大鼠肌源性干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞

目的 探讨体外自体肌源性干细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞团的可行性。方法 用差速贴壁的方法对SD大鼠MDSCs进行分离和培养,加入联合诱导剂培养7～12d。通过形态学观察、双硫腙(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。 结果 联合诱导后12d有典型的胰岛样结构出现;诱导后第12天细胞团表达胰岛素,而未诱导组细胞不表达;诱导后第7天检测到胰岛素 (INS)、胰高血糖素(GLU)和生长抑素(SS)基因的表达。 结论 体外诱导大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径。     

钛合金和金铂合金PFM对犬牙龈组织形态学的影响

背景：临床病例中很少有同一患者采用两种金属进行全冠修复,因此实验利用犬为动物模型,同时进行上、下颌修复,为牙龈组织形态分析提供了方便。 目的：比较钛合金和金铂合金两种金属烤瓷修复体对犬牙龈组织超微结构的影响。 设计、时间及地点：组织形态学对比观察,实验于2006-09/2008-05在辽宁医学院第二临床医院口腔修复实验室完成。 材料：钛合金(含钛4%~6%的Tilite合金)由美国Talladium公司提供、金铂合金(含金86.8%,铂11.7%,锢、铱<1%)由深圳美冠达牙科技术有限公司提供。 方法：选择健康成年杂种犬3只,每只犬为42颗恒齿。每只犬右侧上颌选8颗犬牙制作钛合金烤瓷熔附金属修复体冠,右侧下颌选8颗犬牙制作金铂合金烤瓷熔附金属修复体冠,左侧为正常对照组。 主要观察指标：通过光镜和透射电镜观察犬牙龈组织的超微结构,用TUNEL方法检测细胞凋亡情况。 结果：钛合金修复体组光镜下可见牙龈组织有炎性细胞浸润,局部血管出血;金铂合金修复体组牙龈组织未见炎性细胞浸润及局部血管出血。钛合金修复体组电镜下可见细胞凋亡,凋亡指数(43.34±18.27)%,有细胞核固缩等反应;金铂合金修复体组细胞凋亡很少,凋亡指数(26.90±17.35)%。统计分析显示钛合金组和金铂合金组的凋亡指数与正常对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05),钛合金组凋亡指数显著高于金铂合金组(P < 0.05)。 结论：金铂合金烤瓷熔附金属修复体对犬牙龈组织超微结构的影响较小。选用金铂合金作为烤瓷熔附金属修复体基底冠的临床效果更好。 关键词：犬;牙龈组织;超微结构;细胞凋亡;钛合金烤瓷熔附金属修复体;金铂合金烤瓷熔附金属修复体     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺66骨填充材料与自体骨修复良性骨肿瘤术后骨缺损的对比研究

目的比较纳米羟基磷灰石/聚酰胺66骨填充材料与自体骨修复良性骨肿瘤术后骨缺损的临床效果。方法 2007年1月-2009年3月,选取52例良性骨肿瘤患者随机分成A、B两组,行肿瘤刮除术,A组瘤腔用颗粒型及条形纳米羟基磷灰石/聚酰胺66骨填充材料填充,B组用自体骨填充,伤口常规缝合;比较两组手术时间、术中失血量、术后血沉及C反应蛋白变化情况,评价骨缺损愈合情况。结果纳米羟基磷灰石/聚酰胺66材料填充组与自体髂骨填充组比较,手术时间明显缩短（P〈0.01）,失血量明显减少（P〈0.01）,两组对修复良性骨肿瘤术后骨缺损疗效相当。结论纳米羟基磷灰石/聚酰胺66骨填充材料是修复良性骨肿瘤术后骨缺损的优良材料。     

乙烯雌酚诱导兔骨髓基质干细胞向成骨分化的实验研究

目的观察乙烯雌酚（Diethylstilbestrol）对兔骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）成骨分化的影响,探讨乙烯雌酚对骨髓基质干细胞的成骨调节及其对骨骼系统的影响。方法用不同浓度（0,10-（-10）～10-（-5） mol/L）乙烯雌酚干预1周龄新西兰长耳白兔的骨髓基质干细胞,并设地塞米松10-（-8） mol/ L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50mg/L为阳性对照,在干预不同时间分别用茜素红染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性。结果10-（-8）mol/L乙烯雌酚干预25天后开始出现钙化结节 10-（-8）、10-（-7）mol/L乙烯雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加。结论乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化,并能通过成骨细胞的数量来发挥骨骼系统的保护作用。     

