可溶性HLA-G1重链分子的构建、表达及纯化

目的：获取原核表达的可溶性HLA-G1重链分子(1neavy chain of soluble HIA-G1，SHLA-G1-hc)，为进一步构建可溶性HIA-G1单体分子奠定基础。方法：应用引物点突变技术，RT-PCR扩增去信号肽的可溶性HLA-G1重链分子的cDNA序列，构建表达载体pET22b／s HLA-G1-hc，导人大肠杆菌BL21(DE3)Plys，IPTG诱导sHLA-G1-hc-6(his融合蛋白表达，提取包涵体蛋白，溶解后经Ni-NTA亲和层析纯化，透析后浓缩保存。SDS-PAGE、Westem blot鉴定目的蛋白的表达和纯化。结果：克隆基因序列符合重链基因特征；表达产物以包涵体形式为主，表达量占菌体总蛋白的20％；纯化后证明表达产物具有较高纯度达到95％。结论：成功构建可溶性HIA-G1重链分子原核表达载体，为阐明可溶性HIA-G1的功能奠定基础。     

浆细胞样树突状细胞与免疫耐受

浆细胞样树突状细胞(PDC)来源于淋巴系干细胞,其表面标志、功能有别于髓系DC,不仅在抗病毒免疫中发挥重要作用,而且通过多种途径诱导T细胞失能和调节性T细胞的形成,从而参与免疫耐受的诱导.PDC诱导T细胞免疫耐受的分子机制与吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)-色氨酸代谢通路和具有抑制功能的膜分子密切相关.深入阐明PDC诱导耐受的机制,将为免疫耐受异常相关的疾病的治疗提供新方案.     

卵裂球细胞乙型肝炎病毒FISH检测法的建立

目的:建立一种灵敏、特异的卵裂球细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的检测方法。方法:根据HBV基因上的保守序列设计并合成引物,应用PCR技术制备探针并进行生物素标记。废弃的胚胎卵裂球经激光打孔,活检2~4个卵裂球细胞,利用生物素标记的探针,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测HBV感染情况。结果:在HBV的感染者的38例子代胚胎卵裂球细胞,11例呈现阳性信号,健康对照组未检测到阳性信号。结论:荧光原位杂交技术(FISH)可用于卵裂球细胞HBV感染的检测,在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)实践中对降低HBV垂直传播有重要意义。     

DAPT 调节Treg / Th17 细胞免疫平衡抑制动脉粥样硬化

目的:观察Notch 信号抑制剂分泌酶抑制剂( DAPT)对动脉粥样硬化小鼠病理改变及Treg/ Th17 细胞免疫平衡的影响。方法:将24 只ApoE 基因敲除C57BL 小鼠随机分为空白组、模型组和DAPT 组。空白组用普通饲料饲养,模型组和DAPT 组用高脂饲料饲养。饲养5 周后,DAPT 组小鼠以100 mg/ (kg•d)皮下注射DAPT(溶于DMSO 中),其余两组皮下注射等量DMSO。5 周后,采用病理染色分析各组小鼠动脉病理改变,ELISA 检测血浆中IL-17 水平,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg/ Th17 细胞比例。结果:HE 染色结果显示,模型组有明显粥样斑块形成和泡沫细胞形成,DAPT 组动脉病变程度比粥样动脉硬化模型组明显减轻。正常组、模型组和DAPT 组各组血浆中IL-17 水平分别为(293.94±28.59)、(454.05±172.68)和(335.40±89.57)pg/ ml;DAPT 降低AS 小鼠血浆IL-17 水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT 组各组小鼠Treg 细胞百分比分别为(3.0±0.56)%、(2.54±0.38)%和(4.73±0.64)%;DAPT 降低AS 小鼠血浆IL-17 水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT 组各组小鼠Th17 细胞亚群分别为(3.46±0.23)%、(4.52±0.85)% 和(1.38±0.37)%。结论:DAPT 降低AS小鼠血浆IL-17 的水平,抑制Th17 细胞亚群分化,而促进Treg 细胞分化,通过改变Treg/ Th17 细胞疫平衡从而减轻动脉粥样硬化。     

白芍总甙对类风湿关节炎外周血单个核细胞表达趋化因子的影响

目的:探讨白芍总甙(TGP)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)产生趋化因子配体3(CCL3)、趋化因子配体5(CCL5)的影响。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定20例RA患者血清中的CCL3、CCL5水平,并与健康对照组比较。分离20例RA患者的PBMC进行体外培养,脂多糖(LPS)诱导CCL3、CCL5产生后,加入不同浓度的TGP,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中的CCL3、CCL5水平。结果:RA患者血清中CCL3、CCL5水平均高于健康对照组。TGP浓度达到5μg/mL时可显著性抑制CCL3产生,TGP浓度达20μg/mL时可显著性抑制CCL5的产生,在5～40μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性,之后继续增大剂量,其抑制作用亦不再增强。结论:TGP能够抑制RA患者PBMC中趋化因子的产生,这可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一。     

硒化壳聚糖与阿霉素联合及序贯给药对NB4细胞增殖的影响

目的研究硒化壳聚糖与ADM联合应用对NB4细胞增殖的影响,探讨两药序贯给药的不同效果。方法硒化壳聚糖（50,100mg／L）及ADM（0．5,1,2mg／L）同时或者序贯给药（先给予硒化壳聚糖后给予ADM或先给予ADM后给予硒化壳聚糖）作用于NB4细胞,MTT法检测药物对细胞增殖的影响;金氏公式评价两药的协同效果。结果硒化壳聚糖与ADM单独作用均可抑制NB4细胞增殖,二者联合应用呈协同作用;先给予硒化壳聚糖作用24h,再给ADM作用24h,对NB4细胞的抑制呈协同作用;先给予ADM作用24h,再给硒化壳聚糖作用24h,呈拮抗及单独相加作用。结论硒化壳聚糖与不同浓度的ADM（0．5—2mg／L）联合应用可协同抑制NB4细胞增殖;序贯应用硒化壳聚糖和ADM时,先给予硒化壳聚糖再给予ADM比先给予ADM再给予硒化壳聚糖协同效果好。     

硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖的影响

目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的表皮细胞增殖的影响. 方法 用不同剂量(25,50,100,200,400 mg/L)硒化壳聚糖作用于表皮细胞,镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,并以等体积的细胞培养液处理为对照组. 结果 各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加(除25 mg/L组外,均P<0.05),细胞倍增时间缩短(除25 mg/L组外,均P<0.05),促进表皮细胞对3H-TdR的掺入(P<0.05,P<0.01). 结论 硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖具有促进作用.