两种不同形状碳酸钙微米颗粒对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化影响的研究

目的：评价球形和方形两种碳酸钙微米粒对大鼠骨髓来源间充质干细胞增殖、分化等的影响。方法制备球形和方形碳酸钙微粒并与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,通过MTS法检测微粒对细胞增殖的影响,同时检测微粒在细胞表面的吸附以及引起的ROS反应,评价微粒的细胞毒性。通过检测碱性磷酸酶活性评价两种碳酸钙微粒对细胞成骨分化的影响。结果两种碳酸钙微粒高浓度下造成一定细胞增殖抑制,方形微粒抑制作用更显著。微粒的细胞增殖抑制主要由微粒与细胞表面接触引起,但两种微粒均不引起细胞ROS水平升高。同时两种微粒高浓度下也可通过抑制碱性磷酸酶活性抑制成骨分化,方形微粒同样更明显的抑制碱性磷酸酶活性。结论高浓度下碳酸钙微粒可对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化造成抑制,方形碳酸钙微粒具有更明显抑制现象,生物相容性不如等粒径球形微粒。因此球形微粒是组织工程支架材料更理想的选择。     

包裹转化生长因子β1壳聚糖缓释微球的研制*

目的：制备包裹转化生长因子β1的壳聚糖微球,并分析其各种特性。 方法：将壳聚糖溶解在2%乙酸中,利用吐温-80作为乳化剂,多聚磷酸钠作为交联剂,以乳化交联法制备载有转化生长因子β1的壳聚糖微球;同时制作空壳聚糖微球以及包裹牛血清白蛋白的壳聚糖微球作为空白对照和实验对照。对获得的3种冻干微球的形态,直径大小进行观察,对转化生长因子β1壳聚糖微球的分散情况及所载药物的体外释放情况进行检测,并测定空壳聚糖微球及包裹牛血清白蛋白壳聚糖微球的吸水膨胀率。 结果：冻干后的微球经过扫描电镜观察后发现：空壳聚糖微球直径约15 μm,表面光滑,有较多微小孔隙,而包裹了牛血清白蛋白及转化生长因子β1的壳聚糖缓释微球直径约为1 μm,大小较均一,表面光滑。包裹了转化生长因子β1的壳聚糖微球在释放实验中前12 h内释放速度较快,随后趋于平缓。6 d内微球的转化生长因子β1释放率为53.5%。壳聚糖微球及包裹了牛血清白蛋白的壳聚糖微球在1 h后增加的质量基本达到平衡,均超过700%,且发现微球越是在酸性环境中,吸水膨胀率越高。 结论：实验采用乳化交联法制备包裹转化生长因子β1的壳聚糖缓释微球的方法简单易行,成球性好,得率高,具有良好的缓释效果。且壳聚糖微球的超强吸水膨胀率对软骨组织工程支架提出了孔径大小及强度的要求。 关键词：壳聚糖;缓释微球;转化生长因子β1     

兔骨髓基质干细胞的分离生长及冻存技术研究

目的：建立兔骨髓基质干细胞(MSC)体外分离、培养、增殖、冻存的方法，以及探讨其生物学特性。方法：抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出MSC，并增殖。观察MSC的生长特性，测定其贴壁率及第3、8、13、18代的生长曲线，并评价其生物学特性。MSC在12．5％DMSO条件下经液氮或-60℃冻存复苏，测其成活率。结果：MSC为贴壁生长，以均一的梭形的成纤维细胞样生长，贴壁及增殖能力强，所测各代的生长曲线呈相似的S型，倍增时间约为35h。MSC需液氮保存，短期也可-60℃冰箱保存。结论：获得的兔MSC生长旺盛、增殖能力强，其分离、培养、纯化、增殖、冻存方法是可行的，可较长时间稳定地培养增殖、冻存，传代的MSC可保持其原代的生物学特性。MSC将是组织工程理想的种子细胞。     

干细胞分化调控机制研究的新进展

干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞，理论上具有无限分裂能力，在特定条件下，可分化成特定组织。如下图所示：     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离增殖及分化潜能活性

