敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能

 目的: 探讨ClC-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对ClC-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法: 采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z) IK1 基因的表达;real-time PCR技术检测ClC-3 mRNA的表达;Western blot检测ClC-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测ClC-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果: IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后, ClC-3的mRNA表达上调而ClC-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论: 敲低IK1钾离子通道可抑制ClC-3氯离子通道的表达和功能。     

肾病综合征患者肾活检组织的透射电镜病理学研究

目的:探讨电镜检查在肾病综合征(NS)肾活检病理诊断中的作用。方法:对403例NS患者的肾活检组织进行透射电镜检查,分析电镜结果对最终诊断的意义。结果:"电镜对诊断起决定性作用"144例(35.7%),"电镜对诊断具有重要价值"77例(19.1%),"电镜对诊断非必需"182例(45.2%)。NS组中"电镜有诊断价值"("决定性作用"+"重要价值")的比例高于非NS组(NS∶非NS=54.8%∶32.2%,P<0.01)。"电镜有诊断价值"的比例因NS的病因、年龄和性别的不同存在组间差异,P<0.01(原发性NS∶继发性NS=77.4%∶7.5%;年龄<20岁组∶20岁～40岁组∶≥60岁组=74.4%∶52.1%∶45.8%;男∶女=68.0%∶42.2%)。结论:电镜检查对NS的正确病理诊断具有重要的意义。NS肾活检确诊对电镜的依赖程度受患者性别、年龄及病因等因素的影响。     

人急性淋巴细胞白血病细胞容积激活性氯电流的研究

目的: 研究人急性淋巴细胞白血病细胞系(Molt4细胞)容积激活性氯电流。方法: 采用膜片钳全细胞方式记录细胞外低渗液(160 mOsmol/L)激活的Molt4细胞容积激活性氯电流,分析该电流的特性。结果: Molt4细胞在等渗溶液中背景电流较小且稳定,低渗溶液诱导激活容积激活性氯电流,该电流呈现较明显的外向优势,在钳制电压0 mV~±120 mV及脉冲波宽200 ms条件下,没有观察到明显的电压依赖性失活和时间依赖性失活。该电流具有容积敏感性,可被细胞外高渗刺激所抑制。氯通道阻断剂他莫昔芬显著抑制容积激活性氯电流, 对内向电流和外向电流的抑制作用无显著差异。结论: Molt4细胞膜存在容积敏感性氯通道;低渗刺激可激活该通道产生容积激活性氯电流;该通道对氯通道阻断剂他莫昔芬敏感。     

低氧-复氧对人鼻咽癌细胞增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响

目的: 研究细胞外微环境低氧-复氧对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响。方法: 以混合气体(5% CO₂, 95% N₂, O₂<0.1%)置换法建立体外低氧培养模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期分布;同质黏附实验和细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果: (1) 低氧24 h后抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),复氧后细胞快速增殖,在复氧第5 d A值与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(2) 低氧24 h后细胞阻滞于G₁期(P<0.01),复氧后G₁期阻滞得到快速解除,在复氧24 h细胞周期分布与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)低氧24 h后细胞的同质黏附能力下降(P<0.01)而细胞-基质黏附能力无明显改变(P>0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01);复氧24 h细胞同质黏附能力恢复至常氧对照组水平(P>0.05),而细胞-基质黏附能力(P<0.01)和细胞侵袭能力较常氧对照组显著增加(P<0.01)。结论: 鼻咽癌细胞能耐受微环境低氧的不利影响;低氧环境下存活的鼻咽癌细胞产生的适应性变化赋予肿瘤更强的增殖和转移潜能,从而促进肿瘤细胞的恶性演进。     

