神经激肽A在大鼠回肠发育中的定位定量分析

目的探讨神经激肽A(NKA)在大鼠回肠发育中的表达及变化。方法应用免疫组织化学PAP法和图像分析系统研究大鼠胚胎13d至成年回肠中NKA的表达。结果1．在回肠,首先于胚胎17d的肌间神经丛处出现NKA-IR的表达,随发育相继出现在纵肌层、环肌层、绒毛、小肠腺周、黏膜下层、深肌丛,生后30d已具备成年组的分布特征;2．定量分析中数据的变化与NKA-IR在回肠各层阳性强弱的变化一致;3．NKA-IR细胞具有典型的肠道内分泌细胞的形态特征和分布特征。结论1．NKA在回肠的发生发育主要在生前1周～生后4周内(但绒毛内神经纤维的密度于60d时才达成年水平);2．NKA在回肠的发生发育有两个关键时期,即生前1周～生后1周和生后1月末;3．NKA-IR细胞可能是肠道内分泌NKA的内分泌细胞;4．NKA对大鼠回肠的发育具有重要的作用,可能与回肠功能的建立密切相关。     

直肠癌组织中proNGF凋亡前信号的研究

目的：探讨proNGF凋亡前信号在直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法：采用RT-PCR及Western blot技术检测直肠癌组织中proNGF凋亡前信号各因子proNGF、Sortilin、p75的表达,以1 2例瘤周正常组织为对照.结果：proNGF、Sortilin、p75 mRNA在直肠癌组织中的表达分别为031±0.03、0.35±0.07、0.41±0.08,在正常组织中高表达,分别为0.79±0.06、0.73±0.10、0.84±0.11,2组之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;proNGF、Sortilin、p75蛋白在直肠癌组织中的表达分别为052±0.05、0.31±0.04、0.41±0.09,在正常组织中分别为0.83±0.16、0.53±0.08、0.72±0.12,正常组织亦明显高于直肠癌组织（P＜0.05）.结论：proNGF凋亡前信号所导致的细胞凋亡信号参与了直肠癌的发生、发展过程,其较低的表达可能是导致直肠癌的一种内在机制.     

脊髓全横断大鼠模型的构建

背景：脊髓全横断模型在造模时常难以保证神经纤维的完全离断。目的：构建大鼠脊髓全横断损伤模型。方法：将大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组构建脊髓T10节段全横断模型;假手术组动物仅打开椎管与硬脊膜而后缝合,但不损伤脊髓。建模后1,3,5,7d分别进行BBB评分以评估后肢运动功能,检测其体感诱发电位和运动诱发电位来评估神经传导通路的完整性,并行形态学观察来评估脊髓肉眼观病理形态。结果与结论：与假手术组相比,模型组大鼠在建模后1,3,5,7d时,其BBB评分降低（P〈0.01）,未检测出体感和运动诱发电位。形态学观察结果显示模型组大鼠脊髓完全横断,而假手术组脊髓形态完整。结果提示实验成功构建了大鼠脊髓全横断模型。     

脑源性神经营养因子转基因成纤维细胞的构建与检测

目的:构建大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰的成纤维细胞(fibroblasts FBs).方法:真核表达载体pcDNA3/BDNF由昆明医学院神经科学研究所提供.FBs取自胎鼠.pcDNA3/BDNF重组质粒载体以阳离子脂质体Lipofect...     

三七总皂苷对SAM-P/8小鼠海马中衰老相关基因表达的影响

目的探讨三七总皂苷对SAM-P/8小鼠海马中10个衰老相关基因表达的影响。方法采用RT-PCR技术检测10个衰老相关基因在各组小鼠海马中的表达及变化情况。结果各基因在海马中均有表达,成年三七组与成年对照组比较,SCN2B表达显著增加;老年三七组与老年对照组比较,MAP2、Sortilin-1、Rab6A、Calcineurin-B和MAPKK4的表达减少;MAP1B、Calmodulin-1、Regucalcin和RAP2A基因的表达在各组之间比较均没有变化。结论三七总皂苷可能通过调节部分衰老相关基因的表达来发挥其抗衰老的作用,但早期的预防比晚期治疗更加重要。     