目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）体外分离、纯化、增殖的方法，并观察其体外分化为成骨细胞及软骨细胞的潜能活性。方法：取SD大鼠的股骨及胫骨，冲取骨髓液，采用贴壁培养法分离纯化MSC，增殖，并测定其生长曲线。对第三代大鼠MSC进行成骨矿化诱导，测定其碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨矿化情况。对第三代大鼠MSC进行诱软骨细胞的诱导分化，测定诱导后的细胞表型情况。结果：大鼠MSC为均一的梭形的成纤维细胞样生长，贴壁及增殖能力强。生长曲线呈S型。在成骨诱导剂作用下，MSC具有成骨能力，诱导后AIP活性显著提高。并出现矿化结节沉积。在成软骨诱导剂作用下，可见细胞由成纤维细胞样的梭形变为椭圆形及肾形，并分泌异染基质，甲苯胺蓝染色呈阳性，表现为软骨细胞分化特点。结论：获得的SD大鼠MSC生长旺盛，增殖能力强。在特定诱导条件下。大鼠MSC体外可定向分化为成骨细胞及软骨细胞。具有成骨及成软骨分化潜能。     

大肠杆菌O157:H7的分离筛选与实验诊断

O157:H7菌株是新近认识的肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要菌株.自1982年首次在美国发现以来,全球许多国家相继发生该菌感染及暴发流行,成为新的凶险传染病之一.国内自1987年首次分离到O157:H7以来,许多地方已发现该菌株.     

黄芪多糖-胶原-海藻酸钠-丝素蛋白3D打印支架的制备及其生物相容性研究

目的:应用3D打印技术制备黄芪多糖-胶原-海藻酸钠-丝素蛋白复合支架,分析其生物相容性.方法:2020年8月至2020年12月,采用MTT法分析HeLa细胞增殖抑制率,选择黄芪多糖最适工作浓度区间;制备黄芪多糖-胶原-海藻酸钠-丝素蛋白3D打印支架,进行形态学观察.通过细胞共培养显微镜观察、Calcein-AM/PI活...     

蚕丝-PLGA编织支架生物安全性评价方法研究和应用

目的:通过动物实验评价蚕丝-PLGA细丝混合编织支架材料的生物安全性,为该材料临床应用提供理论依据。方法:通过捻拧编织蚕丝纤维-PLGA细丝混合支架,蚕丝:PLGA的质量比为2∶3。并制备该支架材料的浸提液。采用蚕丝纤维-PLGA细丝混合编织支架浸提液进行如下生物安全性的动物实验研究:急性全身毒性试验、皮内刺激试验、溶血试验、热原试验,并根据实验数据进行分析、评价。结果:蚕丝-PLGA混合编织支架材料为螺旋上升的绳索状,直径3.2 mm。支架材料无急性全身毒性作用,无皮内刺激反应。支架材料溶血率为1.17%,小于5%,不具溶血作用,符合生物材料溶血试验的要求。热原试验表明,3只实验兔体温升高数分别为0.4℃、0.2℃、0.3℃,均低于0.6℃,总值小于1.4℃,不具热原反应。结论:蚕丝-PLGA混合编织支架材料具有良好的生物相容性。符合相关生物安全性的评价标准。     

人牙周膜细胞在矿化液作用下的增殖、成骨分化与相关基因表达

目的：分离培养人牙周膜细胞（PDLCs）,观察矿化液对PDI。Cs细胞增殖和成骨分化的影响。方法：酶解组织块后获得人PDLCs,矿化液处理后观察对细胞影响。采用MTT法检测对细胞增殖;流式细胞分析细胞周期改变;分别通过碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色,RT—PCR观察矿化液诱导成骨分化的效果。结果：矿化液对人PDI．Cs的增殖无显著影响,高浓度地塞米松（Dex）的矿化液有一定抑制作用。含Dex的矿化液可促进成骨分化,包括ALP活性提高,矿化结节形成,以及成骨基因的表达上调。$100A4和PLAP-1是相对特异的牙周膜标志,也参与矿化液诱导的成骨分化的调控过程。结论：含地塞米松的矿化液可有效促进人PDLCs的成骨分化,对细胞增殖影响较小。PDI,Cs是一种新型的种子细胞,可应用于骨组织工程。     

自身免疫和自身免疫病研究进展

自身免疫是指机体免疫系统针对自身组织成分产生了抗体和致敏淋巴细胞,引起免疫应答的现象.当自身免疫引起自身组织器官功能障碍并出现临床症状者,称为自身免疫病(autoimmune dis-ease,AID).目前发现的自身免疫病有30余种,大多为原发性,少数为继发性.原发性自身免疫病原因不明,与遗传因素密切相关,分为器官特异性和非器官特异性.器官特异性AID的靶抗原和病变常局限于某一特定器官,非器官特异性AID的靶抗原和病变常呈全身性或系统性.