Cl-在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中的作用

目的:研究鼻咽癌细胞的调节性容积回缩(RVD)及Cl^-在其中所起的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)在细胞外低渗刺激时的细胞容积改变,用离子置换法和通道阻断法阐明Cl^-在RVD中所起的作用。结果:细胞外低渗刺激使细胞膨胀并诱发RVD。在160-230mOsmol/L范围内,RVD与细胞膨胀程度正相关。用葡萄糖酸取代灌流液Cl^-时RVD增强,细胞内Cl^-耗竭时RVD消失。氯通道阻断剂阻抑RVD,但不同的阻断剂对RVD的阻抑率有明显差异。结论:Cl^-是CNE-2Z细胞RVD的关键离子,Cl^-通道激活,Cl^-外流是RVD的主要机制。     

湖北省远安县实施世行贷款和英国赠款结核病控制项目7年效果分析

湖北省远安县于2002年1月在全县7个乡镇全面启动实施世界银行贷款和英国政府赠款结核病控制项目(简称“项目”),项目经费主要依靠世行贷款、地方配套和中央结防经费。7年来利用项目贷款资金19.01万元,县财政投入配套经费3285万元,中央和省级下拨结防经费43.26万元,总投资95.12万元,用于肺结核患者的发现和治疗管理。项目采用当前世界先进的结核病控制策略和措施,严格按照《中国结核病防治规划实施工作指南》的要求发现和治疗管理肺结核患者,现将实施情况报告如下。     

氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。     

灵芝孢子粉对抗亚急性酒精性肝损伤的实验研究

目的研究灵芝孢子粉对小鼠亚急性酒精性肝损伤的干预作用。方法用56%(V/V)北京二锅头白酒灌胃方法建立小鼠亚急性酒精性肝损伤模型,用灵芝孢子粉进行干预,连续灌胃14 d,然后检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,并进行肝脏病理学检查。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清ALT和AST活性显著增加,肝脏呈弥漫的脂肪样变性和炎症性变化。而灵芝孢子粉+酒精组小鼠血清ALT和AST活性与模型组相比显著降低,肝脏病理学改变仅呈局灶性脂肪样变性。结论灵芝孢子粉对小鼠酒精性肝损伤有明显的保护作用。     

丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞氯通道的激活作用

目的研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性。方法采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的CNE-2Z细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性。结果细胞外灌流1nmol.L-1的丹参酮ⅡA激活CNE-2Z细胞产生一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的电压依赖性和时间依赖性的失活,电流的翻转电位为(-5.9±0.2)mV,接近氯离子平衡电位。渗透性容积缩小可以完全抑制该电流,氯通道阻断剂NPPB可以部分抑制该电流。结论丹参酮ⅡA激活鼻咽癌细胞膜上的氯通道,诱导氯电流,该电流具有容积敏感性。     

氯通道在华蟾酥毒基诱导的鼻咽癌细胞凋亡中起重要作用

目的: 研究氯离子通道在华蟾酥毒基(CBG)诱导低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡和凋亡性容积减小中的作用。方法: 实验设立空白对照组、CBG高、中、低剂量组及CBG与氯通道阻断剂NPPB 联合作用组。Hoechst 33342染色检测细胞的凋亡率,活细胞图像分析法检测细胞容积变化,全细胞膜片钳法记录氯电流。结果: (1)CBG浓度依赖性诱导鼻咽癌细胞凋亡,高剂量CBG(8 μmol/L)诱导的细胞凋亡率为43.2％;(2)CBG可诱导细胞产生凋亡性容积减小,在CBG作用早期(50 min),细胞容积减小约9.9％。(3)CBG可激活氯通道,产生一个无明显外向优势的氯电流。(4)氯通道阻断剂NPPB可抑制CBG诱导的细胞凋亡、凋亡性细胞容积减小和氯电流。NPPB对CBG诱导的细胞凋亡和凋亡性容积减小的抑制率分别达80.1％和74.8％。结论: 以上结果提示CBG可能通过激活氯通道而诱导细胞凋亡,氯通道的激活可能在CBG抗肿瘤机制中起重要作用。