Y染色体特异STR位点应用于无创伤性产前胎儿遗传信息的研究

目的 建立利用孕妇血清进行无创伤性产前胎儿分子遗传信息分析的方法。方法 采集53名11～36孕周的孕妇的血清,利用血清中胎儿DNA,采用”Y-PLEX 6”试剂盒,复合扩增DYS393、DYS19、DYS389 Ⅱ、DYS390、DYS391和DYS385等6个Y-STR位点,PCR产物经基因测序仪电泳检测,用相关软件分析Y-STR基因型。结果 ①29名分娩出生证实为男婴的孕妇,均检测出特异性Y-STR等位基因。检测的6个Y-STR位点,以DYS393位点的检出率最高(29/29);其次是DYS19位点,检出率为62.07％(18/29);再次是DYS390位点,检出率为34.48％(10/29);其余的DYS389 Ⅱ、DYS391和DYS385位点的检出率则较低。②24名分娩出生证实为女婴的孕妇,均未检测出特异性Y-STR等位基因。③根据DYS393位点是否检测出特异性等位基因,以及该基因波峰的高度和波峰面积值,鉴定胎儿性别的准确率达100％。④29名妊娠男婴的孕妇的血清样本,检测出的Y-STR等位基因与“丈夫”的相一致。结论 本研究建立的无创伤性Y-STR分子遗传分析方法,具有多态性丰富、灵敏度高、特异性强等特点,提高了无创伤性产前胎儿性别遗传鉴定的准确性,同时为解决妊娠男婴的亲子鉴定提供了理论依据,具有广泛的应用前景。     

Diego血型基因分型技术的研究及应用

传统的Dia和Dib相应的ISBT符号为DI1和DI2,这是Diego血型系统中最具有临床意义的一对抗原.Diego血型系统抗原相应的抗-Dia可以引起新生儿溶血病,也可以破坏输入的Dia抗原红细胞,抗-Dib非常罕见,但同样能引起新生儿溶血病(HDN)和溶血性输血反应,具有临床意义,Dia和Dib抗原可以用血清学方法鉴定,但试剂较为昂贵,特别是抗-Dib定型试剂,市场上更是难以购买,且临床因产生抗-Dib所引起的输血问题,寻找相合的血源是非常困难的,我国随机人群中调查DI1基因频率为0.0357,DI2基因频率为0.9643,Di(a+b-)表现型的人低于千分之一[1],因此,笔者建立了Diego血型基因分型技术,并用于临床Diego血型的鉴定,以及Di(a+b-)献血员的筛检.     

中国汉族人FUT2基因点突变初步研究

目的　了解中国汉族人分泌型基因 (FUT2 )点突变的情况。方法　采用直接测序法及分子克隆测序法对 4 1名中国汉族个体的FUT2基因进行检测 ,并与Kelly报道的分泌型基因的序列作比较分析。 结果　 4 1名中国汉族个体中未见G4 2 8A突变 ,但发现A385T和C35 7T突变 ,其中 2 4人有A385T突变 ,17人无A385T突变 ,而所有个体都有C35 7T的同义突变。结论　在 4 1名中国汉族人群中没有发现在非洲和高加索人非分泌型中常见的G4 2 8A点突变 ,但存在着A385T、C35 7T两种不同于白种人的FUT2基因点突变。     

ABO血型基因转录调控机制中微卫星序列的研究

目的研究与AB0血型基因转录机制中CBF／NF—Y调控因子黏附的AB0基因5’端微卫星序列。方法收集且筛选出已经AB0表达编码序列测定的AB0基因型血液DNA标本共计21例，其中包括A101／A101基因型的标本2个，A102／A102基因型的标本5个，B101／B101基因型的标本5个，001／001型3例，002／002型6例，设计引物，PCR扩增AB0基因5’端-nt3949至-nt3612住，产物经胶回收后，使用同样的引物进行直接序列测定。结果A101和A102等住基因在CBF／NF—Y黏附区域的微卫星序列只有一个43碱基长度的重复，B101，001，002等住基因在此区域是四个43个碱基长度的重复；且A101等住基因的这个43碱基的第nt41住为A，而B101等住基因的4个重复序列中nt41均为G，001和002的第1个重复中nt41为C，另外3个重复序列的nt41为G。结论转录调控因子黏附的ABO血型基因的微卫星增强子序列根据AB0基因的不同呈现变异，所有常见的AB0等住基因在此区域呈现多态性。     

