汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达

目的：在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法：PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区，前者经EcoRI及XhoI双酶切，后者经SacI及XhoI双酶切，将两者定向克隆入pET32a（＋），转入感受态E．coli Top10。获取重组质粒，经PCR、双酶切及序列分析鉴定后，转入E．coli BL21感受态。经IFTG诱导表达，其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测。结果：SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a（＋），目的蛋白的分子质量约为67．1ku，表达量占菌体总蛋白的40％以上，Western-blot有特异性条带。结论：SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达，为其后的应用奠定了基础。     

天津市感染流行性出血热病毒的重点人群调查分析

目的确认天津市2005年感染(隐性或显性)流行性出血热(EHF)病毒的重点人群,以便有针对性地采取预防控制措施。方法本次选定的EHF“重点人群”包括:废品收购人员、疫点周围人群、食品加工人员和农民;并设研究人员为对照组。根据2004年疫点周围人群初步监测结果(EHF病毒IgG抗体阳性率0.72%)确定本次每类人群的样本量≥140人份(至少查出1例阳性者)。采集各类人群血清,用间接免疫荧光法(IFA)检测血清中的EHF病毒特异性IgG抗体,通过!2检验分析。结果从546例“重点人群”中检出IgG抗体阳性14例,隐性感染率为2.56%,其中废品收购人员高达7.50%,与对照组(研究人员)隐性感染率(0.79%)比较差异有统计学意义(X2=5.473,PX2=0.544,P>0.05);“重点人群”中隐性感染者无年龄和性别差异。结论废品收购人员是天津市感染流行性出血热的重点人群;疫点周围人群、食品加工人员和农民属一般人群。     

A群链球菌的分子分型研究进展及应用

A群链球菌(GAS)是全球范围内的重要致病菌,可引起多种严重感染性疾病、免疫介导性疾病和中毒性疾病。GAS的分子分型鉴定是其分子流行病学的重要研究内容,近年多种分子分型技术应用于GAS分型鉴定研究,该文对A群链球菌的主要分子分型技术的原理、应用和相关性研究进行综述。     

肾综合征出血热早期实验室诊断

目的:探讨肾综合征出血热(HFRS)患者的早期实验室诊断。方法:分别利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测HFRS患者抗体IgM,免疫荧光法(IFA)检测患者抗体IgG,套式RT-PCR法检测患者血清中的病毒RNA,同时对PCR产物M基因部分片段进行序列分析。结果:16例发病1周以内的患者的血清样本中,IgM阳性比例为9/16,IgG阳性比例为9/16,2者均阳性者为7例,IgM或IgG最早出现在发病后第4天。16例患者中RT-PCR阳性表达有11例,其中在发病≤5d的患者样本中,RT-PCR阳性比例达到11/12,基因分型均为SEO型。结论:相对于血清学检测,利用RT-PCR进行HFRS患者的病毒核酸检测更有利于早期诊断及分子流行病学调查。     

尿道致病性大肠埃希菌新基因R049的敲除

目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(uropathogenic E.coli,UPEC)132株新基因R049的敲除,构建R049缺失突变株。方法对基因敲除所需的质粒pKD46和pCP20分别进行抗生素抗性改造,在其bla基因(Amp)r中插入带有启动子的Zeocin抗性基因(zeo),使其均具有Zeocin抗性(Zeo)r。然后进行Red同源重组,利用pKD46(Zeo)r携带的λ噬菌体重组酶将氯霉素抗性基因替换UPEC132基因组的R049基因,再利用pCP20(Zeo)r携带的FLP重组酶消除氯霉素抗性标记,在染色体上只保留1个FRT位点。结果质粒pKD46和pCP20抗生素抗性改造完成,并利用Red同源重组完成了对UPEC132的R049基因的敲除。结论构建了尿道致病性大肠埃希菌R049缺失突变株UPEC132ΔR049,为进一步对R049基因的功能研究奠定基础。