粒细胞集落刺激因子对人神经干细胞移植后新生大鼠体内神经元分化的影响

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对移植的人神经干细胞(hNSCs)新生大鼠体内神经元分化的影响.方法 出生1周的Wistar大鼠建立缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,建模后分成2组:NSC移植组(N组,n=17)和NSC移植+G-CSF治疗组(NG组,n=16).NG组大鼠建模后1 h即皮下注射G-CSF,50 μg·kg-1,1次·d-1,移植前后连续5 d注射G-CSF.2组大鼠均于建模后第2天经脑室移植hNSCs.移植后1周、2周采用免疫荧光法观察2组植入细胞在皮质、海马部位神经元分化情况.结果 移植后1周,分化神经元主要分布于大鼠损伤侧海马、皮质;移植后2周,神经元分化数量增多,并发出细长分枝.NG组海马各区神经元分化存活数量较N组多,差异有统计学意义(Pa<0.01);NG组皮质神经元分化存活数量在移植后2周时较N组多,差异有统计学意义(P<0.001).结论 G-CSF有利于植入大鼠脑内的hNSCs的存活,并促进植入hNSCs向神经元分化,因此联合G-CSF可能有助于进一步提高hNSC移植的疗效.     

极早产儿和/或极低出生体重儿对青少年时脑体积影响的Meta分析

摘要 目的：评估极早产和/或极低出生体重对青少年时脑体积的影响。方法：系统检索PubMed、EMBASE、the Cochrane Library、Web of Science、中国生物医学文献（CBM）、万方和知网（CNKI）数据库,检索时间从建库至2017年10月20日,纳入暴露组为出生胎龄≤32周和/或出生体重≤1 500 g、非暴露组为出生胎龄38~42周且出生体重≥2 500 g、队列终点（13~18岁）时使用MRI行脑体积测量的队列研究,排除出生时存在先天畸形或其他先天性疾病、随访期间存在可能影响测量结果的疾病及无法提取本文设定的测量指标（全脑、白质、灰质、小脑、海马和胼胝体的体积）的文献。采用NOS量表评价文献质量,R 3.4.0软件进行Meta分析,I2检验文献异质性。结果：13篇英文文献（n=1 272）进入本文Meta分析,暴露组686例,非暴露组586例。13篇文献均随访不完整,9篇非暴露组与暴露组来源于同社区,3篇仅根据问卷回顾出生数据。13篇文献均描述采用1.5T场强的MRI、计算机软件自动测量体积,暴露组和非暴露组队列终点年龄均一致。Meta分析结果显示,暴露组与非暴露组相比,全脑（SMD=-0.66,95%CI=-0.81~-0.51）、白质（SMD=-0.51,95%CI=-0.64~-0.38）、灰质（SMD=-0.60,95%CI=-0.93~-0.28）、小脑（SMD=-0.45,95%CI=-0.64~-0.25）、海马（SMD=-0.48,95%CI=-0.73~-0.24）和胼胝体均（SMD=-0.43,95%CI=-0.63~-0.24）明显缩小,差异均有统计学意义。全脑和白质体积的Meta分析漏斗图检验未见发表偏倚。结论：极早产和/或极低出生体重儿青少年岁时的脑整体体积和特定脑区域体积降低。     

含人LINGO-1慢病毒干扰载体的构建与鉴定

目的 体外构建含人LINGO-1慢病毒干扰载体,并测定其对靶基因LINGO-1的干扰效应。方法 2015年3-11月,根据GenBank数据库中报道的人LINGO-1基因序列,设计合成针对人LINGO-1短发夹RNA（LINGO-1 shRNA）干扰序列,并将其克隆至重组质粒载体,测序验证后在293T细胞内包装慢病毒并测定病毒滴度。将慢病毒载体分为目标基因干扰载体组（实验组）和错配序列干扰载体组（对照组）,并转染至人胶质细胞瘤细胞U251,荧光显微镜下观察其感染效率,并采用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法检测LINGO-1 mRNA表达水平,采用Western blotting法检测LINGO-1表达水平。结果 成功构建两组慢病毒干扰载体,经过包装分别得到滴度为2×108 TU/ml和4×108 TU/ml的病毒原液。病毒载体感染人胶质细胞瘤细胞U251后,实验组和对照组载体转染效率分别为96.6%、95.2%。免疫荧光染色显示,人胶质细胞瘤细胞U251高表达LINGO-1,经慢病毒载体转染后,实验组免疫荧光呈现减弱现象。实验组LINGO-1 mRNA表达水平（0.09±0.01）较对照组的（1.00±0.00）降低（t=12.87,P＜0.01）,实验组LINGO-1 mRNA相对表达抑制率为91.0%。实验组LINGO-1表达水平（0.28±0.02）较对照组的（1.00±0.00）降低（t=-8.13,P＜0.01）。结论 本研究成功构建了含人LINGO-1 shRNA干扰载体,并证实了干扰载体对靶基因有较好的干扰效果,为研究LINGO-1在轴突再生中的作用奠定了基础。     

人脐带源间充质干细胞体外成脂、成骨、成软骨诱导分化

目的体外分离培养脐带来源间充质干细胞,确定其向脂肪、骨、软骨细胞的分化能力。方法取新鲜的脐带组织,剔除脐动静脉,剩余部分剪成极为细小的组织块,02%Ⅱ型胶原酶37℃静止消化17 h,用含10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基/Ham′s F12培养基终止消化,培养3~5 d后得到较为均一的贴壁细胞。取第3代细胞做流式检测,并定向诱导分化,14 d后成脂、成骨染色鉴定,21 d后取诱导分化的细胞团做冰冻切片,阿尔法蓝染色软骨鉴定。结果体外培养的间充质干细胞高表达CD29、CD13、CD90、CD105、CD44等间充质细胞标志物,不表达CD34、CD45、人类白细胞抗原DR等造血细胞标志物;诱导分化后油红O染色、冯库萨染色均为阳性,冰冻切片阿尔法蓝染色呈明显阳性。结论人脐带间充质干细胞在体外能够培养并定向分化为脂肪、骨、软骨细胞。     

两种脑性瘫痪鼠模型的对比

背景：现阶段主要围绕宫内窘迫,围生期缺氧缺血,胆红素脑病以及生后感染因素来构建脑性瘫痪模型,脑损伤后遗症不明显,联合损伤构建模式被逐渐认识。 目的：采用孕后期宫内感染及缺氧联合序贯缺氧缺血构建脑性瘫痪大鼠模型,对这些模型鼠进行评估,比较存在优势。 方法：孕鼠随机分为实验1组、实验2组和对照组。实验组孕16 d行腹腔脂多糖注射并缺氧2.5 h,对照组行生理盐水腹腔注射,隔日1次,直至分娩,所生幼鼠与其母鼠属同一组。实验1组幼鼠生后7 d行双侧颈总动脉结扎。生后14和28 d分别行体质量、爬梯、mNSS评分、旷场实验和病理切片。 结果与结论：实验1组动物体质量显著低于其他两组(P < 0.01),爬梯掉下来的次数及MNSS评分均显著高于对照组(P < 0.05,P < 0.01),28 d爬行距离最短,各项检测均提示生长发育迟缓,肌力肌张力不稳定,正常反射出现较迟(P < 0.05),病理切片提示灰质神经元排列紊乱,白质层变薄,炎性细胞浸润。实验2组幼鼠脑损伤程度较实验1组轻,后遗症状不明显。提示孕后期脂多糖注射及缺氧合并生后双侧颈总动脉结扎可以制备大鼠脑性瘫痪模型并能稳定至生后4周。