低亲和力CTL表位肽在治疗性肿瘤疫苗中应用的研究

因为细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs）在肿瘤控制中起着重要作用,所以基于CTL表位（epitope）的治疗性肿瘤多肽疫苗已经成为当前肿瘤综合生物治疗中一个倍受瞩目的策略。传统的免疫治疗策略通常选择与MHC-Ⅰ类分子具有高亲和力的CTL表位肽作为治疗工具,但部分高亲和力的CTL表位肽在体内往往有免疫耐受或者副反应。近来研究表明：低亲和力的CTL表位肽及其改构体能很好地克服这些问题。本文就低亲和力CTL表位肽及其改构体在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述。     

美金刚联合盐酸多奈哌齐治疗阿尔茨海默病的效果评价

目的分析美金刚联合盐酸多奈哌齐治疗阿尔茨海默病(AD)的临床效果。方法 100例阿尔茨海默病患者,按照患者治疗的时间顺序分为常规组和联合组,各50例。常规组患者接受盐酸多奈哌齐治疗,联合组患者接受美金刚联合盐酸多奈哌齐联合治疗。对比两组患者生活情况、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、简易智力状态检查量表(MMSE)评分、日常生活能力量表(ADL)评分及不良反应发生情况。结果联合组患者生活基本完成率明显高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组患者MoCA评分(24.01±2.93)分、MMSE评分(22.49±3.30)分、ADL评分(75.29±6.53)分均明显高于常规组的(19.13±2.45)、(18.43±3.76)、(65.68±5.86)分,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组患者不良反应发生率明显低于常规组,差异有统计学意义(χ2=4.574, P<0.05)。结论阿尔茨海默病患者接受美金刚联合盐酸多奈哌齐联合治疗,可取得满意的治疗效果,降低不良反应发生率,有助于提升老年患者的认知功能、自理能力,值得推广。     

含IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞功能

目的：研究含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的功能影响。方法：构建含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗，免疫小鼠后，分离脾脏淋巴细胞，分析CTL的表面分子，分泌细胞因子能力，细胞毒功能和抗凋亡能力。结果：含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗能上调CTL的CD8和CD44分子表达，促进IFN-1分泌，增强细胞毒功能，提高抗凋亡能力。结论：IL-15能发挥很好的佐剂效应，增强CTL的功能，有望在抗肿瘤研究中得到很好的应用。     

乙肝疫苗弱与无应答者外周血HBsAg抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞的体外诱导

目的 用乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)在体外刺激乙肝疫苗弱、无应答者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),看是否能够诱导出一群HBsAg特异性的CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 regulatory T cell,简称Treg).方法 分离并培养乙肝疫苗强应答、弱应答和无应答者的外周血PBMCs,用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和HBsAg刺激,并设不加抗原的空白对照.流式细胞仪检测抗原刺激后Treg细胞的表达频率,并用噻唑蓝比色法(MTT)检测培养细胞的增殖反应.结果 弱、无应答组PBMC经HB8Ag刺激后Treg细胞的表达频率与PHA刺激孔和不加抗原的空白对照孔相比,明显上升(P＜0.01);而强应答组HBsAg,PHA刺激孔以及空白对照孔三孔之间Treg细胞的表达频率均无显著差异.MTT法检测细胞增殖反应,发现弱、无应答组与强应答组相比,HBsAg刺激后细胞增殖反应明显降低(P＜0.01),但三组之间PHA刺激孔以及空白对照孔均无显著差异.结论 乙肝疫苗弱、无应答现象可能是由于注射疫苗后,在体内诱导出了一群HBsAg特异性的Treg细胞,而这群具有抑制功能的T细胞介导了机体细胞及体液免疫功能的下降,从而导致弱、无应答现象的发生.     

射波刀与射频消融治疗小肝癌的近期效果比较

目的比较射波刀与射频消融治疗小肝癌的疗效及安全性。方法选取2017年10月-2018年3月解放军总医院第五医学中心收治的初治小肝癌患者80例,其中35例患者接受射波刀治疗,共41个靶病灶; 45例患者接受射频消融治疗,共47个靶病灶。观察两组患者的客观有效率(完全缓解+部分缓解)、1年总生存率、1年局部控制率以及术后不良反应的发生率。计数资料2组间比较采用χ2检验或连续校正χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法计算局部控制率,并应用log-rank法检验。结果研究共随访6. 0～17. 7个月,中位随访时间13. 5个月,其中2例(2. 5%)患者失访,每组各1例。射波刀组31个病灶(75. 6%)完全缓解,4个病灶(9. 8%)部分缓解,4个病灶(9. 8%)稳定,2个病灶(4. 9%)进展,客观有效率为85. 4%,1年总生存率为100%,1年局部控制率为94. 3%;射频消融组38个病灶(80. 9%)完全缓解,9个病灶(19. 1%)进展,客观有效率为80. 9%,1年总生存率为100%,1年局部控制率为91. 0%。2组客观有效率和局部控制率比较,差异均无统计学意义(P值均 0. 05)。2种治疗方式术后不良反应多为1～2级,均未出现严重不良事件。结论射波刀治疗小肝癌的安全性及有效性与射频消融治疗相当,是小肝癌治疗的备选方案之一。     

小鼠4-1BB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外瞬时干扰效应的研究

目的 采用小片段RNA干扰(small interference RNA,siRNA)技术,通过构建系列小鼠4-1BB(m4-1BB)基因的特异性siRNA表达载体,体外观察对m4-1BB基因的瞬时沉默作用,筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体.方法 设计并合成4条针对小鼠4-1BB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列,插入真核表达载体(pENTRTM/U6 ),构建m4-1BB序列特异性siRNA 表达载体,根据靶位点分别命名为p336、394、498及763 siRNA,无关干扰质粒为pLacZ siRNA;通过体外m4-1BB真核表达质粒p4-1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-7细胞,48h后通过RT-PCR和FACS(fluorescence-activated cell sorter,荧光活化细胞分选仪)观测COS-7细胞4-1BB mRNA及蛋白表达水平.结果经测序分析,各m4-1BB siRNA表达载体构建成功;其中p498 siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7 细胞,48h后可观察到细胞表面4-1BB分子明显下调,其胞内mRNA水平也显著降低,与无关干扰组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).其余siRNA载体,几乎无干扰效应,与无关干扰组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论我们所构建的p498 siRNA 真核表达载体,能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达,可望用于m4-1BB Lentivirus干扰表达系统的构建,进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默,以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响.