柯萨奇病毒B5巢式RT-PCR检测方法的建立

目的:建立一种快速、灵敏、特异的柯萨奇病毒B5(CVB5)检测方法。方法:根据GenBank发表的CVB5河南分离株全基因组序列,在其VP1区设计并合成巢式RT-PCR引物,优化PCR反应条件,建立检测CVB5的巢式RT-PCR方法。将已测得TCID50的病毒标准株进行10倍梯度稀释后用上述方法检测,以评价该方法的灵敏性;将5株不同的CVB5毒株和EV71等4株其他肠道病毒毒株及阴性对照用该方法进行扩增,以检测其特异性。用建立的巢式RT-PCR方法对52份病毒性脑炎病例样本进行检测。结果:该方法对CVB5的两轮PCR扩增敏感性分别为10TCID50和10-4TCID50;所有CVB5毒株用该方法扩增结果均为阳性,所选其他肠道病毒扩增结果均为阴性。52份临床病例样本中检出10份CVB5阳性,阳性率为19.23%。结论:所建立的CVB5巢式RT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异度。     

河南省手足口病例肠道病毒71型分离株的全基因组序列分析

A16疏远.结论 HENAN08属EV71病毒的C4亚型,与AnhuiFY08、Zhejiang08和SHZH03进化途径类同.     

EV71TaqMan PCR检测方法的建立及初步应用

[目的]建立肠道病毒71型(enterovirus71)核酸的特异、快速、敏感的TaqMan探针PCR检测方法. [方法]根据GeneBank发表的EV71全基因组序列,在其VP1基因区段设计特异的引物与探针;以构建的重组质粒为模板,优化探针和引物浓度、最佳反应条件,建立最优化的实时定量PCR方法,评价其灵敏性、特异性和稳定性. [结果]引物和探针有良好的特异性,使用浓度为为0.8μM和0.4μM,可检测到100个RNA拷贝数,较传统的RT-PCR检测方法敏感性提高了100倍;同一样品Ct值重复检测3次,变异系数小于5%,表明该体系具有较好的稳定性. [结论]本研究建立的肠道病毒EV71-TaqMan荧光定量PCR方法,具有特异、灵敏、快速的特点,适用于由EV71感染引起的手足口病等的实验室早期诊断.     

病毒性脑炎病例中Echo6河南分离株VP1基因特征分析

Ech06可引起病毒性脑炎、手足口病等多种疾病,侵袭对象以1岁以下婴幼儿为主,病死率5．6％,国内外均有由Ech06引起的公共卫生事件报道     

河南省1950——2008年流行性乙型脑炎监测

洛阳市≥15岁组发病明显上升(58.93%),职业以农民为多(42.33%);各监测点仔猪乙脑抗体出现50%阳转的时间有差别,反映了乙脑发病强度的高低;各监测点主要蚊种构成不同,蚊虫密度高峰与乙脑发病高峰相一致.结论 根据乙脑发病的地域变迁、年龄、职业差异的特点,结合宿主动物、媒介蚊虫的监测结果,针对性地制定乙脑防制策略.     

河南省新安县和息县2012年蚊传虫媒病毒调查

目的了解河南省部分地区蚊传虫媒病毒的种类分布及基因型别。方法于2012年5-8月在河南省洛阳市新安县和信阳市息县的居民住房、猪圈、牛棚及树林中采集蚊虫。使用细胞培养法分离病毒,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行种属特异扩增鉴定,并用Clustal X2.1、Meg Align、Genedoc 3.2和Mega v5.1生物信息学软件完成病毒核酸序列的分子生物学分析并进行基因分型。结果共采集蚊虫4属5种7149只,其中新安县以骚扰阿蚊居多(2055只,51.36%),息县以淡色库蚊(2964只,94.16%)为主。共分离获得5株病毒,直接接种BHK-21细胞无病变、C6/36细胞培养仅导致轻微病变,其C6/36细胞传代培养物转接BHK-21细胞后3 d可致细胞明显病变;序列分析表明这5株病毒均属基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV),其中3株分离自淡色库蚊,2株来自三带喙库蚊。结论河南省部分地区依然存在JEV及其传播媒介,且目前当地自然界中循环的JEV仍以基因Ⅰ型为主。     

