含IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞功能的影响

目的:研究含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的功能影响。方法:构建含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗,免疫小鼠后,分离脾脏淋巴细胞,分析CTL的表面分子,分泌细胞因子能力,细胞毒功能和抗凋亡能力。结果:含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗能上调CTL的CD8和CD44分子表达,促进IFN-γ分泌,增强细胞毒功能,提高抗凋亡能力。结论:IL-15能发挥很好的佐剂效应,增强CTL的功能,有望在抗肿瘤研究中得到很好的应用。     

CPP Tat49-57促进外源CTL表位进入MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的机制研究

目的 研究穿膜肽（cell-penetrating pepfides,CPP）促进外源CTL表位进入抗原呈递细胞（antigen-presenting cell,APC）内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的效应及呈递机制。方法应用多肽固相合成技术,将源于HIV-Tat的穿膜序列Tat49-57连接在H-2K^b限制性CTL表位0VA257-264的氨基端形成融合肽即Tat49-57-CTL257-264,同时合成该表位和氨基端自然延伸的对照肽NH2 extended-0VA257-264。采用流式细胞仪（FACS）分析技术,检测APC对各肽的MHC-Ⅰ类抗原呈递动力学,并进行MHC-Ⅰ类抗原呈递阻断和TAP依赖性实验。结果在所测时间点,APC对于Tat49-57-CTL257-264的呈递强度均明显高于NH2 extended OVA257-264;氨基肽酶抑制剂Bestatin可部分抑制APC对于Tat49-57-CTL257-264的MHC-Ⅰ类抗原呈递,而蛋白酶体抑制剂Lactacystin则无抑制效应;Tat49-57-0VA257-264可被TAP缺陷细胞RMA-S内MHC-Ⅰ类分子有效呈递,其呈递强度远超过RMA-S细胞对NH2 extended-0VA257-264的呈递。此外,RMAS固定后则丧失对Tat49-57-0VA257-264和NH2 extended-0VA257-264的MHC-Ⅰ类限制性呈递能力,但其表面的“空”MHC-Ⅰ类分子仍可呈递单纯表位肽0VA257-264。结论CPP Tat49-57可有效促进与之融合的CTL表位肽被细胞内MHC-Ⅰ类分子提呈,表现为动力学显著增强,且该过程表现为蛋白酶体／TAP非依赖、氨基肽酶依赖。     

乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达研究

目的:检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况及PD-1在Treg中发挥的作用.方法:用流式细胞术检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况.结果:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率为(48.7±2.9)%,显著高于乙肝疫苗应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率(16.3+1.4)%.结论:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率的显著上调,有可能参与了Treg的抑制机制.     

CD4+CD25+调节性T细胞对乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞分泌IL-4水平和抗-HBs产生的影响

摘要 目的：通过分析乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞（PBMC）剔除CD4+CD25+调节性T细胞（简称Treg）和不剔除Treg细胞后，用乙肝表面抗原（HBsAg）诱导，检测其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平，来探讨Treg细胞与乙肝疫苗弱/无应答现象的关系。方法：选择25例乙肝疫苗无应答者，30例弱应答者，同时选择20例强应答者作为对照，用HBsAg在体外诱导剔除和不剔除Treg细胞的三组人外周血PBMC，采用酶联免疫吸附法（ELASA）测定培养上清的IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平。结果：剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平强应答组、弱应答组和无应答组相比无显著差异（P>0.05），其抗-HBs的产生水平也无显著差异（P>0.05）；不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比差异显著（P<0.01），弱/无应答组的IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平显著低于强应答组。结论：不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导，其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比显著低下。由于IL-4主要是由Th2细胞分泌，因此我们推测乙肝疫苗弱/无应答现象可能是由于Treg细胞抑制了Th2细胞的极化，从而影响了机体的体液免疫应答。     

核辐射对机体的影响

机体受到一定剂量核辐射后会出现多个器官结构和功能的改变。本综述了机体受到低剂量核辐射后出现的免疫细胞数量和功能变化，包括淋巴细胞总数和部分亚群数量、淋巴细胞转化率、血清免疫球蛋白含量以及单核细胞功能等变化。同时还综述了核辐射对内分泌及遗传的影响。     

基于survivin的"模拟病毒"瘤苗的制备和鉴定

目的 制备、鉴定基于肿瘤抗原survivin的"模拟病毒"瘤苗.方法 在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成模拟病毒颗粒样的结构,并以扫描电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blotting)对该疫苗进行制备鉴定.结果 在NaCl浓度为87.5 mmol/L,电荷比为2的制备条件下,该疫苗能形成颗粒,并可有效介导瘤苗所携带基因的表达.结论 该研究成功制备了基于肿瘤抗原survivin的"模拟病毒"瘤苗,为新型的肿瘤疫苗的设计奠定了基础.     

医学本科生免疫学实验课程建设的探讨

医学免疫学是一门重要的医学基础课程,实验课程是医学免疫学的重要部分。为了提高实验课的教学质量,对免疫学实验课程体系进行了较系统的改革,取得了较好的教学效果。     

ER滞留信号肽对外源CTL表位进入胞内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的促进作用

目的探讨哺乳动物内质网（endoplasmic reticulum,ER）滞留信号肽（retrieval signal sequence）能否促进外源CTL表位肽进入抗原呈递细胞（antigen-presenting cell,APC）内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径。方法应用多肽固相合成技术将哺乳动物内质网滞留信号——赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸（Lys-Asp-Glu-Leu,KDEL）基序融合在H-2K^b限制性CTL表位OVA257-264的羧基端,同时合成该表位和氨基端自然延伸四个氨基酸（TEWT）的对照肽OVA257-268。选择巨噬细胞系Ana-1作为本研究的APC,采用流式细胞仪（FACS）分析技术,检测各抗原肽在Ana-1内的MHC-Ⅰ类抗原呈递动力学。结果羧基端KDEL基序可明显增强与之偶联的CTL表位在APC内的MHC-Ⅰ类抗原呈递效率,并且显著延长APC表面MHC／肽复合物的呈递时间。结论羧基端KDEL基序修饰是将外源肽有效导入APC内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的一个简单有效的新策略,可为肿瘤治疗性肽疫苗的分子设计与研究提供新思路和实验依据。     

激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8+T细胞中Akt激酶活性

目的:研究4-1BB信号促进CD8 T细胞增殖、存活及Akt活性的变化。方法:利用小鼠CD8α T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8 T细胞,并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8 T细胞。再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否,四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8 T细胞的增殖程度,Annexin V检测抗凋亡能力,免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8 T细胞增殖和存活,并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8 T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8 T细胞增殖与存活的调节效应。     

基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发CTL杀伤活性的实验研究

目的探讨基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发细胞毒性T细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法制备含有Survivin的模拟病毒瘤苗,体外刺激HLA-A2·1阳性健康者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononu-clearcell,PBMC),用酶联免疫斑点实验(enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT)和标准51Cr释放实验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性。结果Survivin模拟病毒瘤苗能够在体外诱导出特异性CTL,对HLA-A2·1阳性的乳腺癌细胞系MCF-7有明显的杀伤毒性,杀伤率为56·4%;并可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,ELISPOT显示斑点数为287个/105细胞,P<0·05。结论模拟病毒瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,为新型乳腺癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。