用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

Ⅳ型胶原、层粘连蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达

目的　探讨Ⅳ型胶原 (typeⅣcollagen ,ColⅣ )、层粘连蛋白 (laminin ,LN)在良恶性甲状腺肿瘤的表达及其意义。方法　免疫组织化学检测 10例甲状腺正常组织和 4 6例甲状腺瘤、 19例甲状腺癌组织中ColⅣ、LN的表达。结果　ColⅣ、LN在甲状腺肿瘤基底膜阳性强度普遍较正常组织增强 ,但在甲状腺癌中有较甲状腺瘤明显的基底膜破坏 (P <0 0 1) ,LN在甲状腺肿瘤细胞中有表达 ,甲状腺癌细胞与甲状腺瘤细胞中LN阳性表达率差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论　ColⅣ、LN与甲状腺肿瘤的生长、浸润等恶性生物学行为密切相关 ,可作为甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断的参考指标之一     

第五届欧洲男科学学术会议纪要

第五届欧洲男科学学术会议于2008年11月26～28日在意大利罗马召开，来自于全世界的400余名男科学专家和学者参加了这次盛会，亚洲国家共有4名代表参加了本次会议，中国代表是来自于华中科技大学同济医学院计划生育研究所熊承良教授和李红钢博士，另2名是来自马来西亚的学者。     

大鼠肺鳞癌发生发展中环氧化酶-2和caspase-3的表达和意义

目的 :研究参与炎症的环氧化酶 -2(Cox 2 )和凋亡相关蛋白caspase 3在大鼠肺鳞癌发生发展各阶段的蛋白表达状况并探讨炎症、凋亡和肺癌发生发展的关系。方法 :Wistar大鼠 80只 ,左肺叶支气管灌注含三甲基胆蒽(MCA)和二乙基亚硝胺 (DEN )的碘油溶液 ,分批处死获取肺鳞癌形成过程各阶段标本。免疫组化检测各阶段病变组织Cox 2、caspase 3 的表达并计算免疫组化评分 (IHS)。结果 :79 0 0 %( 4 9/ 62 )的动物标本有多个阶段病变共存 ,共获取支气管膜上皮增生 14例 ,鳞状化生 2 5例 ,不典型增生 3 3例 ,原位癌 12例 ,侵袭癌 5 4例 ,转移癌 17例。正常支气管黏膜上皮偶有Cox 2弱阳性表达 ,随着癌变进展而逐步上调。不典型增生、原位癌及转移癌阶段Cox 2的IHS增高有统计学意义 ,P <0 0 1、P <0 0 5、P <0 0 1。 10例对照组大鼠支气管黏膜上皮细胞中 8例 ( 8/ 10 )有caspase 3的阳性表达 ,随着支气管黏膜上皮的癌变进程表达下降。不典型增生、转移癌阶段caspase 3的HIS降低有统计学意义 ,P <0 0 5、P <0 0 1。在 165例大鼠肺组织病变中 ,Cox 2与caspase 3呈显著负相关 ,χ2 =2 1 675 ,spearman相关系数为 -0 2 46,P =0 0 0 1。结论 :Cox 2、caspase 3均与肺鳞癌的发生和发展过程相关 ,可能是联系炎症、凋     

无精子症遗传学病因及其与内分泌的关系

一致,其中,Klinefelter综合征及Y染色体AZFa+b+c区缺失对内分泌造成严重影响.     

大鼠实验性肺鳞癌癌变各阶段间质微血管密度及 VEGF、 FLK-1表达的动态变化

目的：观察化学致癌物诱发大鼠肺鳞癌癌变过程中间质微血管密度（ microvessel density,MVD）变化及血管内皮细胞生长因子（ vascular endothelial growth faetor,VEGF）及其受体（ FLK 1）表达的变化,探讨上述指标与肺癌发生发展的关系。方法： Wistar大鼠 80只,其中 70只用致癌质碘油溶液左肺叶支气管灌注, 10只对照。第 15～ 75天分批处死动物,取左肺组织。应用免疫组织化学 S P法检测大鼠肺鳞癌癌变各阶段组织的 VEGF、 FLK 1的蛋白表达,在 vWF染色切片上检测 MVD。结果：随大鼠肺鳞癌的发生发展, VEGF、 FLK 1表达均逐渐增强, MVD计数逐渐增高。不典型增生 MVD（ 8.92± 3.80）、 VEGF阳性系数（ 1.25± 0.95）,原位癌 MVD（ 39.5± 12.6）、 VEGF（ 2.25± 1.07）,早期浸润癌 MVD（ 58.5± 18.4）、 VEGF（ 3.03± 0.93）之间比较,其差异分别具有高度显著性 (P<0.01)。原位癌 FLK 1阳性系数（ 2.00± 0.93）和早期浸润癌 FLK 1阳性系数（ 2.63± 1.54）比较,其差异具显著性（ P< 0.05）。 VEGF表达与 MVD（ r="0.983" 7, P< 0.01）和 FLK 1表达（ r="0.968" 8, P< 0.01）呈高度正相关。 FLK 1在肿瘤细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞内都有表达,且在肿瘤细胞内的表达强度高于血管内皮细胞。结论：新生血管形成是大鼠肺鳞癌发生发展的重要现象。 VEGF、 FLK 1与肿瘤血管生成、肿瘤的浸润扩散密切相关。 VEGF通过旁分泌及自分泌途径参与肿瘤血管生成和肿瘤的发生发展。     

