中国汉族人群检出B(A)803C→G等位基因并引起重度新生儿溶血病的研究

目的研究ABO血型系统中血清学定型违反一般血型遗传规律的家系中基因型的遗传学基础，并分析引起重度新生儿溶血病（HDN）的原因。方法对一母亲为O型、父亲为AB型、新生儿为AB型的家系进行研究。利用亲子鉴定，血清学实验，PCR-序列特异性引物（SSP）法和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法进行基因定型，揭示此家系的血型基因分子生物学背景。同时采用微柱凝胶技术做HDN检查，并对新生儿的主要生化和血常规指标进行动态观察。结果亲子鉴定结果显示三代AB型家系成员有亲子关系，本AB型家系成员血型血清学表现为红细胞与多种不同厂家的单克隆抗-A、抗-B和人源性抗-A、抗-B均发生强凝集（4＋）；反定型血清中不含有抗-A和抗-B抗体。PCR-SSP法未检出三代AB型家系成员的A和B型基因。ABO基因第6及第7外显子直接测序方法检测到三代AB型家系成员均有B（A）803C→G的变异基因存在。新生儿发生重度HDN。结论本家系遗传学基础是B（A）803G血型基因能够合成同时具有A和B双功能活性的糖基转移酶。首次报道了因B（A）血型新生儿红细胞上同时有大量A和B抗原而引起重度ABO系HDN。     

WARM试剂在去除温自身抗体检测中的应用

目的探讨并评价WARM试剂在温自身免疫性溶血性贫血患者输血前检查中的应用。方法选取32例直接抗球蛋白试验（DAT）强阳性的自身免疫性溶血性贫血患者样本，使用WARM试剂、氯喹试剂及热放散3种方法，比较自身抗体吸收及去除的效果。结果使用WARM试剂放散后，87．50％患者DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，81．25％患者血清用放散后的细胞吸收自身血清后，IAT凝集强度从2＋减弱为w＋；而52．17％患者使用氯喹试剂放散后，DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，39．13％患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后，IAT凝集强度从2＋减弱为w＋；另一方面使用热放散方法，21．73％患者DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，17．39％患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后，IAT凝集强度从3＋减弱为1＋。结论WARM试剂对于温自身抗体的放散及放散后红细胞对自身抗体的吸收效果，明显优于氯喹试剂和热放散方法。     

常见ABO抗原和稀有A2抗原同步基因分型的研究

目的建立人类ABO血型系统的同步基因分型法研究ABO血型。方法采用PCR-SSP技术,设计合成13对序列特异性引物,摸索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+浓度等,使ABO系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳;使用此方法,检测34例已知血清学ABO血型的与20例已知序列的A2亚型标本。结果用基因分型法检测出的ABO常见基因和A2基因,与已知血清学ABO分型结果相符合。结论该ABO基因分型方法适合中国人ABO基因常规鉴定与研究。     

Ax新基因的序列分析及其家系的研究

目的探讨Ax亚型中国汉族家系的ABO基因的分子生物学特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应扩增法对血清学定为Ax血型的家系总共5份样本做基因分型，对其中4份样本进行直接测序，发现2份有异常杂合序列，进一步采用单倍体特异性引物进行序列测定。结果这个家系中2份ABO基因序列与ABO＊A101相比有3个位点发生了突变（467C〉T、829G〉A，1009A〉G），定为舭新基因，Genbank注册号为DQ092380。结论829位突变导致编码ABO糖基转移酶的277位氨基酸由缬氨酸（Val）转变为甲硫氨酸（Met），很大程度上降低了A2糖基转移酶的活性。推测277位氨基酸处于ABO血型基因编码的转移酶的活性区域。     

双重复合型ABO糖基转移酶分子基础与表达产物的分析

为了查明ABO基因表达产物和分子遗传学背景，对7例ABO血型正反定型不相符、经初步分子生物学分析出现双重复合型ABO基因的血液标本进行了研究。血清学表达型运用单克隆、多克隆抗体鉴定，基因分型运用PCR产物直接和单倍体特异性引物法进行ABO基因的序列测定。结果表明：在中国人群中鉴定出6种具双重复合编码功能的ABO等位基因，B（A）和cis-AB血清型所表达的A抗原特征随着个体的不同而有所差异。结论：4个标本中有2对样本有不同的抗原表达却有着相同的ABO分子生物学基础。     

中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位一所市级血液中心输血医学研究所.对象选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

