巨噬细胞趋化检测方法的建立及皮质酮对其趋化功能的影响

目的建立改良Boyden趋化小室（Boydenchamber）法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。方法分离成年Sprague—Dawley（SD）大鼠腹腔巨噬细胞。应用48孔Boydenchamber趋化板检测趋化功能。下室加入27μL的10nMFMLP作为趋化剂或含1％牛血清清蛋白的RPMI一1640作为阴性对照,将50μL不同细胞密度的大鼠腹腔巨噬细胞悬液（3、6、12×10^6／mL）置于上室以确定最适细胞密度,将趋化装置置于5％C02、37℃细胞培养箱内孵育2、3h以确定最适孵育时间。同时,以0、10、50、1000ng／mL皮质酮处理大鼠腹腔巨噬细胞,应用Boydenchamber法检测巨噬细胞趋化功能。结果巨噬细胞对10nMFMLP趋化剂呈细胞密度依赖性增加,上室巨噬细胞密度为6×10^6／mL时为最适细胞密度,并且最适孵育时间为3h。低浓度皮质酮（10、50ng／mL）处理大鼠腹腔巨噬细胞其趋化指数显著高于对照组（P〈0．01）,而高浓度皮质酮（1000ng／mL）处理后巨噬细胞趋化指数与对照组相比差异不明显。结论成功建立了改良Boydenchamber法检测巨噬细胞趋化功能方法,皮质酮可呈剂量依赖性地影响巨噬细胞趋化功能,在无免疫刺激状态下,低浓度皮质酮能增强巨噬细胞趋化功能。     

去甲肾上腺素增强大鼠腹腔巨噬细胞免疫功能

交感神经对免疫组织具有广泛的支配[1],但是其免疫调控作用尚不清楚.去甲肾上腺素是交感神经末梢释放的主要神经递质,因此通过体外实验观察不同浓度去甲肾上腺素对巨噬细胞免疫功能的影响,探讨交感神经系统对免疫功能的影响.     

药物临床试验期间可疑且非预期严重不良反应个例安全性报告常见问题分析与思考

药物临床试验期间可疑且非预期严重不良反应(SUSAR)个例安全性快速报告制度已在我国建立与实施,对于完善我国临床试验期间药物警戒制度与技术体系、加强临床试验风险监管具有重要意义。由于该项工作开展时间较短,目前申办者递交的SUSAR个例报告在规范性、完整性、准确性等方面还存在一些问题和欠缺。本文对于基本层面常见问题进行简要梳理和分析,以供临床试验申办者及药物警戒人员作为进一步完善相关工作的参考。     

去甲肾上腺素对脂多糖诱导的巨噬细胞活化的影响

目的 检测去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的腹腔巨噬细胞活化的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 收集大鼠腹腔巨噬细胞,分别用不同浓度(2～100 ng/ml)NE预处理1 h或以10 ng/ml NE分别预处理0.5～5 h后,再用LPS刺激1h,分别检测巨噬细胞吞噬功能和分泌TNF-α能力;RT-PCR法检测其CD14、清道夫受体(scavenger receptor,SR)和TLR4表达水平.结果 低浓度(2～10 ng/ml)NE显著促进LPS诱导的巨噬细胞吞噬和分泌TNF-α,而更高浓度(50～100 ng/ml)对此无作用;时效作用方面,NE处理1 h对LPS诱导的TNF-α分泌促进作用最明显.同时,低浓度(2～10 ng/ml)NE促进巨噬细胞CD14和SR的表达,更高浓度对其表达无影响;各浓度NE对TLR4表达水平无影响.结论 一定浓度NE可增强LPS对巨噬细胞的活化,并且此过程与巨噬细胞CD14和SR表达水平升高有关.     

析因设计解析祛斑中药复方体外干预黑色素生成的主效应中药

目的解析祛斑中药复方干预黑色素合成的主效应中药。方法采用3×2析因设计表,以山楂、当归、山茱萸为考察因素,各设2水平,分别测定自由基清除活性抑制率、SOD样活性抑制率、抗紫外线催化作用抑制率、促黑色素分解作用抑制率,并运用SPSS16.0软件辅助解析该复方对干预黑色素合成不同途径的主效应中药。结果各药对自由基清除活性抑制率依次为FC因素>FA因素>FB因素*C因素>FB因素,山茱萸对其具有显著抑制作用（P<0.05）;各药对抗紫外线催化作用的抑制率依次为FA因素>>FB因素>Fc因素,山楂对其具有显著抑制作用（P<0.05）。组方对SOD样活性、促黑色素分解作用均呈现出一定的抑制作用。结论山茱萸、山楂分别为组方中抑制自由基清除活性、抗紫外线催化作用的主效应中药。     