胰岛素样生长因子 I与早产儿早期营养及生长关系的临床研究

目的探讨血胰岛素样生长因子 I(IGF I)与早产儿早期营养、生长调控的关系。方法采用酶联免疫法测定41例早产适于胎龄儿出生后第8、15天的血清IGF I质量浓度。同时监测早产儿的体重、Kaup指数以及每天实际摄入的能量、蛋白质和母乳量。结果早产儿出生后第8天血清IGF I质量浓度与胎龄、出生体重以及出生后3~7d实际摄入的能量、蛋白质的量呈正相关(P<0.05)。第15天血清IGF I质量浓度与出生后8~14d实际摄入的能量、蛋白质的量呈正相关(P<0.05)，而与胎龄、出生体重不相关(P>0.05)。早产儿在出生体重、胎龄、摄入的蛋白质和能量的量同等的情况下，摄入母乳量对血清IGF I质量浓度有正性影响(P<0.05)。血清IGF I质量浓度随着早产儿的日龄而上升，与体重增长速度和Kaup指数呈正相关(P<0.05)。结论血清IGF I质量浓度受到早产儿摄入能量、蛋白质、母乳量和日龄的影响，是早产儿生后早期的生长调控激素，IGF I可作为反映早产儿早期营养和生长的一个指标。     

人胎肺成纤维细胞对小鼠胚胎干细胞生长支持作用的研究

目的探讨人胎肺成纤维细胞（hELF）作为饲养层支持小鼠胚胎干细胞（ES）的生长及维持ES细胞的未分化状态。方法采用生长状态良好的hELF,经一定浓度的丝裂霉素C处理后,制备hELF饲养层,将ES细胞接种到该饲养层进行传代培养。观察ES细胞的形态学特征,测定ES细胞表面碱性磷酸酶（AKP）活性、干细胞标志物Oct-4的表达。结果hELF细胞经丝裂霉素C处理后不再增殖,保持较好的细胞功能和形态学特征。ES细胞克隆在饲养层呈现集落状隆起生长,边缘清楚,结构致密,与周围的饲养层细胞界限清楚。ES细胞仍然保持未分化状态,高度表达AKP及胚胎干细胞转录因子Oct-4。结论hELF作为饲养层可以较好的维持胚胎干细胞的生长及其未分化状态。hELF源自人工流产组织,取材来源较丰富,为hELF饲养层应用于人胚胎干细胞的培养奠定了基础。     

移位性跟骨关节内骨折切开复位内固定治疗的临床研究

跟骨骨折约占人体所有骨折的2％。对跟骨关节内骨折的治疗，采取的治疗方法包括保守治疗、切开复位一期关节融合等，但取得的结果远不令人满意。随着cT的应用，对跟骨骨折的损伤机制有了更深入的了解，国内外有很多报道对移位的跟骨关节内骨折采用切开复位钢板螺钉内固定治疗取得了好的结果。优良率在90．2％-98．3％。本研究的目的是评价我院手术治疗跟骨骨折的初步结果。     

用显微切割-PCR检测石蜡标本微小病灶DNA异常

目的 :探讨在石蜡切片中行显微切割 PCR检测微小病灶基因突变和微卫星不稳定的方法及意义。方法 :选取本室实验性大鼠肺鳞癌浸润癌伴有支气管粘膜上皮增生、鳞状化生和 或不典型增生的蜡块标本 19例 ,分别切割各病变阶段组织并提取DNA用作PCR模板 ;SSCP检测P5 3基因第 5～ 8外显子突变及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星点ADRB2 的不稳定现象。结果 :7例支气管粘膜上皮增生 ,1例鳞状化生 ,12例不典型增生 ,19例浸润癌组织都分别成功地显微切割并提取DNA。除 1例上皮增生及 2例不典型增生组织PCR扩增失败外 ,其余切割组织P5 3外显子及微卫星点PCR扩增均获成功。 19例浸润癌组织 10例有P5 3基因突变 ,增生及鳞状化生组织未发现P5 3基因突变 ,10例不典型增生组织有 3例P5 3基因突变 ,这 3例标本中的浸润癌组织也都有相同外显子的突变。所有扩增成功微卫星点均未发现不稳定现象。结论 :在石蜡标本中进行显微切割 PCR检测DNA异常可获得较满意结果。联合应用连续切片 HE染色 显微切割 PCR 银染技术使定点对位分析肿瘤发生发展各阶段微小病灶中基因异常得以实现 ,对于研究癌前病变、不典型增生组织中DNA分子变化有重要应用价值