Jk~a抗原弱表达与JK基因第4外显子130A的相关性分析

目的研究分析在中国人群中发现的Jka抗原弱表达(Jka+w)与JK基因第4外显子130A的相关性。方法共有3800例中国深圳地区汉族献血者的全血标本,经尿素溶解试验筛检并采用常规血型学方法鉴定出Jk(a+w b-)表现型3例,同时选取100例非相关献血者作为对照组。基因组DNA通过聚合酶链反应扩增JK基因第4—11外显子及部分内含子片段,并对PCR产物进行直接测序比对分析。结果 1)3例Jk(a+wb-)表型中,2例JK基因第4外显子nt130位点为G/G纯合子,且携带JKB/JKB等位基因;另1例为nt130G/A杂合子,携带JKA/JKB等位基因。2)对照组100例Kidd血型表型分别是,24例Jk(a+b-)型,43例Jk(a+b+)型,33例Jk(a-b+)型。在24例Jk(a+b-)表型中,1例nt130G/G纯合子,6例nt130G/A,17例nt130A/A;43例Jk(a+b+)表型中,为7例nt130G/G,36例nt130G/A;33例Jk(a-b+)中均为nt130G/G纯合子基因型。3)在这103例标本中JK基因第8内含子5'端84位A突变为T,且均为84T/T纯合子。结论 130A突变位点在中国人群中较为常见,但未能证明是引起Jka抗原弱表达的原因。     

中国人群MN血型中M、N等位基因多态性的研究

目的:检测血型糖蛋白GPA相关基因GYPA中全部外显子与部分内含子碱基序列,探讨中国人群MN血型中M、N等位基因的多态性。方法:随机选取国籍为中国人的无偿献血者225人份的血液样本,以血型血清学方法鉴定M、N血型表现型;自行设计引物,直接测序相关样本GYPA基因的exon-1~7全长碱基序列以及intron-1~7中部分碱基序列,根据序列中碱基的变异分析M、N基因的多态性。结果:M、N血型的基因定型与血清学检测结果一致;根据intron-1中-9位,exon-2中1、22、34、35、56位,intron-2中23位,intron-3中55位,intron-4中63位,intron-5中1373、1374、1375位,intron-6中55、189、190位和exon-7中712位等的变异,可以把M、N基因细分为M101、M102、M103、M201、M202、N101、N102、N103、N104、N201;同时,本研究发现在G YPA基因的intron-2中42、54位突变与59、60位间插入碱基T的变异;intron-3中-28、-29、-65、-102位等基因位点存在新的变异。结论:MN血型中M、N基因具有多态性,中国人群GPA相关基因G YPA的各外显子、部分内含子的结构特点揭示了中国人群的M、N血型基因的多态性,为临床输血、人类群体遗传学及分子生物学的研究提供相关的基础。     

A_2亚型相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域多态性的研究

目的鉴别中国汉族人群ABO血型系统中A2亚型的ABO基因CCAAT-连接因子/NF-Y增强区域多态性。方法从2 940个随机选择的A或AB型中国人中筛选出的24个A2表现型,已确认其ABO基因型。PCR扩增所有样本的ABO基因5端调控(CBF/NF-Y增强子)区域,得到不同长度的片断产物,经胶回收后进行直接序列测定。结果7个含A201等位基因的样本在ABO基因CBF/NF-Y增强子区域,是4个43碱基长度重复的微卫星序列,15个含A205等位基因的样本在此区域是1个43碱基长度重复的微卫星序列,且核苷酸41位有碱基替代(G>A)。2个基因型为A102/B101的样本中未发现异常分子背景。结论A2相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域具有微卫星片段长度多态性。描述了中国汉族人群A2型相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域多态性。     

中国汉族人群红细胞MNS血型系统M、N抗原数量表达的研究

目的 探讨中国汉族人群不同个体红细胞M、N血型抗原数量的表达情况.方法 从962例中国汉族献血人群中随机选取MM型、MN型、NN型各50例,以血型血清学、PCR-SSP基因分型技术确定血型,应用流式细胞术分析M抗原和N抗原表达量.结果 962例献血者中MM型占24.01%、MN型占47.19%、NN型占28.79%.选取的150例样本基因分型与血清学结果完全相符.MM型个体间M抗原平均荧光强度极差为432.78;MN型个体间M抗原平均荧光强度极差为425.06;MN型个体间N抗原平均荧光强度极差为6.38;NN型个体间N抗原平均荧光强度极差为35.74.MM型的M抗原数量约为MN型的2.686倍;NN型的N抗原数量约为MN型的4.268倍.结论 中国汉族人群M或N抗原数量的表达在不同个体间差异明显.