TGF-β1改善体外培养小鼠胚胎种植率及其作用机制的研究

目的 探讨TGF-β1在体外对小鼠胚胎发育及胚胎种植的影响及其作用机制.方法 ①收集小鼠2-细胞期胚胎,在含不同剂量TGF-β1的M16培养液中进行体外培养,观察胚胎发育情况,并进行胚胎移植,观察着床率;②测定移植后小鼠外周血及胚胎种植部位母胎界面IL-10/INF-γ水平.结果 ①1 ng/mL和10 ng/mL TGF-β1能提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率.其中TGF-β1 10 ng/mL时作用最显著,TGF-β1浓度过高对体外胚胎发育不利;②M16+TGF-β1 10 ng/mL组体外培养囊胚移植后母胎界面INF-γ低于M16组,差异有统计学意义[(30.89±11.31) pg/mL vs. (43.23±18.09) pg/mL,P<0.05].两组间IL-10水平无明显差异.结论 ①小鼠胚胎体外培养基中加入适宜浓度TGF-β1可提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率;②TGF-β1可能通过促进体外胚胎发育速率和质量,改善胚胎和内膜发育同步性,促进母胎界面Th1/Th2平衡向Th2偏移而促进胚胎着床.     

转化生长因子-β1在多囊卵巢综合征患者卵泡液中的表达及其对卵巢黄素化颗粒细胞miR-224表达水平的影响

目的通过检测多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者排卵前卵泡液TGF-β1的表达水平并研究TGF-β1在体外对PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞miR-224表达的影响,初步探讨TGF-β1在PCOS卵泡发育微环境中的作用机理。方法纳入接受IVF-ET治疗的PCOS患者及同时期卵巢反应性正常的非PCOS患者(对照)各16例,收集来自直径17mm以上卵泡、不含血液及冲洗培养基的卵泡穿刺液,采用ELISA方法检测上清液中TGF-β1水平。同时收集黄素化颗粒细胞进行分离、纯化和原代培养,用100ng/m L TGF-β1体外刺激颗粒细胞48h,采用实时定量PCR方法检测颗粒细胞miR-224的表达水平变化。结果不含卵子的卵泡液中TGF-β1浓度在PCOS组和对照组间无统计学差异[(206.67±16.19)mg/m L vs·(166.16±12.28)ng/m L,P>0.05)];含有卵子的卵泡液中TGF-β1浓度在PCOS组中显著低于对照组[(201.56±6.45)ng/m L vs·(404.90±51.29)ng/m L,P<0.01)]。TGF-β1在体外作用于卵巢黄素化颗粒细胞后,实时定量PCR检测结果显示PCOS组与对照组的miR-224的相对水平都较本组内不用TGF-β1刺激者增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCOS患者卵巢颗粒细胞所处微环境中TGF-β1表达水平的异常可能通过影响颗粒细胞miR-224的表达、进一步干扰卵巢颗粒细胞的功能,其具体作用及机理还有待进一步研究探讨。     

孕晚期小鼠脾脏巨噬细胞抗原提呈功能的改变

目的　研究孕晚期 Balb/ c小鼠脾脏巨噬细胞抗原提呈功能的改变。方法　分离孕晚期小鼠脾脏巨噬细胞 ,以动情期小鼠作为对照。通过诱导迟发超敏反应和体外淋巴细胞抗原特异性转化实验检测巨噬细胞使机体初始 T致敏的能力以及诱导致敏 T细胞增殖的能力。结果　将充分摄取和结合了抗原 HGG或 Pla- Ag的孕晚期小鼠脾脏巨噬细胞注射到动情期小鼠腹腔使之致敏 ,再用相同抗原注射到小鼠足底诱发的迟发超敏反应强度显著低于动情期小鼠 (P<0 .0 5 )。当孕晚期小鼠脾脏巨噬细胞被当作抗原提呈细胞时 ,体外用人γ球蛋白抗原或胎盘抗原诱导致敏的正常小鼠的 T细胞增殖强度也显著低于动情期小鼠 (P<0 .0 5 )。孕晚期小鼠脾脏巨噬细胞还能显著抑制动情期小鼠脾脏巨噬细胞刺激致敏 T细胞增殖的能力。结论　孕晚期 Balb/ c小鼠脾脏巨噬细胞的抗原提呈功能显著受到抑制     