联合应用成骨诱导后骨髓间充质干细胞与PLGA支架材料修复兔桡骨缺损的实验研究

目的研究聚乳酸聚乙醇酸复合物（ Po （ yclactic - co - glycolic acid ）, PLGA ）支架作为组织工程骨支架修复骨缺损的可行性。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells, BMSCs）,在成骨诱导荆地塞米松等的诱导下,向成骨细胞转化,并使之与修饰后PLGA支架复合,植入兔桡骨缺损模型,作为实验组。对照组a为PLGA材料对照,对照组b为空白对照,通过影像学观察骨缺损的修复情况。结果地塞米松等诱导组细胞形态向类成骨细胞转化,碱性磷酸酶表达明显增高,并表达I型胶原。应用多聚赖氨酸修饰的PLGA与成骨诱导的BMSCs复合植入骨缺损后,与对照组相比影像学显示明显促进骨缺损的愈合。结论适当浓度成骨诱导剂可成功的将免骨髓间充质细胞向成骨细胞诱导,诱导后细胞与PLGA支架联合应用可较好修复兔桡骨缺损。     

Jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异

目的Jagged1蛋白在大鼠肌源性干细胞（MDSCs）体外增殖分化为神经样细胞过程中的表达差异研究。方法大鼠乳鼠骨骼肌消化后体外培养增殖,第5代传代后细胞分为2组：对照组完全培养基培养,诱导组加入诱导剂诱导。6d后观察2组细胞的形态变化,并进行NSE免疫细胞化学鉴定。然后通过免疫荧光观察Jagged1蛋白的表达差异。结果诱导组细胞NSE染色阳性,免疫荧光结果显示对照组Jagged1蛋白表达阳性,实验组基本不表达。结论大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Jaggedl蛋白表述存在明显差异。     

Notch通路在肌源性干细胞分化为胰岛素分泌细胞过程中的表达

干细胞技术的应用为解决糖尿病胰岛移植供体不足、扩增β细胞提供了可能[1].我们采用含有促进胰腺、胰岛细胞再生及增殖生长因子的胰腺提取液诱导肌源性干细胞(MDSCs)分化为有功能的胰岛素分泌细胞后,探讨在胰腺发育过程中起重要作用的Notch通路的表达[2].     

昆明种小鼠胚胎干细胞的培养及鉴定

目的 从昆明种小鼠的早期胚胎中获取并培养胚胎干细胞.方法 收集小鼠3.5 d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,72 h后分离隆起生长的内细胞团并继续培养,观察集落的生长状态,并通过碱性磷酸酶染色进行鉴定.结果 ES细胞有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大;对ES 细胞碱性磷酸酶进行检测,在AKP底物作用下,未分化的ES 细胞显微镜下为棕褐色,分化的不着色.结论 昆明种小鼠囊胚在小鼠胚胎饲养层细胞上可以发育为胚胎干细胞.     

氧化应激和内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的关系

目的探讨活性氧（ROS）介导的氧化应激（OS）与内质网应激（ERS）在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用关系。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞分为3组,对照组、高糖组和抗氧化剂组,流式细胞术检测细胞凋亡,分别检测各组心肌细胞中ROS的含量和上清液中超氧化物歧化酶（SOD）的含量,以反映心肌细胞的OS水平,再利用免疫组化法和RT-PCR检测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达情况。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多（P〈0.01）;SOD含量显著下降（P〈0.01）;与高糖组相比,抗氧化剂组ROS含量明显降低（P〈0.01）,抗氧化剂组较高糖组ROS含量明显降低（P〈0.01）,SOD含量升高（P〈0.05）;免疫组化法检和RT-PCR测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12检测结果显示,高糖组明显大于对照组,抗氧化剂组与高糖组比较表达显著下调（P〈0.01）。结论高糖诱导的心肌细胞凋亡中,ROS启动的OS和ERS可能共同参与了心肌细胞凋亡过程。     

大鼠ZnT1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的利用GatewayTM技术构建含大鼠锌转运体1(ZnT1)基因重组腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达。方法采用化学合成的方法,合成ZnT1/RES/EGFP目的基因片段,通过PCR方法在基因片段两端加入attB重组位点,与含有attP重组位点的pDonr221供体载体BP反应形成入门载体pDown-ZnT1。将含有attL重组位点的入门载体与含有attR位点目的载体Ad/CMV/V5-DEST通过LR反应形成腺病毒表达载体pAd-ZnT1。酶切和测序鉴定后,由PacⅠ酶切线性化转染HEK293A细胞包装,提取病毒颗粒。采用终点稀释法测定重组腺病毒滴度;Western blotting技术分析目的蛋白表达情况。结果目的基因按正确的方向重组入克隆载体中,重组腺病毒表达载体在HEK293A细胞中包装成功,获得成熟的腺病毒颗粒,病毒滴度为1.6×108 pfu/L,在HEK293A细胞中高表达。结论该实验采用GatewayTM技术构建了含有大鼠ZnT1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在脊髓神经细胞中的表达以及与BDNF/TrkB信号调节通路的关系奠定了基础。