青年教师激发学员学习 《医学寄生虫学》兴趣初探

在教学中激发、调动学员的学习兴趣,是教学研究的重要课题之一。青年教师要从自身特点中寻找突破点,利用精心设计,突出特色,丰富教学手段和鼓励学员质疑等方式激发学员学习《医学寄生虫学》兴趣,提高教学质量。     

TAT-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达

目的：构建蛋白质转导结构域（protein transduciton domain,PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶（targeted ribonuclease,TR）融合蛋白的原核表达载体。并在大肠杆菌中表达。方法：将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因，乙肝病毒核心蛋白（HBVcore protein,HBVc)基因，人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素（human eosinophil derived neurotoxin,hEDN)基因，克隆入含PTDTAT的pTAT原核表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）LysS内，以I：PTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果：成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体，并在IPTG诱导下获得特异性表达。结论：Tat-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建。为体内应用靶向核酸酶治疗乙型肝炎奠定了基础。     

靶向核糖核酸酶在体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究

目的 观察HBV靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)的体外抗病毒作用。方法 将包含HBV核心蛋白(HBVc)和人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)编码基因克隆入pcDNA3．1(-)，构建HBV TR重组真核表达载体p／TR，构建包含HBV核心蛋白、人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素以及突变失活的HBV TR编码基因的重组真核表达载体p／HBVc、p／hEDN、p／TRmut(hEDN的Lysll3→Arg,失去其RNase活性)作为对照。脂质体转染p／TR、p／HBVc、p／hEDN、p／Trmut、pcDNA3．1(-)进入2．2．15细胞。转染后，RT-PCR证实转染基因的表达，通过观察转染细胞的形态核MTT法检测转基因表达的细胞毒性。用固相放免法测定转染细胞培养上清HBsAg浓度。结果 转基因在2．2．15细胞内都有表达，且对细胞无毒性。与空转染组相比，pcDNA3．1(-)/TR转染组HBsAg含量下降58％；对照各质粒无此变化。结论 TR在体外可以抑制HBV复制，同时对宿主细胞无毒性。TR可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染。     

可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库构建方法的建立及其实验参数的优化

目的 建立可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的构建方法 并优化其实验参数.方法 体外合成可编码随机12肽的DNA片段.将该DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体pQCX-IX-EGFP,连接产物电击转化大肠杆菌,转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库,其间通过大量的实验优化:插入片段与载体的摩尔比、连接反应的条件、连接产物的DNA浓度以及电击转化参数等关键的实验参数.结果 按照本研究所确立的方法 和最佳实验参数构建的可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的滴度为2.85×105cfu/mL,成功转化子的比例接近100%,编码随机12肽的DNA序列正确率为83%.结论 成功建立了可表达随机12肤库的逆转录病毒初级文库的构建方法 ,并确定了最佳的实验参数,为后续的可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立奠定了良好的基础.     

榄香烯乳注射液抗癌作用的研究

目的探讨榄香烯乳注射液对小鼠移植性肿瘤及肿瘤细胞株的抗癌作用.方法体内抑瘤试验:选肝癌H22、肉瘤S-180、艾氏腹水癌等瘤株.腹腔注射给药,观察记录对腹水癌的生命延长作用及对实体瘤的抑制作用.体外细胞毒试验:选用K562白血病、Hela宫颈癌细胞株,采用MTT法,计算对肿瘤细胞株平均细胞生长抑制率.结果榄香烯乳注射液能明显延长腹水型荷瘤小鼠的生存时间.对K562白血病、Hela宫颈癌细胞株有一定的抑制作用.结论榄香烯乳注射液对肿瘤细胞体内抑瘤试验、体外细胞毒试验均有明显的抑制作用.     

中国红参成分的研究

从吉林红参(亦称中国红参,Panax ginseng C.A.Meyer)中分离得到十种单体(RG1～10),用化学方法、红外光谱、质谱(FD-MS,FAB-MS)、~(13)C-核磁共振等光谱法鉴定了其化学结构。分别为人参皂甙:20(R)-ginsenoside Rh_1(RG-1),20(S)-Rg_(?)(RG-2),20(R)-glnsenoside Rg_2(RG-3),20(R)Propanaxa-triol(RG-4)以及ginsenosides Rg_1(RG-5),Re(RG-6),Rd(RG-7),Rc(RG-8),Rb_2(RG-9),Rb_1(RG10)。其中前四种(RG1～4)系首次从中国红参中分离得到的人参皂甙类成分,未炮制前的白参用薄层对照不含有这四种成分。     

刚地弓形虫:免疫原性的金属肽链酶的鉴定和纯化

原生动物门刚地弓形虫是一类专性细胞内寄生虫,它可以引起鸟类和哺乳动物的、包括人的广泛疾病,而且对胎儿和免疫缺陷病人可以导致严重的临床症状。在原生动物门酶学研究中,细菌蛋白酶中的一些金属肽链酶和发病机制有关,包括诱导坏死性的组织损伤和灭活宿主的补体系统。下面将要报道的是一种新的胞浆内寄生的刚地弓形虫氨基多肽酶的鉴定和纯化。     

异种表皮生长因子受体胞外段的表达及其抗肿瘤效果研究

目的:构建异种EGFR蛋白疫苗并研究其抗肿瘤效果.方法:用PCR方法获得鸡EGFR胞外片段, 与pGEX- 4T-2载体连接, 并在E.coli BL21(DE3)中表达鸡的EGFR胞外片段与GST的融合蛋白, 融合蛋白经Ni2 亲和层析柱纯化、复性后, 免疫小鼠, 免疫3次后, 接种小鼠Lewis细胞, 观测肿瘤生长情况, ELISA检测小鼠血清中抗EGFR蛋白的抗体效价.结果:成功构建了EGFR胞外段基因的原核表达载体; SDS-PAGE显示成功表达了目的融合蛋白; 融合蛋白免疫小鼠后, ELISA法检测到特异性抗EGFR抗体; 实验组与对照组肿瘤体积的比较结果显示, 融合蛋白疫苗能够在一定程度上抑制肿瘤的生长.结论:异种EGFR蛋白能够克服免疫耐受问题, 诱导机体产生抗体, 有一定的抗肿瘤效果, 为后续的肿瘤疫苗研究打下了基础.     

核酸血筛试剂6混样和48混样检测在血液筛查中的适用性评价

目的评价核酸血筛试剂48份标本混合方式(以下简称48混样)与6份标本混合方式(以下简称6混样)在血液筛查中的适用性,为临床用血检测方案的制订提供参考。方法将阳性标本编到日常检测剩余的标本组中,分别用48混样和6混样方式进行检测,并分析检测结果。两种混样检测方式结果不一致的标本分别复检,将试验中阳性结果的混样拆分单检,单检阳性标本及背景为阳性的标本采用核酸单份标本定量试剂进行检测,并分析统计结果。结果共检测11 856份标本,符合方案的共计10 944份标本。6混样和48混样检出的HBV DNA、HCV RNA、HIV-1RNA阳性pool数分别为23、15、20和22、14、20。两种混样方式检测的HBV、HCV、HIV-1阳性符合率分别为95.65%、93.33%、100.00%,阴性符合率均为100.00%,总符合率分别为99.56%、99.56%、100.00%,Kappa值分别为0.975、0.963、1.000,两种混样方式检测结果一致性良好。结论综合6混样和48混样检测的检出率、效率、成本和漏检风险,48混样检测可以作为血站和血液制品公司血筛检测的一种参考方案。