血小板供者组群招募与临床血小板配型保障

目的通过需求分析和招募供者组群以保障配型血小板的疗效与供应。方法依据患者的病情,将患者需求分为短期、阶段、长期供应型3类。再根据配型试验结果、血小板输注剂量、频率与疗效等构建供者组群,供者数量适当冗余,以预防意外。结果 2005～2009年间,血小板相容性配合患者30人,招募685位机采血小板志愿捐献者参与配型实验,筛出264位相容性供者,分别组成与患者对应的供者组群,其中217位供者捐献了385 U的机采血小板。结论在无偿献血的基础上,通过供需分析和对配型供者的有效组织,变被动为主动,能够保障配型血小板的疗效与供应。     

广西壮族自治区人群华支睾吸虫感染与MN 血型基因的相关性研究

目的　调查广西壮族自治区人群华支睾吸虫高发人群与低感染人群的分布状态及MN 血型基因的相关性，深 入了解华支睾吸虫的感染情况，为预防与治疗华支睾吸虫病打下基础。方法　以广西壮族自治区的武鸣区、贵港平南区 两个代表性地区作为调查研究对象，以酶联免疫法随机筛查贵港平南区500 例、武鸣区700 例的15~65 岁居民，分别 采集3ml 抗凝血与3ml 不抗凝血，共检测1 200 例人群血清中的华支睾吸虫IgG 抗体；通过血型血清学检测样本的红细 胞血型糖蛋白MN 血型，用基因分型的方法鉴定MG 与MT 的型别。结合两个区的调查总人数、华支睾吸虫抗体阳性率、 阴性率、MN 血型的血清学与基因分型作为统计数据。结果　两个具有相同生活饮食习惯地区人群的华支睾吸虫感染率 具有显著差异，即武鸣区华支睾吸虫感染率高达62%，其M 基因频率、N 基因频率、MG 基因频率和MT 基因频率分别 为72%，28%，68.6% 和31.4%。贵港平南区华支睾吸虫阳性感染率只有3.4%，其M 基因频率、N 基因频率、MG 基因 频率和MT 基因频率分别为69%，31%，82.3% 和17.7%。结论　广西壮族自治区华支睾吸虫的感染率具有地区间的明 显差异，而红细胞糖蛋白血型的M，N，MG 和MT 基因频率未发现明显差异，另外未发现饮食习惯与两区华支睾吸虫 的易感因素直接相关。     

健康献血者血浆可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性及阴性中表达差异的分析研究

目的 分析健康献血者血浆中可溶性糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)表达量与抗-M及抗-“Mia”抗体的相关性。方法 收集2022年2月9日～2023年2月15日的健康献血者血浆：不规则抗体阴性的NN型（Ⅰ组,n=118）与MM型（Ⅱ组,n=51）,抗-M抗体阳性的NN型（Ⅲ组,n=145）与抗-“Mia”抗体阳性的随机型（Ⅳ组,n=87）,分别检测4组人不同个体血浆中GPA的含量,t检验分析GPA表达量的差异。结果 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GPA平均含量分别为：9.941±0.252,10.97±0.256,5.139±0.129和4.28±0.139ng/ml。Ⅰ组与Ⅱ组的GPA平均含量较高,Ⅲ组与Ⅳ组的GPA平均含量较低,显示GPA平均含量在不规则抗体阴性（Ⅰ组与Ⅱ组）的血浆中较高,在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性（Ⅲ与Ⅳ组）的血浆中较低,差异具有统计学意义（均P <0.01）。结论 含有抗-M与抗-“Mia”抗体的健康献血者血浆中GPA含量明显低于抗体阴性的群体。该研究结果为深入探讨血浆中GPA是否有中和抗-M与抗-“Mia”抗体的能力,提高疾病诊断与安全...     

