HIV-2 gp105重组鸡痘病毒引起小鼠细胞和体液免疫应答

人免疫缺陷病毒Ⅱ型（human immunodeficiency virus type 2，HIV-2）于1986年在几内亚一比绍被发现。起初HIV-2仅在西非呈区域性流行，随后在欧洲、美洲和亚洲也出现了感染者和发病者。我国的首例HIV-2感染者于1998年在福建省发现，并检测出HIV-1与HIV-2的共感染患者。因此，研究有效的HIV-2疫苗势在必行。HIV-2env基因编码前体蛋白gp140，后者裂解后生成外膜蛋白gp105和跨膜蛋白g036。gp105是病毒的主要抗原，其表面具有大量的Ab表位、TH表位和CTL表位，能诱导机体产生强烈而广泛的中和抗体和细胞毒（CTL）反应，因此是基因工程疫苗研究的重要靶点。本研究将已构建的HIV-2 gp105重组鸡痘病毒大量制备后免疫BALB／c小鼠，观察其在小鼠体内的免疫原性，以获得第一手的实验资料。     

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的　检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法　将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 、CD8 T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果　重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论　HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb c小鼠产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答     

IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。     

HIV-1 Gag蛋白酵母表达产物的纯化及免疫原性检测

目的 纯化HIV-1Gag蛋白，并检测其免疫原性。方法 将表达HIV-1Gag蛋白的酵母工程菌GS115／pPICGAG接种到YPD培养基中多次传代后，用PCR检测其目的基因。该酵母工程菌在BMMY培养基中经甲醇诱导表达，上清液初步浓缩后上柱进行凝胶过滤层析，并将纯化蛋白免疫Balb／c小鼠，检测其血清抗体水平。结果 该酵母工程菌经多次传代后外源基因不丢失。Western blot检测结果表明纯化蛋白具有很好的反应原性，其纯度可达85％。纯化蛋白免疫小鼠后可诱导特异性抗体产生。结论 表达HIV-1Gag蛋白的酵母工程菌具有很好的遗传稳定性，其表达产物可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

参附注射液玻璃化保存的大鼠坐骨神经修复异体神经缺损研究

目的探讨参附注射液提高大鼠坐骨神经深低温玻璃化保存效果的可行性。方法 SPF级SD雄性大鼠坐骨神经分别在含有不同体积分数参附注射液(0、5%、10%、30%)的玻璃化液(A、B、C、D组)中深低温(-80℃)保存4周,透射电镜观察神经超微结构,Calcein-AM/PI双染色激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察神经生物活性,Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达。用保存后的大鼠坐骨神经修复对应Wistar雄性大鼠(A′、B′、C′、D′组)坐骨神经10 mm缺损,术后分期观察大鼠一般情况、坐骨神经功能指数(SFI),第16周行电生理检测,再生神经组织学观察。结果透射电镜观察,A、B、C、D组均存在不同程度的脱髓鞘改变,但B、C、D组轻于A组;LSCM观察,B、C、D组绿色荧光较强,红色荧光较弱,A组绿色荧光较弱,红色荧光最广;Bcl-2和Bax蛋白表达,B、C、D组与A组间,C、D组与B组间差异显著(P0.05),C、D组间差异不显著(P0.05)。移植术后各期SFI,术后16周后电生理、再生神经有髓纤维数及髓鞘厚度,均显示C′、D′组与A′、B′组间差异显著(P0.05),但A′、B′组间及C′、D′组间差异不显著(P0.05)。术后16周再生神经超微结构,A′、B′组有髓神经纤维数较少、直径较细,分布稀疏,髓鞘较薄;C′、D′组再生有髓神经纤维数量较多,分布广泛、髓鞘较厚。结论参附注射液能提高大鼠坐骨神经玻璃化保存效果,促进异体移植后受体神经再生。     

