重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用

目的构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用。方法通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪（FCM）检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因（PEⅡ）和tBid基因连接，构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv／tBid载体，转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化，AnnexinV染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv／tBid。重组质粒转染E10细胞后，间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达；细胞色素C在细胞质中出现；细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。AnnexinV染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高（16．1％VS4．5％）；TUNEL染色显示，E10细胞出现典型的凋亡特征。结论重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达，并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。     

人骨肉瘤自发性高肺转移模型的建立及其生物学特性初探

目的 在裸鼠体内建立人骨肉瘤自发性高肺转移模型。为探讨骨肉瘤肺转移机制和抗转移治疗提供尽可能与临床条件相近的实验工具。方法 将裸小鼠腹腔筛选的人骨肉瘤高转移细胞亚群经裸鼠间传代,组织块原位植入胫骨骨髓腔,待裸鼠发生转移时,皮下扩增肺转移灶,再次原位移植,如此循环3个周期,观察各代肿瘤细胞致瘤率、脏器转移及染色体数目变化情况。结果 各代肿瘤细胞致瘤率均为100%,肺转移率稳定友上,转移途径单一;体内增殖能力及染色体数目稳定。结论 建立了人成骨肉瘤自发性高肺转移模型。该骨肉瘤细胞系在裸鼠体内传代过程中生物学特性保持相对的稳定。     

临床骨科见习教学浅见

见习教学是临床医学教学工作的重要组成部分,骨科见习又是外科见习的重点与难点之一。通过多年的教学实践,结合当前的医疗现状,我们以医德教育、素质教育为本,启发学生正确的临床思维,锻炼学生良好的临床基本工作能力,取得了较好的效果。本文对此进行总结归纳,以期为进一步提高骨科临床教学工作质量提供参考。     

α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用

目的探讨α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用。方法离体途径将α1AT基因转染人肺腺癌细胞株A549，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。结果经α1AT基因转染后的人肺腺癌细胞株在裸鼠皮下成瘤能力降低，裸鼠成瘤潜伏期延迟，最大抑瘤率可达55．5％。结论高表达α1AT基因能降低A549的成瘤能力，抑制肿瘤生长。     

Survivin在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子Survivin在人脑胶质瘤中的表达水平及与脑胶质瘤发生发展的关系.方法:采用免疫组化SABC方法检测Survivin蛋白在83例脑胶质瘤和12例正常脑组织标本中的表达水平.结果:Survivin在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达阳性率及免疫反应评分(IRS)分别为57.8%、3.75±3.89和8.3%、0.17±0.58,两者间表达阳性率及IRS均有极显著差异(P均＜0.01).Ⅰ～Ⅳ级以及良、恶性脑胶质瘤Survivin表达阳性率分别为29.4%、44.0%、72.2%、82.6%和38.1%、78.0%,在脑胶质瘤不同病理级别以及不同恶性度间Survivin表达阳性率均有极显著差异(P=0.002,P＜0.01).Ⅰ～Ⅳ级以及良、恶性脑胶质瘤Survivin IRS分别为1.29±2.62、2.56±3.44、4.78±3.89、6.04±3.78和2.05±3.16、5.49±3.83,在脑胶质瘤不同病理级别以及不同恶性度间Survivin IRS也有极显著差异(P均＜0.01).结论:Survivin在脑胶质瘤中高表达,且随脑胶质瘤病理级别的增高而表达增强,Survivin在脑胶质瘤发生发展过程中具有重要作用.     

女性患者使用及未使用抗骨质疏松药物人工全髋关节置换术后疗效及假体可能生存率比较

目的评价女性患者人工全髋关节置换术使用及未使用抗骨质疏松药物对疗效的影响。方法通过匹配性研究对105例患者进行随访,获得随访83例(85髋),随访率79%,抗骨质疏松组42例(44髋),未抗骨质疏松组41例(4l髋),并对术后病人进行综合性评价和分析。结果两组病人术后疗效及假体可能生存率无显著差异。结论老年女性患者行人工髋关节置换术后无论是否使用抗骨质疏松药物术后疗效相似,假体都没有达到理想固定的效果。     

