湖北省麻城市2010~2014年恶性肿瘤发病现状及趋势

[目的]分析麻城市居民恶性肿瘤发病流行特点和趋势,为开展肿瘤综合防治提供依据.[方法]运用描述流行病学研究,对麻城市2010～2014年12 252例恶性肿瘤患者的发病特征及趋势进行分析.[结果]恶性肿瘤年均发病率为212.09/10万(男性242.17/10万、女性178.49/10万)、中标率为167.47/10万(男性193.69/10万、女性139.74/10万),男女发病率差异有统计学意义(x2=275.934,P＜0.01);2010～2014年恶性肿瘤标化率呈上升趋势(x2趋势=31.028、P＜0.01);全人群癌发病率前5位依次为支气管和肺癌、胃癌、肝和肝内胆管癌、食管癌、肠癌,占全部肿瘤发病总数的69.47％;[结论]麻城市肿瘤发病率呈上升趋势,肺癌、消化系统肿瘤和女性乳腺癌是严重危害当地居民身体健康最主要的肿瘤,是当前肿瘤防治工作的重点.     

可诱导共刺激分子在系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的表达

目的 探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的表达。方法 应用双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测了33例SLE患者和16例正常人对照者外周血中T淋巴细胞表面ICOS的自然表达水平,同时收集SLE患者的实验室检查指标,并用SLE疾病活动指数(SLEDAI)来判定SLE患者疾病活动程度,比较分析不同组别SLE患者ICOS表达水平与SLEDAI的相关性。结果 活动期SLE组T淋巴细胞ICOS表达水平明显高于正常人对照组(P<0.01)和非活动期SLE组(P<0.01),非活动期SLE组与正常人对照组T淋巴细胞ICOS表达水平则差异无统计学意义(P>0.05)。活动期组与非活动期组SLE患者T淋巴细胞ICOS表达水平均与SLEDAI呈显著正相关(r=0.71,P=0.001、r=0.56,P=0.03)。结论 活动期SLE患者T淋巴细胞ICOS表达增高,ICOS可能与SLE的发病机制有关。     

HLA-G5-IgGFc融合蛋白真核表达载体的克隆及鉴定

目的构建人HLA-G5-IgGFc融合蛋白真核表达载体。方法经重组PCR将HLA-G5和IgGFc基因拼接并插入T载体。鉴定后,双酶切得到融合基因并插入真核表达载体pcDNA3.1。结果PCR、限制性内切酶酶切和序列分析表明已构建pcDNA3.1-HLA-G5表达载体。结论成功构建了HLA-G5-IgGFc段融合蛋白真核表达载体。     

表达载体sHLA-A2-IgG1-Fc的构建与鉴定

目的构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgGl-Fc,为进一步真核表达可溶性HLA-A2-IgG1-Fc蛋白奠定基础。方法从T2细胞中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增包括信号肽的可溶性HLA-A2的cDNA序列并把其插入真核表达载体pcDNA3.0,然后经酶切和测序法鉴定;用PCR的方法从含IgG1-Fc基因的PIG质粒中扩增目的基因IgG1-Fc段,然后经酶切后插入前面构建好的表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2中,最后经酶切和测序法鉴定。结果经酶切鉴定及测序分析,证实已将目的基因HLA-A2和IgG1-Fc片段插入载体pcDNA3.0。结论本研究成功构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgG1-Fc。     

膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响

目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响。结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P<0.05),而IL-2,IFN-γI、L-4分泌无明显影响。结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移。     

原核表达小鼠可溶性Fas抑制活化诱导的脾细胞凋亡研究

目的 观察原核表达、制备小鼠可溶性Fas用于抑制活化诱导的脾细胞凋亡的效果.方法 通过RT-PCR从小鼠胸腺中扩增可溶性Fas基因,克隆至原核表达载体pET-28a( ),构建pET-sFas重组质粒,转化大肠杆菌BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得高表达的可溶性Fas.经镍柱亲和层析纯化后用于抑制刀豆素A(ConA)刺激下的脾细胞活化诱导凋亡.结果 基因测序、Western-blot鉴定证实为可溶性Fas的原核表达蛋白,该蛋白能抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生的凋亡[对照组凋亡率(70.3±4.9)%和实验组凋亡率(8.5±0.4.35)%有极显著差异(P<0.01)].结论 原核表达的可溶性Fas能够抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生凋亡,为进一步抑制活化的T淋巴细胞凋亡及体外大量制备抗原特异性T细胞提供思路.     

预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠

目的: 提高可溶性HLA -A2 肽复合物体外折叠效率。方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC)。通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽 (Try369-377 )存在的情况下, 于pH6. 6的折叠缓冲体系中稀释复性。利用Westernblot及ELISA检测折叠产物。结果: 折叠复合物中主要含有HLA-A2 抗原肽复合物和β2m, 较少含有HC聚合体; 折叠效率较传统方法提高 2. 5倍。结论: 通过与传统方法作比较, 证实此法折叠效率比传统方法高, 为进一步HLA 肽四聚体及人工抗原提呈细胞的制备可提供足够可溶性的HLA -A2 肽单体。     

细胞膜染料PKH26在淋巴细胞及其亚群增殖中的应用

目的 探讨细胞膜染料PKH26在淋巴细胞及其亚群增殖中的应用。方法 利用PKH26染色、荧光抗体标记和流式细胞术,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂刺激作用下荧光强度的变化,应用相关软件分析其增殖情况,并与传统MTT方法进行比较。结果 经不同浓度的多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）刺激72h后,两种方法均能检测淋巴细胞增殖情况,其增殖强度与刺激剂浓度呈正相关（r=0．999）。经同种细胞刺激6d后,结合CD8、CD3抗体染色,经ModFit软件拟合后,PKH26能显示的T细胞亚群与T淋巴细胞明显不同的细胞增殖动力。结论 PKH26染色结合荧光抗体标记和流式细胞术,是分析淋巴细胞及其亚群增殖动力的有力工具。     

黄芪刺五加合剂对小鼠免疫功能的调节作用

选用自然杀伤(NK)活性测定、肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素2(IL-2)诱生水平检测3项免疫指标研究黄芪(A)和刺五加(AS)合剂(简称A-AS合剂)对小鼠免疫功能的影响。并比较A-AS合剂及A或AS单剂的作用。结果显示:环磷酰胺(Cy)组所有免疫指标均显著低于正常对照组(P<0.001);Cy A-AS组与Cy A或AS组所有免疫指标均高于Cy组,但Cy A-AS组又明显高于Cy A或AS组。结果表明A-AS的作用明显强于A或AS,A-AS合剂对小鼠免疫功能有上调作用,而且A与AS具有一定的协同作用。     

尿酸辅助树突细胞诱导乙型肝炎病毒抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞效应的观察

近来研究提示,尿酸是免疫系统的一种重要的危险信号,它能刺激DC成熟,促进DC向T淋巴细胞呈递抗原．尿酸可能成为一种有效的免疫佐剂。本研究以尿酸辅助负载HBV表位肽S（28-39）的树突状细胞免疫接种小鼠,对其产生的HBV抗原特异性CTL免疫效应进行了报道。[第一段]