河南省流行性乙型脑炎综合监测与防制

目的分析河南省流行性乙型脑炎（乙脑）综合监测资料,为制定防控策略提供科学依据。方法用Excel2003、SPSS12.0和Epi Info2000软件统计分析河南省1995-2008年乙脑病例和国家级乙脑监测点唐河、息县媒介蚊虫、宿主动物的监测资料;用ELISA法检测宿主血清乙脑IgG抗体。结果 1995-2008年河南省乙脑发病呈周期性波动下降;91.75%的病例集中在7-9月;79.80%的病例分布于南部和东南部的信阳、南阳、驻马店、周口和洛阳市;全省发病以0～14岁儿童为主（85.01%）,洛阳市≥15岁组发病明显增多（56.84%）;87.31%的病例无接种史或接种史不详。猪乙脑抗体50%阳转率出现时间比人群发病高峰提前1个月;蚊虫密度高峰较人群发病高峰提前2旬。结论加强乙脑病例、宿主动物和媒介蚊虫的监测,提高乙脑疫苗接种率,重点控制高发区儿童、洛阳市大年龄组人群的发病,是降低河南省乙脑疫情的关键。     

我国部分地区病毒性脑炎标本的实验室检测

目的 初步了解我国病毒性脑炎的病原种类及其分布特征.方法用ELISA方法对2004年至2006年从我国6个省份收集的771例临床诊断为病毒性脑炎患者的急性期血清和脑脊液标本检测乙脑病毒IgM抗体,然后对乙脑IgM抗体阴性的所有血清标本检测其他7种常见病毒IgM抗体.此外,用PCR方法对54例脑脊液标本检测肠道病毒、版纳病毒和辽宁病毒的基因.结果经血清学检测,771例患者中的567例(73.5%)检测出病毒特异性IgM抗体,构成顺序为乙脑病毒(47.0%)、腮腺炎病毒(10.6%)、肠道病毒(8.8%)、单纯疱疹病毒(5.7%)、麻疹病毒(0.4%)、水痘-带状疱疹病毒(0.4%)、EB病毒(0.4%)、巨细胞病毒(0.3%);经分子生物学检测,在54例脑脊液中检测到8例(14.8%)肠道病毒基因阳性标本,未检测到版纳病毒与辽宁病毒基因阳性标本.结论乙脑病毒是我国病毒性脑炎的首要病原,腮腺炎病毒次之,肠道病毒和单纯疱疹病毒也是重要的病原.     

一例暴露因素不明的狂犬病病例的分子流行病学溯源

目的 对一例暴露因素不明的人狂犬病病例进行实验室确诊,通过分子流行病学分析探索其可能的感染来源。方法 通过对存活疑似人狂犬病病例的唾液、脑脊液、血清标本采用直接免疫荧光试验、反转录-聚合酶链式反应和快速荧光灶抑制试验进行实验室确诊;通过时空进化分析探索该病例可能的感染来源。结果 病例唾液标本直接免疫荧光试验结果呈阳性,病例血清标本经快速荧光灶抑制试验检测抗狂犬病病毒中和抗体呈阳性。病例唾液标本经反转录-聚合酶链式反应获得狂犬病病毒核蛋白基因预期扩增片段,序列测定进一步证实为狂犬病病毒。该狂犬病病毒株与2011年安徽省一株犬源狂犬病病毒株核苷酸序列同源性最高,为98.4%。结论 该疑似狂犬病病例可确诊为狂犬病病例。其发病源于至少2011年以来的某次不自觉的狂犬病病毒感染。