间差异无显著性。（3）以ADM为荧光指示剂,通过流式细胞仪检测显示,SGC7901／VCR细胞内药物浓度比SGC7901明显降低,并且随耐药剂量的增加而呈逐渐减少趋势;SGC7901／VCR细胞内药物浓度比SGC7901明显降低,并且随耐药剂量的增加而呈逐渐减少趋势,SGC7901／VCR与抗PKC-α抗体共同孵育后,其细胞内ADM蓄积增加,而与抗PKC－βⅠ抗体共同孵育后,其细胞内ADM浓度无明显变化。结论胃癌细胞SGC701／VCR的耐药机制可能与PKC-α有关,而与PKC－βⅠ无明显相关性。     

反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

RhoB对胃癌细胞SGC7901的负性调控作用

目的研究RhoB对胃癌细胞SGC7901增殖调控作用。方法用PCR扩增出RhoB的全长cDNA，构建RhoB可诱导表达载体pGene／V5-His-RhoB；脂质体介导法将调控载体pSwitch及诱导表达载体pGene／V5-His-RhoB先后转入人胃癌细胞SGC7901中，筛选出稳定抗性克隆；Western blot检测米非斯酮诱导后转染细胞中RhoB蛋白的表达。用MTT assay检测RhoB转染细胞株的生长速度、双苯并咪唑染料(Hoechst 33258)活细胞吸收分析法、流式细胞仪(FCM)检测RhoB对胃癌细胞凋亡指数作用。结果成功构建RhoB可诱导真核表达载体pGene／V5-His-RhoB，并经酶切和测序鉴定；转染后经潮霉素B和Zeocin筛选出稳定抗性克隆SGC7901／RhoB；米非斯酮诱导出RhoB蛋白表达，在诱导24小时后蛋白表达最高；细胞增殖试验结果显示，RhoB表达上调后胃癌细胞增殖受到抑制；细胞凋亡检测提示高表达RhoB可明显诱导胃癌细胞凋亡。结论RhoB对胃癌细胞增殖具有负性调控作用，可诱导胃癌细胞出现凋亡。     

缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义

目的研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法分别利用RTPCR和Western blot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF—1α的表达水平。结果常氧条件下，在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1α mRNA的表达，其表达水平无明显差异；对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测，同样发现常氧时即有HIF-1α的表达，但表达水平明显不同。结论常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达；在胃癌细胞系中，HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平；HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达，提示除缺氧刺激外，非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。     

缺氧在诱导胃癌细胞上皮间质转化及侵袭中的作用

目的:研究常氧及缺氧对胃癌细胞侵袭性的影响以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transi-tion,EMT)在其中起的作用。方法:常氧条件下常规培养胃癌细胞SGC7901;缺氧条件下用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901 24h。分别用蛋白质免疫印迹(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白水平和mRNA水平测定与EMT有关的指标E-cadherin及β-catenin的表达,以明确缺氧诱导胃癌细胞EMT的能力。同时以Transwell侵袭实验验证EMT对胃癌细胞侵袭性的作用。结果:缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,细胞发生EMT,其中无论是在蛋白水平还是mRNA水平,E-cadherin表达下降,而β-catenin表达升高;Transwell侵袭实验也证实胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭能力明显增强。结论:缺氧有增加胃癌细胞侵袭的作用,该作用机制可能与胃癌细胞的EMT改变有关。     

人胃、十二指肠粘膜SS，AVP，EK和β－EP含量测定及其临床意义

作者应用放免分析法对２４例十二指肠溃疡（ＤＵ），１５例胃溃疡（ＧＵ）患者胃、十二指肠粘膜进行了生长抑素（ＳＳ），精氨酸加压素（ＡＶＰ）、脑啡肽（ＥＫ）和β－内啡肽（β－ＥＰ）含量测定．同时以２０例慢性浅表性胃炎（ＣＳＧ）为对照．结果表明，ＤＵ患者球、窦和体部粘膜ＳＳ含量（依次为１５３．５±２７．５，３３０．９±２３．９和１７７．１±３０．９ｐｇ／ｍｇ）显著低于（Ｐ＜０．０５）对照（依次为２５３．７±３４．２，５８８．９±８５．３和２８８．８±４０．５ｐｇ／ｍｇ），ＥＫ（依次为９８．６±１３．２，１０８．２±１６．５和５８．５±１０．３）和β－ＥＰ（依次为１１３．０±２２．６，８８．７±１６．８和８２．８±１８．８ｐｇ／ｍｇ）显著高于（Ｐ＜０．０１）对照（ＥＫ依次为５０．１±８．８，６２．９±１１．４和３０．９±３．０；β－ＥＰ依次为８２．３±８．１，３９．８±６．８和４９．８±９．１）．ＤＵ患者球部粘膜ＡＶＰ（５２．３±７．０ｐｇ／ｍｇ）显著高于（Ｐ＜０．０５）ＣＳＧ（３７．７±４．３ｐｇ／ｍｇ）．ＧＵ组上述激素含量与对照组比较均无显著差异．提示：①ＡＶＰ，ＳＳ，ＥＫ和β－ＥＰ在人胃、十二指肠皆有分布；②粘     

胃癌组织中COX-2和VEGF表达及其相关性研究

目的探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growthfactor,VEGF)在人胃癌组织中表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测53例人胃癌组织中COX-2、VEGF和CD34的表达,并以40例正常胃粘膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数。对COX-2和VEGF的表达采用半定量计分法判定,并结合临床资料进行统计学分析。结果53例人胃癌组织中,COX-2表达阳性者44例,阳性率为83.0%;VEGF表达阳性者45例,阳性率为84.9%。COX-2表达与VEGF表达相关显著(P<0.05)。并且,COX-2和VEGF的表达与TNM分期(P<0.05,P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01,P<0.05)和远处转移(P<0.01,P<0.05)相关。COX-2/VEGF同高表达组中MVD值(79.5±25.8)高于COX-2/VEGF同低表达组中的MVD值(45.0±13.9),差异非常显著(P<0.01)。结论胃癌组织中COX-2与VEGF共表达,并相互协同促进肿瘤血管生成和转移。