结核分支杆菌铁调控蛋白FurA的基因表达及单克隆抗体的制备

目的表达结核分支杆菌FurA蛋白,并制备针对该蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法将重组质粒转化入E.coliBL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠,并进行细胞融合、克隆化制备抗FurAmAb,用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力。结果获得了高表达的融合蛋白,融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子量Mr为23×103处有特异的蛋白条带,为目的蛋白。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了1株抗FurAmAb。结论所获得的抗FurAmAb特异性强、效价高,对进一步研究FurA在结核分支杆菌铁代谢及致病中的作用提供了有力的工具。     

医学微生物学实验教学体会

实验课在医学微生物学整体教学中占有很重要的比重,结合实践教学经验,提出一些教学体会,如充分的课前准备,活跃的课堂气氛,丰富的课后科研等,以期在提高教学效率、改进教学方法上具有借鉴作用.     

新型结核疫苗的研究进展

结核病是一种古老的疾病。据估计,全世界有1/3的人口感染结核分枝杆菌（mycobacterium tuber-culosis,MTB）,每年大约有200万结核病患者死亡,90%的感染者为潜伏感染,病原体以休眠的方式存在于机体内,约有10%的感染者为活动性结核患者。在一些发展中国家,对结核病的预防和治疗相当落后,结核病仍然阻碍社会经济的发展,新型结核疫苗     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.