含IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞功能的影响

目的:研究含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的功能影响。方法:构建含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗,免疫小鼠后,分离脾脏淋巴细胞,分析CTL的表面分子,分泌细胞因子能力,细胞毒功能和抗凋亡能力。结果:含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗能上调CTL的CD8和CD44分子表达,促进IFN-γ分泌,增强细胞毒功能,提高抗凋亡能力。结论:IL-15能发挥很好的佐剂效应,增强CTL的功能,有望在抗肿瘤研究中得到很好的应用。     

免疫磁珠负性分离纯化小鼠脾脏CD8+ T细胞

目的 探讨小鼠脾脏CD8 T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测.方法 以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8 T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增殖能力. 结果 经过流式细胞仪测定免疫磁珠负性分选后的小鼠脾脏CD8 T细胞纯度达到(91.6±3.6)%,台盼兰染色细胞活力为(94.9±3.2)%,ConA刺激72 h后有(56.3±1.7)%的细胞增殖.结论 免疫磁珠负性分选法能够分选出高纯度的CD8 T细胞,并且不影响分选靶细胞的细胞活力和功能.     

乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达研究

目的:检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况及PD-1在Treg中发挥的作用.方法:用流式细胞术检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况.结果:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率为(48.7±2.9)%,显著高于乙肝疫苗应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率(16.3+1.4)%.结论:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率的显著上调,有可能参与了Treg的抑制机制.     

CD4+CD25+调节性T细胞对乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞分泌IL-4水平和抗-HBs产生的影响

摘要 目的：通过分析乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞（PBMC）剔除CD4+CD25+调节性T细胞（简称Treg）和不剔除Treg细胞后，用乙肝表面抗原（HBsAg）诱导，检测其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平，来探讨Treg细胞与乙肝疫苗弱/无应答现象的关系。方法：选择25例乙肝疫苗无应答者，30例弱应答者，同时选择20例强应答者作为对照，用HBsAg在体外诱导剔除和不剔除Treg细胞的三组人外周血PBMC，采用酶联免疫吸附法（ELASA）测定培养上清的IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平。结果：剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平强应答组、弱应答组和无应答组相比无显著差异（P>0.05），其抗-HBs的产生水平也无显著差异（P>0.05）；不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比差异显著（P<0.01），弱/无应答组的IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平显著低于强应答组。结论：不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比显著低下。由于IL-4主要是由Th2细胞分泌，因此我们推测乙肝疫苗弱/无应答现象可能是由于Treg细胞抑制了Th2细胞的极化，从而影响了机体的体液免疫应答。     

核辐射对机体的影响

机体受到一定剂量核辐射后会出现多个器官结构和功能的改变。本综述了机体受到低剂量核辐射后出现的免疫细胞数量和功能变化，包括淋巴细胞总数和部分亚群数量、淋巴细胞转化率、血清免疫球蛋白含量以及单核细胞功能等变化。同时还综述了核辐射对内分泌及遗传的影响。     

基于survivin的"模拟病毒"瘤苗的制备和鉴定

目的 制备、鉴定基于肿瘤抗原survivin的"模拟病毒"瘤苗.方法 在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成模拟病毒颗粒样的结构,并以扫描电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blotting)对该疫苗进行制备鉴定.结果 在NaCl浓度为87.5 mmol/L,电荷比为2的制备条件下,该疫苗能形成颗粒,并可有效介导瘤苗所携带基因的表达.结论 该研究成功制备了基于肿瘤抗原survivin的"模拟病毒"瘤苗,为新型的肿瘤疫苗的设计奠定了基础.     

医学本科生免疫学实验课程建设的探讨

医学免疫学是一门重要的医学基础课程,实验课程是医学免疫学的重要部分。为了提高实验课的教学质量,对免疫学实验课程体系进行了较系统的改革,取得了较好的教学效果。     

激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8+T细胞中Akt激酶活性

目的:研究4-1BB信号促进CD8 T细胞增殖、存活及Akt活性的变化。方法:利用小鼠CD8α T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8 T细胞,并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8 T细胞。再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否,四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8 T细胞的增殖程度,Annexin V检测抗凋亡能力,免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8 T细胞增殖和存活,并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8 T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8 T细胞增殖与存活的调节效应。     

ER滞留信号肽对外源CTL表位进入胞内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的促进作用

目的探讨哺乳动物内质网（endoplasmic reticulum，ER）滞留信号肽（retrieval signal sequence）能否促进外源CTL表位肽进入抗原呈递细胞（antigen-presenting cell，APC）内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径。方法应用多肽固相合成技术将哺乳动物内质网滞留信号——赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸（Lys-Asp-Glu-Leu，KDEL）基序融合在H-2K^b限制性CTL表位OVA257-264的羧基端，同时合成该表位和氨基端自然延伸四个氨基酸（TEWT）的对照肽OVA257-268。选择巨噬细胞系Ana-1作为本研究的APC，采用流式细胞仪（FACS）分析技术，检测各抗原肽在Ana-1内的MHC-Ⅰ类抗原呈递动力学。结果羧基端KDEL基序可明显增强与之偶联的CTL表位在APC内的MHC-Ⅰ类抗原呈递效率，并且显著延长APC表面MHC／肽复合物的呈递时间。结论羧基端KDEL基序修饰是将外源肽有效导入APC内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的一个简单有效的新策略，可为肿瘤治疗性肽疫苗的分子设计与研究提供新思路和实验依据。     

小鼠4-1BB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外瞬时干扰效应的研究

目的 采用小片段RNA干扰(small interference RNA,siRNA)技术,通过构建系列小鼠4-1BB(m4-1BB)基因的特异性siRNA表达载体,体外观察对m4-1BB基因的瞬时沉默作用,筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体.方法 设计并合成4条针对小鼠4-1BB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列,插入真核表达载体(pENTRTM/U6 ),构建m4-1BB序列特异性siRNA 表达载体,根据靶位点分别命名为p336、394、498及763 siRNA,无关干扰质粒为pLacZ siRNA;通过体外m4-1BB真核表达质粒p4-1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-7细胞,48h后通过RT-PCR和FACS(fluorescence-activated cell sorter,荧光活化细胞分选仪)观测COS-7细胞4-1BB mRNA及蛋白表达水平.结果经测序分析,各m4-1BB siRNA表达载体构建成功;其中p498 siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7 细胞,48h后可观察到细胞表面4-1BB分子明显下调,其胞内mRNA水平也显著降低,与无关干扰组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).其余siRNA载体,几乎无干扰效应,与无关干扰组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论我们所构建的p498 siRNA 真核表达载体,能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达,可望用于m4-1BB Lentivirus干扰表达系统的构建,进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默,以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响.