环孢素A对正常人早孕滋养层细胞IL-10和IFN-γ分泌的影响

目的探讨环孢素A(CsA)在体外对早孕期滋养细胞产生白细胞介素10(IL-10)和干扰素Y(IFN-γ)的影响。方法采用酶消化法分离绒毛滋养细胞,加入不同浓度的CsA进行体外培养。计算机图像分析系统及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测滋养细胞上IL-10和IFN-γ蛋白及mRNA的表达。结果CsA在0．1umol／L、1umol／L时较对照组对滋养细胞的IL-10的蛋白分泌和mRNA表达均有明显促进作用(P＜0．05);不同浓度的CsA对IFN-γ蛋白分泌和mRNA表达均无明显作用(P＞0．05)。结论CsA在合适浓度范围内对滋养细胞的IL-10、IFN-γ分泌有良性调控作用。     

孕激素对早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子- Ⅰ受体基因表达的调控

目的　探讨孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子 - 受体 (IGF- R)基因表达的影响。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测不同浓度孕激素作用 72小时后及 0 .1μm ol/ L孕激素作用不同时间后人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达水平。结果　体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA呈强阳性表达 ,孕激素降调 IGF- R m RNA的表达 ,并与浓度呈显著负相关 (r=- 0 .6 80 ,P<0 .0 0 1)。孕激素终浓度为 0 .1μm ol/ L时 ,IGF- R m RNA的表达与作用时间无显著相关性 (r=0 .0 0 5 ,P>0 .0 5 )。结论　孕激素可能通过降调人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达 ,调节基质细胞的增殖和蜕膜化 ,对早期妊娠的维持起重要作用     

大鼠血清孕激素水平对胚胎“植入窗”的预测作用

目的　探讨大鼠血清孕激素 (P)水平对胚胎“植入窗”的预测作用。方法　收集自然交配孕 3～ 10天大鼠的血清及子宫组织 ,以动情期雌鼠为对照。通过组织学切片确定各孕天发生胚胎着床的大鼠数 ,以 P2 .5～P97.5间距表示胚胎“植入窗”。采用放射免疫法测定大鼠血清 P水平。用免疫组化 L s AB法和计算机图像分析检测孕激素受体 (PR)在孕早期大鼠子宫内膜及胚胎滋养层细胞中的表达。结果　胚胎着床的中位数时间为 6 .6 5天 ,大鼠胚胎“植入窗”在孕 4.6 5～ 8.6 8天之间。孕 3～ 10天大鼠血清 P曲线的峰值出现在“植入窗”内 (孕 5～ 8天 )。PR在大鼠内膜腺、腔上皮、基质细胞、蜕膜细胞及滋养层细胞中均有表达 ,其表达强度曲线的峰值也出现在大鼠胚胎的“植入窗”内 ,并与血清 P水平呈显著性正相关 ;PR在大鼠滋养层细胞中的表达随妊娠期增加而升高 ,与血清P无显著性相关。P、PR与胚胎植入时间均呈显著性相关 (相关系数分别为 0 .86 8和 0 .72 4,P<0 .0 5 )。结论　 P通过上调自身受体 ,对胚胎“植入窗”具有重要调节作用 ,P可能是胚胎“植入窗”的启动因子。连续监测血清 P可作为确定“植入窗”的生化标记。     

