钙调素ELISA定量检测方法的建立与实验条件优化

目的 研究ELISA法定量测定钙调素(CaM)的最优条件。方法 用重组人CaM、免抗CaM，通过对聚苯乙烯反应板进行紫外辐照处理，改善抗原因相化条件；通过对抗原包被液、包被时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。结果 以pH7．4 0．01mol/L的PB为包被液，包被及后续封闭时间为4℃静置72h，CaM包被浓度为5-8g/ml，抗原抗体反应时间为37℃ 60min，可获最佳CaM定量结果。结论 建立的检测CaM的ELISA测定方法，敏感性、重复性均在临床检测可接受的范围内，标准曲线的线性也较好，可用于细胞内外CaM的定量研究。     

35例闭合性十二指肠损伤的早期诊断分析

目的:探索闭合性十二指肠损伤患者早期诊断方法,以提高十二指肠损伤的早期确诊率,降低患者手术并发症发生率和死亡率.方法:采用作者所建腹部外伤数据库,收取广州南方医院、宁夏银川解放军第五医院1995～2006年收治十二指肠损伤患者35例,对其早期诊断方法、诊断结果及漏诊、误诊原因进行回顾性分析.结果:术前13例(37.1%)患者剖腹前得到明确诊断;22(62.9%)例患者术前首诊漏诊,其中19例(54.3%)患者剖腹探查术后确诊,3例(8.6%)患者首次剖腹探查术后仍漏诊.结论:十二指肠损伤发病率低,漏诊率高,术前诊断困难,术中仍易被漏诊.行腹腔穿刺及CT、口服泛影葡胺造影、腹部X光片及腹部B超检查的综合应用有利于明确诊断,可减少术后并发症,降低死亡率的发生.     

鹿茸蜡片及伪制品的鉴别

目的:探讨简便、易行、快速检定市售伪制鹿茸蜡片的方法.方法:采用性状、TLC及数码摄影图谱分析真伪鉴别的方法.结果:伪制品性状与真品有相似之处,真品的切面隐约可见层状纹理;其薄层色谱在与对照药材及甘氨酸对照品相应位置有相同颜色的斑点.伪制品不同点为多数"茸皮"可见两端拼接的缝,内面颜色一致,或花斑状、不规则碎块聚集状,不同的伪制品其颜色不同,无层状纹理,有油渍感;其薄层色谱在与对照药材及甘氨酸对照品相应位置处无相同颜色斑点.结论:用性状和TLC比较分析的方法可达到鉴别目的.     

包头市41387例院外急救患者流行病学分析与对策

目的 了解包头市院外急救疾病谱并予以对策;方法调取本市120指挥中心2008年～2011年,受理急救患者数据,进行统计分析.结果 受理患者总数41 837例,男性29 072例,占总数70.25%;女性12 315例,占总数29.76%,男女比例2.36:1.受理疾病谱:创伤类占30.47%(12 611人)循环系统疾病占14.04%(5 809人)神经系统疾病13.07%(5 410人)呼吸系统疾病占6.54%(2 707人)消化系统疾病占3.04%(1 260人);物理化学伤类疾病占15.96%(6 607人)主要以醉酒占6.91%、药物中毒占2.17%、煤气中毒占1.17%为主,其他均不足0.1%;院外急救昏迷者占2.75%(1 139人)危重症者占3.51%(1 470人)死亡6.34%(2 627人)死亡者男性1 679人、女性948人、男女比例1.77:1;全天出诊20:00～23:00最多,占58.67%,全年平均3、10月患者最多,6、7月次之,2、4、5月份最少.结论 创伤发生比例较高,14～45岁居多明显于其他年龄组;循环、神经、呼吸、消化系统疾病均56岁以上受理者居多;除药物中毒、孕产妇及小于14岁以下者女性多于男性外,其他受理者均男性多于女性;物理化学伤类发病与地区生活习惯、气候条件及工作环境有关.此外,本市院外急救死亡率偏高.对策:加强急诊医疗的连续性和院内治疗的协调性;缩短救治半径,增加急救分站;提供应急预警与完善急救预案,加强急诊建设;加强社区对老年病慢性病与季节性多发病的宣教工作;加强社会监管,安全生产、交通安全及法制意识.     