维甲酸治疗SD大鼠急性早幼粒细胞白血病孕鼠的实验研究

目的探讨孕妇患急性早幼粒细胞白血病时全反式维甲酸（RA）治疗的安全剂量及时间点.方法 SD大鼠妊娠第8、11、14天胃饲不同浓度（20～140 mg/kg）RA,至18 d取出胚鼠观察,统计正常胚胎、畸胎、死胎或吸收胎数.结果第8天使用小量RA时胚胎正常率仅为15.79%（20 mg/kg）;第11天使用大量RA时畸死胎率分别为100%（140 mg/kg）和95.12%（110 mg/kg）;中小量时畸死胎率降至52.63%（50 mg/kg）和63.16%（20 mg/kg）;第14天使用RA各剂量致畸、致死率大幅减小,最大量时仅为38.46%（140 mg/kg）.结论 RA对神经管闭合由早期至中期、由大剂量至小剂量影响逐渐减弱,可为临床用药提供依据.     

关于定量PCR技术中模板使用浓度的研究

目的研究定量PCR模板使用浓度对产物量的影响,对如何改善定量PCR技术进行一些探讨.方法分别用1×浓度和1/10×浓度逆转录产物(cDNA)进行递增量的梯度PCR反应(0.5μL、1μL、2μL、4μL),观察其不同量之间变化的灵敏性;进一步增大样本量,来观察这两个浓度级别分辨两倍量差距(1μL和2μL)的能力.结果在梯度实验中,1/10×浓度的模板表现出了明显的线性关系(R2=0.9105),即产物量随模板使用量的增加而增加,而1X浓度的模板却没有表现出来(R2=0.2488).此外,1/10×浓度的模板有效的区分出了两倍量的差距(1μL组和2μL组之间,t=3.329,P<0.05)而1x浓度的模板却没有.结论进行定量PCR时,不同的模板浓度对PCR产物量有一定影响的;选择适当的模板浓度是十分必要.     

不同发育阶段人胚胎脊髓中细胞凋亡的表达及变化

目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中细胞凋亡的变化趋势.方法:采用TUNEL法标记检测从3周至8个月不同胚胎龄段脊髓细胞凋亡的变化规律.结果:3周在神经管上皮即可见到密集的凋亡细胞,5、6周基板、翼板形成后即可在其内见到凋亡细胞,而边缘层内的凋亡细胞出现时间较其他部位晚,9周才可见到,中央管神经上皮的凋亡细胞高峰出现时间较早,5～6周达高峰,3个月后趋于稳定,而腹角内凋亡细胞高峰出现时间在6周,背角内凋亡细胞高峰出现时间为11周,其后随着脊髓的发育,凋亡逐渐减少.结论:脊髓不同部位细胞凋亡出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位凋亡并不同步.     

视网膜神经节细胞轴突再生相关神经胶质酸性蛋白和生长相关蛋白-43基因研究

目的 探索视神经移植后,再生的视网膜神经节细胞中基因表达的变化.方法 将39只Listed Hooded大鼠分为正常对照组、神经截断组和截断+移植组.采用外周神经缝接模型,用免疫组化技术检测GFAP、GAP-43在各组不同时期表达的变化.通过采用RT-PCR技术检测大鼠视网膜中13个基因的mRNA浓度的变化,使用ANOVA进行统计比较.结果 视网膜切片显示了神经截断组GFAP有明显的表达上调;截断+移植组的GFAP表达下调,GAP-43在不同时点在GCL出现不同程度的表达上调.Real-time PCR结果,5d后,视网膜中的GFAP、GAP-43表达在截断组和截断+移植组与对照组相比有显著的增加.在其后的时点,GAP-43的表达在两个实验组都比对照组有显著降低.结论 再生的视网膜可能调节GFAP合成.再生的RGCs表达GAP-43.GAP-43上调的结果为神经再生提供了依据.     

pcDNA3/BDNF真核表达载体的构建

背景：脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用广泛,但属于生物大分子,不能通过血脑屏障。基因治疗是目前解决脑源性神经营养因子给药途径最有希望的方案。 目的：拟构建大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体。 方法：采用反转录聚合酶链式反应技术从SD大鼠脑组织提取总RNA,扩增脑源性神经营养因子基因cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,分别取10 g质粒pcDNA3和纯化的目的基因分别进行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ双酶切。将目的基因片段和pcDNA3载体连接,转入感受态DH5α细胞中,经酶切鉴定后送上海博亚生物技术有限公司测序。 结果与结论：RT-PCR产物为749 bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/BDNF酶切后产生 749 bp和5 446 bp的片段,DNA测序证实749 bp片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/BDNF重组质粒。