p16INK4a/Ki67免疫细胞化学双染在检出宫颈癌及癌前病变中的作用

目的: 探讨p16INK4a/Ki67免疫细胞化学双染在检出宫颈癌及癌前病变中的作用。方法 : 选择妇科门诊就诊妇女131名,平均年龄（39±10.73）岁,进行p16INK4a/Ki67免疫细胞化学双染检测、宫颈细胞学检查和高危型HPV检测。p16INK4a/Ki67双染采用CINtec PLUS细胞学试剂盒方法,宫颈细胞学应用Thinprep或surepath液基薄片的方法,高危型HPV检测采用Cobas 4800检测系统。结果: p16INK4a/Ki67免疫细胞化学双染检出CIN2及以上病变的灵敏度为92.8%,特异度为58.8%,AUC为0.773,高于细胞学检查（82.5%,44.1%,0.633）;其特异度及AUC也明显高于高危型HPV检测（17.6%,0.562）,差异有统计学意义（P＜0.05）。p16INK4a/Ki67免疫细胞化学双染联合细胞学检查漏诊率最低。结论: p16INK4a/Ki67双染检测具有更高的灵敏性及特异性,降低了宫颈高级别鳞状上皮病变的漏诊率及过度诊断,有助于提高宫颈癌的检出率。     

鹿茸中神经节苷脂的成分研究

目的分离鉴定鹿茸中神经节苷脂的成分.方法Folsh分配、DEAE-Cellulose柱层析分离、薄层色谱方法鉴定.结果分离鉴定出3种组分(A、B、C),与对照品薄层图谱对照,鉴定了A为GM4,B为GM3,C为GD3,A、B、C的百分含量分别为24.4%、46.2%、29.4%.结论首次从鹿茸中分离出GM4,GM3,GD33种神经节苷脂成分.     

HIP-55抑制异丙基肾上腺素诱导的心脏成纤维细胞ROS产生

目的研究HIP-55在β-肾上腺素受体激动剂异丙基肾上腺素(Isoproterenol hydrochloride,ISO)诱导心脏成纤维细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生中的作用。方法分离培养乳大鼠心脏成纤维细胞,利用HIP-55腺病毒和HIP-55-shRNA腺病毒感染乳大鼠心脏成纤维细胞,获得过表达HIP-55或敲减HIP-55的心脏成纤维细胞。ISO刺激后,采用红色荧光探针dihydroethidium(DHE)以及绿色荧光探针二氯荧光黄双乙酸钠(2’,7’-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)的方法检测细胞ROS的产生量。结果过表达HIP-55明显的抑制心脏成纤维细胞ROS的产生,相反敲减HIP-55明显促进心脏成纤维细胞ROS的产生。结论 HIP-55明显抑制ISO诱导的乳大鼠成纤维细胞的ROS的产生。     

健脑灵口服液提取工艺研究

健脑灵口服液主要由淫羊藿、益智、甘草等中药组成 ,具有补肾扶阳、益精生髓、健脑益智 ,主要用于记忆减退、智力障碍、老年性痴呆。实验发现本方提取工艺对疗效影响显著 ,本处方中大多数有效成分为水溶性成分 ,故工艺上采用水煎煮法 ,采用正交设计试验 ,以淫羊藿中有效成分淫羊藿苷含量为考核指标 ,对水煎煮法提取工艺进行了优选。同时 ,对益智中挥发油的提取及乙醇沉淀的浓度进行了考察。1　仪器、试剂与药品岛津 LC- 1 0 AT高效液相色谱仪 (日本 ) ;CLASS- LC1 0色谱工作站 ,甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。淫羊藿苷对照品购自…     

HIV复合多表位DNA疫苗的设计及免疫研究

目的　设计新型HIV复合多表位DNA疫苗 ,探讨其在小鼠体内的免疫应答。方法以HIV抗原表位为基础进行新型HIV多表位DNA疫苗的抗原分子设计 ,利用化学合成的方法合成全新HIV抗原基因 ,并构建核酸疫苗重组质粒 ,免疫BALB c小鼠 ,利用合成的表位肽进行抗体水平、特异性淋巴细胞增殖实验、特异性CTL检测分析及迟发性超敏反应。同时 ,还对所设计的HIV复合多表位DNA疫苗与编码HIV全结构蛋白的DNA疫苗 (pVAXI gag gp12 0 )进行特异性CTL反应的比较研究。结果　所设计的新型HIV多表位DNA疫苗可在BALB c小鼠体内诱导出针对所选表位的强表位特异性的CTL反应和抗体反应。而HIV复合多表位DNA疫苗与编码HIV全结构蛋白的DNA疫苗相比可诱导产生更强、更广泛的表位特异性的CTL应答。结论　所设计的HIV复合多表位DNA疫苗对BALB c小鼠具有良好的体液和细胞免疫原性