双向电泳和质谱技术在类风湿关节炎滑膜细胞差异蛋白分析中的应用及意义

目的 采用2-DE和质谱技术分析RA患者和创伤件关节炎患者关节滑膜组织中FLS蛋白质组学的变化,寻找RA关节滑膜特异性自身抗原.方法 采用2-DE分离6例创伤性关节炎患者及3例RA患者关节滑膜组织中FLS总蛋白质,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,并用MALDI-TOF-MS对筛选出的差异蛋白质点进行鉴定.结果 RA患者与创伤性关节炎患者中的FLS蛋白质通过2-DE检测,分别检出1 633、1 603个蛋白质点;对2组相互匹配的蛋白质点进行差异分析后,其中蛋白质差异量大于3倍的差异点共有92个,从中选取在RA患者FLS中表达上调的33个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS 鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出包括肿瘤型丙酮酸激酶、α-烯醇化酶、二硫键异构酶A3 前体、谷胱甘肽转移酶、泛素结合酶E2K、血小板活化因子乙酰水解酶、二氢嘧啶酶样2、腺苷酸酶、转醛醇酶、乙酰基辅酶A异构酶、26S蛋白调节亚单位S6a、膜联蛋白A11、过氧化物还原酶1、人色氨酰tRNA合成酶、核纤层蛋白、肌间蛋白、核基质蛋白、肌动蛋白、T-复合物多肽1、葡萄糖调节蛋白75、αB-晶体蛋白、葡萄糖调节蛋白78、未知蛋白:如PSMFA和SELENBP1等30个与RA发病有关的蛋白.结论 RA患者与创伤性关节炎患者FLS间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有可能是构成RA关节滑膜的相关自身抗原,并可能在诱导RA自身免疫反应中发挥一定作用.     

类风湿关节炎免疫学发病机制研究的最新进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性多关节炎为特征的慢性、进行性、侵袭性风湿免疫病。RA不仅自身免疫系统功能紊乱,也涉及心、肺、肾、神经和血管等多个系统,不同程度地影响着患者的健康和生活质量。该文探讨了RA免疫学发病机制研究的最新进展,以加深人们对疾病的认识,为RA的基础研究和临床治疗提供讨论的依据与新的方向。     

腺苷对急性出血坏死性胰腺炎肠道屏障功能保护机制的实验研究

目的研究腺苷对猪急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肠道屏障功能保护作用的机制.方法12只成年小型猪经ANHP成模后随机均分成对照组和腺苷治疗组(简称腺苷组),比较两组动物在AHNP诱发前后不同时相点肠道血流量、肠道通透性、门静脉血细菌和内毒素的变化.结果(1)腺苷组在AHNP成模后8,24h和第7d时肠道血流量显著高于对照组(P<0.01或P<0.05);(2)腺苷组成模后8,24h和第3d肠道通透性显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);(3)对照组门静脉血细菌和内毒素明显增加,腺苷组门静脉血细菌数在AHNP诱导后第24h和第3d较对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);门静脉血内毒素含量显著低于对照组各时相点(P<0.01或P<0.001).结论腺苷能显著增加肠道血流量;腺苷可以明显减轻肠粘膜损害,保护肠道屏障功能,腺苷的这种作用可能是通过增加肠道血流量而实现的;腺苷可以明显减少肠道细菌和内毒素移位.     

术中超声辅助股浅静脉瓣膜戴戒术治疗下肢深静脉瓣膜功能不全

目的研究术中加用多普勒超声辅助股浅静脉瓣膜戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全(PDVI)的疗效和应用价值。方法对2001年6月起至2006年6月第四军医大学西京医院经静脉顺行造影证实为PDVI的87例临床资料进行分析。分为两组:A组(44例)行术中联合多普勒超声的股浅静脉瓣膜戴戒术加曲张静脉剥脱术。B组采用传统股浅静脉瓣膜戴戒术加曲张静脉剥脱术。以瓣膜返流持续时间评价即时效果,以癌胚抗原蛋白(CEAP)临床分类与临床记分做随访评价疗效。结果A组病人戴戒前后术中超声检测显示静脉瓣返流持续时间戴戒后较戴戒前明显缩短(P<0.01)。CEAP分组结果显示A组手术有效率达95.0%(38/40),B组有效率为76.7%(33/43),两组有效率比较差异有显著性意义(P<0.01)。A、B两组术后临床记分均明显下降,差异有显著性意义(P<0.01)。结论股浅静脉瓣膜戴戒术采用术中多普勒超声检查进行辅助能够有效提高手术的针对性,提高疗效。     

抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的 分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,Id3)是重要的细胞生长调控分子,在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用.文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人Id3蛋白,制备抗人Id3单克隆抗体(McAb),以进一步研究Id3的生物学功能及其临床应用.方法 将重组表达载体Id3/pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化菌表达Id3重组融合蛋白(Trx-His-hId3),通过镍亲和层析柱纯化Trx-His-hId3.以纯化的Id3重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备Id3 McAb,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot进行抗体鉴定.结果 经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤,筛选出2株分泌抗人Id3 McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为McAb 6G7和6G9,免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1亚类.Western blot分析表明,McAb 6G7和6G9能与重组人Id3蛋白特异性结合.间接ELISA法检测2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为1∶ 1000、1∶ 5000.结论 成功制备了抗人Id3 McAb,为研究该蛋白的功能提供了有利工具.     

羚羊清肺丸止咳祛痰作用实验研究

目的：观察羚羊清肺丸的止咳祛痰作用。方法：羚羊清肺丸(药粉)2．0、4．0、8．0g．kg^-1，灌胃给药，采用小鼠氨水引咳实验和小鼠气管酚红排泌实验观察羚羊清肺丸对小鼠氨水引咳潜伏期，咳嗽次数和小鼠气管酚红排泌量的影响。结果：羚羊清肺丸可显著延长小鼠氨水引咳潜伏期、减少咳嗽次数，明显增加小鼠气管酚红排泌量。结论：羚羊清肺丸有较好的止咳祛痰作用。