实验机能课双语教学探讨

为了培养新时代的医学人才，在生理学实验机能课教学中实行政语教学。该文就采取灵活的教学方式及教师学生互动。教学相长等方面予以探讨。     

小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体和CD14表达与肺损伤的相关性研究

背景清道夫受体(scavenger receptor,SR)和CD14与内毒素性肺损伤密切相关,进一步揭示其表达变化规律及其与肺损伤的关系,有助于深入阐明创伤、感染后肺脏炎症反应失衡的受体机制.目的探讨创伤及合并内毒素攻击时肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达及其效应.设计随机对照的实验研究.单位解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室.材料实验于2001-08/11在第三军医大学野战外科研究所(国家重点实验室)完成.选用63只昆明种小鼠及其肺泡巨噬细胞.方法实验动物随机分为对照组、创伤组和创伤合并内毒素组.采用双侧股骨骨折合并内毒素攻击小鼠模型,内毒素(5 mg/kg)于骨折后1h经小鼠尾静脉注入,检测创伤及合并内毒素攻击后小鼠肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达变化.结果创伤后6 h,肺泡巨噬细胞CD14和SR分别呈上调和下调表达,合并内毒素攻击后CD14和SR进一步发生显著的上调和下调性改变.相关分析显示肺泡巨噬细胞CD14和SR呈负相关关系.结论创伤及合并内毒素攻击后肺泡巨噬细胞CD14和SR的双向调变可能与肺脏炎症反应由"自控"向"失控"转化有关,有效拮抗CD14和SR的双向调变策略,有助于进一步认识肺损伤及其修复机制.     

533例汶川地震伤员感染流行病学分析与思考

目的 探讨综合性医院在地震等自然灾害中的应急反应能力和对伤员感染的救治水平.方法 选择2008年5月12日汶川大地震后转送至重庆6所三级甲等医院的533例地震伤员,结合创伤ISS和AIS评分,根据伤情及其与院内外感染的关系和抗生素敏感性等指标进行全面的回顾性分析.结果 533例后送伤员中,ISS<16分456例(85.6%);ISS 16-25分65例(12.2%),ISS>25分12例(2.3%).骨折433例(81.9%).头、颈部损伤42例,面部损伤7例,胸部损伤114例,腹部、盆腔损伤81例,四肢、骨盆损伤314例,体表损伤205例.仅有1处骨折180例,2处骨折139例,3处及以上骨折114例,截肢32例,挤压综合征21例,院内手术处理281例.感染79例,院外感染占87.3%.合并感染伤员抗生素敏感性实验结果显示,病原菌以大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼复合不动杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、C群链球菌为主,少数发生产气荚膜杆菌感染.敏感及耐药抗生素谱系各不相同且有部分重叠.抗生素选择应以头孢类和大环内酯类抗生素等为主.结论 在自然灾害紧急条件下,对伴有不同程度感染的骨折伤员,科学使用抗生素并采取综合有效的防护性救治措施对于加强伤员早期救治,预防严重创伤并发症,促进伤员康复具有重要意义.     

基于中文科研论文数据的我国中药资源科技人才普查方法与应用研究

为摸清中药资源领域科技人才的基本情况,该研究基于中文科研论文数据,对我国中药鉴定、质量标准、中药栽培、采收加工、市场开发、资源保护等7个中药资源子领域的论文数据、作者数据、核心团队、高产作者数据和高被引作者数据以及人参、黄芪等82个常用中药品种的相关数据进行了普查;并采用"高产作者"与"高被引作者"相结合的评价方法,遴选了115位领域权威专家;构建了"中药资源科技人才-中文论文"普查数据平台,实现了按研究领域、按年代、按中药品种进行科技人才、核心研究团队及其论文产出的多维度检索,可为管理部门提供中药资源领域科技人才的基本数据,为人才选拔和团队建设提供依据。     

Treg-Th17荧光双标纯合子小鼠的培育及其在内毒素血症研究中的初步应用

目的 培育Treg - Th17荧光双标纯合子小鼠并探讨内毒素血症发生过程中Treg -Th17平衡的作用规律. 方法 从美国哈佛大学医学院引进Treg和Th17荧光单标小鼠,依照遗传学规则进行配对繁殖,提取子2代离乳仔鼠尾部组织DNA,通过PCR方法进行基因分型,选取荧光双标纯合子小鼠连续自交3代并检测其基因型和生活状态;制备该小鼠内毒素血症模型,流式细胞检测内毒素血症发生24 h和48 h Treg-Th17平衡的变化. 结果 第一批7只子2代小鼠中有3只小鼠(2♂1♀)为所需纯合子,自交3代连续基因分型结果均为Foxp3 RFPKI - homo -IL - 17A GFPKI,而且小鼠生长状态正常;内毒素重要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理能诱导明显的红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)信号表达;LPS处理24h组总体淋巴细胞中CD8a+ Foxp3+、CD8a+IL- 17A+、CD4+Foxp3+和CD4+ IL - 17A+的数量百分比明显上升(P＜0.01或0.05),但对照组与LPS处理48 h组之间的差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 本实验培育的Foxp3 RFPKI - homo - IL - 17AGFPKI小鼠具有相同的基因表型和稳定的遗传学特征,是一种能够有效实时监测机体Treg - Th17平衡变化的模式动物和全新在体研究平台;Treg -Th17平衡作用在LPS刺激48 h内表现显著;CD8a+ Foxp3和CD8a+ IL - 17A+在Treg - Th17平衡中的作用值得进一步关注.