超排卵着床期小鼠子宫内膜LIF表达与雌孕激素的关系

目的研究超排卵对围着床期小鼠子宫内膜LIF表达的影响及其与雌孕激素的关系,探讨超排卵是否影响子宫内膜容受性的形成。方法将实验动物随机分为超排卵妊娠组和正常妊娠对照组,分别选取动情周期当天、合笼后发现阴道栓第2天、第4天、第6天、第8天共五个时间点取小鼠子宫内膜,用免疫组化和原位杂交法测定小鼠子宫内膜LIF的蛋白表达和LIF mRNA的表达,同时分别测定小鼠血清雌、孕激素水平。结果正常妊娠组小鼠LIF蛋白在围着床期子宫内膜上的表达动情周期较低,在妊娠之后开始上升,在妊娠第4天（即小鼠孕卵着床当天）达到最高峰（P〈0.05）,继之在子宫内膜的表达下降,在妊娠第8天降到非孕期水平;超排卵组小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白随着妊娠天数而表达增加,在妊娠第2天达到最高峰（P〈0.05）,继之在子宫内膜的表达下降,在妊娠第8天降至非孕期水平。超排卵组与对照组相比较,其在妊娠第2天的表达明显高于对照组（P〈0.05）,在妊娠第4天的表达明显低于对照组（P〈0.05）;超排卵组和对照组小鼠血清雌、孕激素浓度均随妊娠天数的增加逐渐升高,在各时间点超排卵组的雌、孕激素水平明显高于对照组（P〈0.05）。小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达与雌激素水平在一定范围内成正相关,超过一定临界水平后呈负相关（P〈0.05）,而与孕激素未发现有相关性（P〉0.05）。结论超排卵可能对小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有影响,使其表达峰值提前,由此推测影响子宫内膜容受性的建立;体内雌激素水平与围着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有相关性,但尚不能排除孕激素水平与其有相关性,说明LIF蛋白的表达与雌激素的调控有关,并且可能存在一定的数量关系。     

卵泡液中游离Fas（sFas）、游离FasL（sFasL）以及LH的不同浓度对体外受精-胚胎移植中妊娠结局的影响

目的：分析体外受精（IVF）患者卵泡液中sFas和sFasL的浓度与妊娠的关系,以及与卵泡液中的促黄体素（LH）水平之间的相关性。方法：收集行IVF／ICSI患者的卵泡液,测定sFas、sFasL和LH浓度。结果：妊娠组排卵前卵泡液中的sFasL和LH水平显著高于未妊娠组（P分别为0．002和〈0．001）,两组中sFas水平没有明显差异。通过logistic回归分析,卵泡液中与妊娠有统计学相关的因素仅为LH,OR=4．117（P为0．001）。卵泡液中的LH和sFasL的水平呈明显正相关关系（P〈O．001）,LH与sFas之间无显著相关关系。结论：在IVF／ICSI治疗周期中,卵泡液中的sFasL蛋白和LH水平与妊娠结局有关,卵泡液中的LH水平可能通过调节卵泡局部的某些系统来调节卵泡中Fas-FasL系统介导的凋亡作用。     

胰岛素样生长因子系统在人早孕绒毛滋养层细胞中的表达

目的 探讨胰岛素样生长因子系统（IGFs)在体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术半定量检测体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中IGFsmRNA的表达，结果 体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中可以检测出IGF-ⅡmRNA,IGF-ⅠRmRNA，IGFBP-3mRNA的表达。结论 IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入，增殖分化，胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌和/或旁分泌方式发挥重要的调节作用。     

降低聚乙烯吡咯烷酮浓度对卵胞浆内单精子显微注射效果的影响

目的:探讨卵胞浆内单精子注射(ICSI)操作中,降低聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对ICSI效果的影响。方法:将132例160个周期接受ICSI治疗的患者所获1549个MⅡ卵随机1∶1分配,分别采用在含7%和3.5%PVP(对有A、B级活动精子的周期)或者在3.5%和不含PVP(对仅有C、D级活动精子的周期)操作液中制动的精子行ICSI,比较ICSI效果。结果:PVP浓度为3.5%时,ICSI卵的受精率和卵裂率分别为80.12%和96.78%,与PVP浓度为7%时的受精率(79.84%)和卵裂率(96.89%)比较差异无显著性(P>0.05),但采用3.5%PVP制动精子行ICSI获得的优质胚胎率达77.76%,高于7%PVP制动时的71.43%,差异有显著性(P<0.05)。在不含PVP操作液中制动精子后行ICSI,卵子的受精率、卵裂率及优质胚胎率均与在3.5%PVP制动精子行ICSI差异无显著性(P>0.05)。结论:对于活动力良好的精子,降低精子制动液的PVP浓度至3.5%,可提高ICSI的优质胚胎率。精子活动力差时,进一步降低PVP浓度对ICSI效果无明显影响。