骨肉瘤细胞与成纤维细胞共培养刺激基质金属蛋白酶-2的产生和激活

目的：了解骨肉瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（CD147）是否能刺激临近间质细胞产生和激活细胞外基质金属蛋白酶（MMP）。方法：骨肉瘤细胞MG63和人成纤维细胞（hFb）以及抗CD147抗体共培养，用凝胶电泳和Western blot的方法检测细胞培养液和细胞膜提取物。结果：首次证实骨肉瘤细胞表达CD147，并刺激成纤维细胞产生MMP-2的激活因子MT1-MMP、MT2-MMP、前体MMP-2（ProMMP-2）和激活ProMMP-2。结论：骨肉瘤细胞高表达CD147，并刺激成纤维细胞产生和激活MMP-2。     

热休克蛋白90阻止剂增强热诱导骨肉瘤细胞杀伤的研究

目的：探讨热休克蛋白90（heat shock protain 90,HSP90）分子伴侣复合物阻止剂17-丙烯胺基-17去甲氧基格尔德霉素（17-allylamide-17-demethoxgeldanamycin,17-AAG）,对热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞杀伤作用的影响。方法：采用干细胞集落形成实验、流式细胞术（flow cytometry,FCM）和吖啶橙荧光染色等方法观察比较单纯热疗组与热疗联合17-AAG治疗组对骨肉瘤SOSP-9607细胞活力、凋亡率及形态学影响。结果：干细胞集落形成实验显示,热疗联合17-AAG治疗组较单独热疗对骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤效应明显增强,P=0．036;Annexin V—FITC染色流式细胞术结果显示,热疗联合17-AAG治疗组所致凋亡率（52．2％）大于单纯热疗组（17．5％）;用吖啶橙荧光染色法观察到热疗联合17-AAG治疗组明显见骨肉瘤SOSP-9607细胞固缩着色不均而且较深,细胞核浓缩、裂解等凋亡特征。结论：HSP90分子伴侣复合物阻止剂17-AAG能增强热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤作用。     

miR-424在人骨髓间充质干细胞分化过程中的表达

目的 筛选可作为人骨髓间充质干细胞(MSCs)分子标记物的microRNA(miRNA).方法 以从骨髓中分离培养的MSCs及其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNA的表达情况,由芯片显著性分析(SAM)得到MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA,再由实时定量PCR进行验证.结果 成功分离培养出MSCs,并分别诱导其分化为成骨细胞和软骨细胞;MSCs及由其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞经miRNA芯片检测及SAM分析得到8个MSCs较由其诱导分化的成骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、has-miR-34a、has-miR-593、has-miR-10a、has-miR-148a、has-miR-602、mmu-miR-709、mmu-miR-665),3个MSCs较由其诱导分化的软骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、PREDICTED_MIR189、mmu-miR-665).其中MSCs较成骨细胞和软骨细胞均高表达的人源性miRNA为has-miR-424,差异倍数分别为6.6倍和4.4倍;在原样本中对进行实时定量PCR的验证,结果提示与诱导分化的成骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.6倍,而与诱导分化的软骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.1倍,结果与芯片结果相符合.结论 MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA有望成为人骨髓间充质干细胞的一种特异性的分子标记物,这些miRNA对MSCs自我更新和未分化状态起着重要的维持作用.     

改良式液氮冷冻法制备犬股骨头坏死动物模型

目的 通过改良式液氮冷冻法造成犬股骨头缺血坏死,探讨股骨头缺血坏死的动物模型制备,建立能模拟人股骨头坏死病理生理过程的实验动物模型.方法 16只犬随机分成4组,采用手术方法改良式液氮冷冻法即刻冷冻单侧股骨头.普通饲料饲养2、4、8、16周分别处死4组动物,分别观察X线摄片、大体形态、光镜下形态变化.结果 改良式液氮冷冻法犬股骨头X线、大体及组织学形态不同阶段均出现明显变化.结论 改良式液氮冷冻法为建立股骨头坏死动物模型提供了一种简便、易行的方法,值得进一步深入研究.

Abstract：

Objective To establish an canine model of femoral head osteonecrosis using an improved liquid nitrogen freezing method. Methods Sixteen adult canines were divided into 4 groups at random and subjected to instant freezing of the unilateral femoral head with liquid nitrogen. The dogs were observed at 2, 4, 8, and 16 weeks after the operation for radiographic, gross and pathological changes of the femoral head. Results Significant radiographic, gross and pathological changes occurred in the femoral head after the freezing. Conclusion Improved liquid nitrogen freezing of the femoral head provides a simple and convenient method for establishing animal models of femoral head osteonecrosis.