重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用

目的构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用。方法通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪（FCM）检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因（PEⅡ）和tBid基因连接，构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv／tBid载体，转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化，AnnexinV染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv／tBid。重组质粒转染E10细胞后，间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达；细胞色素C在细胞质中出现；细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。AnnexinV染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高（16．1％VS4．5％）；TUNEL染色显示，E10细胞出现典型的凋亡特征。结论重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达，并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。     

腰椎滑脱疲劳试验模型的研制与应用

目的研制椎弓崩裂型腰椎滑脱疲劳实验模型,观察滑脱节段在脊柱内固定下不同方式椎体间植骨的生物力学变化。方法6具新鲜脊柱标本,截取L3-S2节段,制作腰椎滑脱试件。将试件随机分成2组,按临床方法安装复位固定系统（reduction fixation,RF）,一组于椎间隙行双侧柱状植骨（bilateral-PLIF）,另一组常规单侧植骨（single-PLIF）作为对照。在脊柱疲劳实验装置上进行生物力学测试。结果载荷500N时滑脱节段屈曲压缩位移变化显示,single-PLIF和bilateral-PLIF组疲劳前和初步疲劳（1500次）后都保持着良好的稳定性;10000次疲劳后双侧柱状植骨组在生物力学稳定性上明显优于对照组。结论本实验制作的腰椎滑脱疲劳实验模型适用于脊柱的生物力学测试;双侧柱状植骨有助于提高术后脊柱稳定性。     

凋亡抑制基因Survivin与肿瘤防治的研究

Survivin是1997年发现的一种新的凋亡抑制基因,是凋亡蛋白抑制因子(inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族的成员,它选择性地表达于胚胎发育组织和几乎所有常见的人类恶性肿瘤组织而正常成人终末分化组织中不表达,其表达与多种肿瘤患者的预后密切相关。survivin通过直接抑制凋亡信号传导途径中最下游的效应分子caspase3的活性而发挥其抑凋亡作用。抑制survivin的表达,以阻断其抑凋亡作用,可以达到治疗肿瘤的目的。此种方法初步验证一般不会产生副作用,治疗中会对患者的生活质量带来正性效应。近年来体外和动物实验中发现,针对此基因的反义核酸及此基因决定基缺失的突变体,能够诱导细胞自发性凋亡和明显抑制肿瘤的生长,为评价肿瘤预后及防治研究提供了新的靶位。     

人工全髋关节置换术中肢体长度的平衡

Totalhipjointreplacementisusedwidelyasanimportantmethodtotreathipjointdisease．Leg－lengthequalizationisveryimportantaftertotalhipjointreplacement；otherwise，itwillleadtoaseriesofclinicalsymptomsandshortenusefultimeofartificialjoint．Accordingtoreports，incidenceofleg－lengthunequalizationreachesto５０％～８０％aftertotalhipjointreplacement犤１，２犦．Correctjudgmentofprosthesisimplantingpositionandlimblengthinpe－riodofoperationisveryimportant．Nowadays，thereisnofixedmethodandcriteriatocont…     

早期生长反应基因转染SOSP-9607骨肉瘤细胞的体外生物学特性

目的：研究早期生长反应基因转染ＳＯＳＰ－９６０７骨肉瘤细胞的体外生物学特性。方法：以标准的磷酸钙共沉淀法将pＡchＥＧＲ－１质粒转染骨肉瘤细胞ＳＯＳＰ－９６０７, 经Ｇ４１８筛选至抗笥克隆形成;,采用原位杂交及免疫组织化学染色方法检测ｅｇｒ－１基因转染后表达情况,并观察转染细胞的生长特性。结果：ｅｇｒ－１基因转染ＳＯＳＰ－９６０７细胞后获得稳定表达,转基因细胞形态学表现与未转染细胞相比无明显变化,但转     

BMP-9成骨活性的实验研究

目的:评估BMP-9体外诱导成骨活性.方法:构建成功的人BMP-9的腺病毒表达载体、感染小鼠前成骨细胞C2C1 2细胞.通过测量碱性磷酸酶、骨钙素和钙结节来判定成骨活性的大小.结果:BMP-9在前成骨细胞C2C1 2细胞明显地诱导碱性磷酸酶活性.碱性磷酸酶组织化学染色分析和碱性磷酸酶化学分析结果相一致,能明显诱导骨钙素的表达及矿物质结节形成.结论:小鼠前成骨细胞C2C12细胞向成骨细胞分化中BMP-9起了重要作用.     

人骨肉瘤组织中livin的表达

目的研究livin在骨肉瘤中的表达及其临床意义。方法对60例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性分析。应用livin的抗体对上述患者的肿瘤组织切片进行免疫组织化学染色并进行统计学分析。结果60例标本中32例为阳性,总阳性率为53.3%。livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系。但与Enneking外科分期有关,Ⅰ~ⅡA期与ⅡB~Ⅲ期之间,肿瘤livin表达率差异明显(P<0.05)。结论livin在骨肉瘤组织中有较高比例的表达,livin可作为预测骨肉瘤预后的重要指标。     

人成骨特异性转录因子cDNA胞外区片段的克隆和序列分析

目的:克隆人成骨特异性转录因子(cbfa1)cDNA胞外区片段并进行序列分析。方法:提取人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC19克隆载体中,转化TOP10感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒进行酶切鉴定后进行序列分析。结果:从人骨肉瘤细胞系细胞提取的总RNA中成功获得人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,DNA序列分析证实其序列和文献报道一致。结论:采用基因克隆的方法得到人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,为进一步进行其结构和功能研究打下基础。     

microRNA-192 抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响*

目的：探讨miR-192 抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_ 9607细胞增殖和凋亡的影响。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_ 9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-192 抑制物（hsa-miR-192 inhibitors ）抑制SOSP_ 9607细胞内miR-192 的活性。结果：与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_ 9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性（P<0.01）。 随着浓度从50nmol/L 逐渐增加至200nmol/L ,抑制率逐渐增高（P<0.01）。 与对照组相比,实验组细胞周期G0/G1 细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S 期细胞比例显著减少（P<0.01）。 实验组凋亡率（13.6 ± 2.1）% 与阴性对照组凋亡率（7.1 ± 0.5）% 相比明显增高（P<0.01）。 结论：miR-192 抑制物通过抑制SOSP_ 9607细胞中miR-192 的活性对SOSP_ 9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用,可能成为骨肉瘤生物治疗的新靶点。     

tBid基因的表达及其对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用

目的:观察tBid基因在骨肉瘤细胞中的表达及其对转染的SOSP-9607细胞的凋亡作用。方法:采用脂质体转染的方法,将tBid基因转染骨肉瘤细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达和细胞形态学变化,进一步电镜观察其超微结构改变。MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况,通过Annexin V、染色流式细胞仪检测来观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测tBid的表达,细胞出现凋亡。电镜观察呈现出典型的凋亡特征。MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制。Annexin V染色流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与对照组细胞(凋亡率为6%)相比,其凋亡率为35.8%。结论:tBid基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。