基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的 探计将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法 报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，采用快速盐析法提取外周血中的DNA，用PCR—SSP法扩增ABO血型等位基因。结果 一家5人中，兄弟3人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、Al20O1，而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论 ABO PCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显优势。     

RHD mRNA剪接体与RhD抗原表达的相关性及其在输血及妊娠中的免疫应答研究

目的通过探讨RHD mRNA剪接体多态性与RhD抗原表达的强度在临床输血、妊娠中的异常免疫应答,为RhD血型定型标准与输血原则提供理论依据。方法选择案例1:RhD阳性(血清学凝集强度达4+)的男性患者因为多次输RhD阳性血合并自身免疫性疾病,血浆中产生了抗-D。案例2:RhD弱阳性孕妇怀孕RhD阳性胎儿产生了抗-D。案例3:Rhccdee表型的地贫患儿因长期(8年)输注常规定型为RhD阴性的血液后产生了抗-D。以上3例样本提取全血的mRNA通过反转录成cDNA,使用RT-PCR法通过自主设计的引物进行扩增测序与分析RHD mRNA剪接体的多态性结构。结果所选的3例患者中患者1、患者2均以3种剪接体的多态性表达了RHD基因。患者1的RHD mRNA剪接体形式:剪接体1与RHD基因参比序列全长一致,剪接体2与RHD基因参比序列相比缺失exon-7,并且在exon-3的第426位发生CA突变、exon-5的707位发生AG突变、713位发生TC突变,剪接体3与RHD基因参比序列相比缺失exon-7,8,9;患者2的RHD mRNA剪接体:剪接体1与RHD基因参比序列全长一致,剪接体2与RHD基因参比序列相比缺失exon-8,9,未发现其他核苷酸突变,剪接体3与RHD基因参比序列相比缺失exon-7,8,9;因为患者3是RhD阴性,缺失RHD基因全部外显子,因此未检测到RHD mRNA剪接体的多态性。结论 RhD抗原的表达直接受RH基因调控,RhD mRNA剪接体的多态性决定RhD抗原强度的差异。RhD抗原弱阳性或阴性的受血者在接受RhD阳性血液时也受同种异体免疫产生抗-D的风险。     

MiniSTR技术应用于孕妇血浆中胎儿游离DNA检测的研究

目的研究利用母血中胎儿游离DNA检测STR的方法。方法采集9名11—27孕周的孕妇抗凝血样并分离出血桨,提取血浆总DNA,利用ABI MiniFilerTM系统复合扩增D13S317、D7S820、D2S1338、D21S11、D16S539、D18S51、CSFIPO、FGA等8个常染色体miniSTR基因座和性别Amelogenin基因座,扩增产物经ABI 3100型基因测序仪作基因扫描检测,用GeneMapper ID 3.2软件分析结果。结果9例孕妇血浆样本中,均检出了父源性胎儿STR等位基因,D13S317等8个常染色体STR基因座中,平均检出胎儿特异等位基因3.1个/例。在性别Amelogenin基因座,Y等位基因检出的案例有5例,并且按ABI MiniFilerTM试剂盒的扩增条件,Amelogenin Y等位基因的荧光信号峰高均>50 RFU,平均占Amelogenin X等位基因峰高的8.45%;未检出Amelogenin Y等位基因的有4例,性别Amelogenin基因座的结果与出生后证实的胎儿性别相一致。结论MiniSTR技术适合于孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测,在产前分子基因诊断中具有广泛的应用前景。