乳腺癌细胞的容积敏感性氯电流

 目的: 探讨乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中的容积敏感性氯电流及其生理学和药理学特性。方法: 采用全细胞膜片钳记录模式,在等渗条件下记录MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的背景氯电流;在细胞外灌流47%低渗灌流液使细胞肿胀或灌流47%高渗灌流液使细胞皱缩时,记录氯电流的变化;加入氯通道阻断剂NPPB(100 μmol/L)或Tamoxifen(20 μmol/L)记录容积敏感性氯电流的改变,分析该电流的特性。结果: (1)等渗条件下,记录到MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞的背景氯电流有显著差异;(2)胞外低渗诱导细胞肿胀时,可以激活MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞容积敏感性氯电流;(3)胞外高渗诱导细胞皱缩时,抑制了低渗激活的容积敏感性氯电流;(4)低渗激活的容积敏感性氯电流能被氯通道阻断剂NPPB抑制;(5)雌激素受体(estrogen receptor,ER)调节剂,同时也是氯通道阻断剂的Tamoxifen也能抑制低渗激活的容积敏感性氯电流。结论: MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均可以记录到容积敏感性氯电流,高渗状态及使用氯通道阻断剂可抑制该氯电流。     

ClC-3基因过表达对小鼠骨量和骨结构的影响

 目的: 研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法: 3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene)组,每组各8只。分别测量2组小鼠体重,右侧胫骨长度和重量。取胫骨上段和中段进行脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色后,采用骨形态计量学分析胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁宽度(trabecular width,Tb.Wi)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和胫骨中段皮质骨的骨组织总面积(total tissue area,T.Ar)、皮质骨面积(cortical area,Ct.Ar)、皮质骨面积百分数(percent cortical area,%Ct.Ar)、骨髓腔面积(marrow area,Ma.Ar)、骨髓腔面积百分数(percent marrow area,%Ma.Ar)。结果: 小鼠经鼠尾基因检测后确认为野生型或ClC-3过表达型。与WT组相比,ClC-3 transgene组小鼠体重及胫骨长度重量均减小(P<0.05);松质骨的%Tb.Ar和Tb.Wi均减小(P<0.05),Tb.Sp增大(P<0.05),Tb.N的变化无统计学意义;皮质骨的T.Ar、Ct.Ar和%Ct.Ar均减小(P<0.05),%Ma.Ar增大(P<0.05),Ma.Ar的变化无统计学意义。结论: ClC-3过表达导致小鼠的皮质骨和松质骨骨量减少,骨结构变差,提示ClC-3可能参与了骨形成和/或骨吸收。     

ClC-3氯通道蛋白磷酸化及其功能的研究进展

细胞容积调节广泛参与细胞的各种生理病理过程,如上皮细胞物质转运、物质代谢、细胞兴奋性、激素释放、细胞迁移、细胞增殖及细胞坏死凋亡等[1, 2].在低渗环境刺激下,容积激活性氯通道参与细胞容积调节,对维持细胞容积起着重要调节作用.     

低氧对人鼻咽癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物系统表达的影响

[摘要] 目的 研究低氧微环境对鼻咽癌细胞（CNE-2Z）尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）系统表达的影响。方法 以混合气体（5% CO2, 95% N2, O2<0.1%）置换法处理24 h,建立CNE-2Z细胞体外低氧培养模型。RT-PCR检测PAI-1、u-PA、u-PAR在CNE-2Z细胞的mRNA表达;酶联吸附法（ELISA）测定PAI-1和u-PA蛋白表达;细胞免疫化学方法检测u-PAR蛋白表达。结果 低氧处理后,CNE-2Z细胞u-PA系统中PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.05）;细胞裂解液中u-PA蛋白含量降低（P<0.001）,但u-PA mRNA含量无显著变化（P＞0.05）;而对u-PAR mRNA和蛋白表达均无显著影响（P＞0.05）。结论 低氧能影响人鼻咽癌细胞CNE-2Z u-PA系统的表达,主要表现为上调PAI-1的表达,并可能通过促进u-PA/u-PAR复合体内吞降解的机制降低u-PA蛋白表达,但对u-PAR的表达不产生显著影响。低氧可能通过影响u-PA系统的表达而改变CNE-2Z细胞的侵袭转移能力。     

藏药二十一味寒水石丸的定性鉴别

目的:建立藏药二十一味寒水石丸的定性鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中诃子、藏木香、木香和牛黄进行了薄层色谱鉴别。结果:在薄层色谱中均能检测出诃子、木香、藏木香、牛黄四味药材,薄层色谱斑点清晰,阴性对照品溶液无干扰。结论:本文所建立的方法灵敏、可靠,专属性强,可为二十一味寒水石丸的质量控制提供一定的依据。     

基于大学生创新性实验计划的药理学探索性实验教学模式改革

药理学探索性实验与国家大学生创新性实验计划的目的一致,是“大学生科技创新工程”的重要扩展.文章就5年来我系对临床医学专业本科生开设的探索性实验教学改革的具体内容、组织实施、评价体系及教学效果进行分析,探讨药理学探索性实验在培养医学生发现、分析和解决问题的能力和提升医学生的综合素质方面所发挥的作用.     

低渗诱导高分化鼻咽癌细胞CNE-1容积激活性氯电流

目的： 研究细胞外低渗诱导的高分化鼻咽癌细胞CNE-1的容积激活性氯电流。方法：全细胞膜片钳记录氯电流,通过应用氯通道阻断剂、离子置换和改变细胞容积方法研究该电流的特性。结果：当细胞在等渗环境中背景电流微弱且稳定,细胞外给予47%低渗刺激后电流迅速增大,呈外向优势,对阴离子通透性的大小为：I->Br->Cl->葡萄糖酸。氯通道阻断剂ATP和NPPB可逆性地抑制此电流,ATP的抑制作用在外向电流显著强于内向电流。此电流对细胞容积改变敏感,细胞肿胀时被激活,细胞发生皱缩时则被抑制。结论：细胞外低渗诱导CNE-1 细胞产生氯电流,此电流对细胞容积的改变敏感,在CNE-1细胞容积调节中起重要作用。     

低分化鼻咽癌细胞的自发氯电流特性

目的：研究自发的低分化鼻咽癌细胞（ CNE-2Z）氯电流特征。方法采用全细胞膜片钳记录自发的CNE-2Z细胞氯电流,通过去除电极内液中的ATP、细胞外灌流氯离子通道阻断剂或高渗液等方法观察并分析电流的特性。结果细胞处于等渗环境中可自发激活一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的时间依赖性失活,电流的翻转电位为（-7．6±0．9） mV,接近氯离子平衡电位（-0．9 mV）。该电流的激活依赖于细胞内ATP。氯通道阻断剂ATP可抑制该电流,且其对外向电流的抑制作用大于内向电流。细胞外灌流高渗液对该电流有明显抑制作用。结论 CNE-2Z细胞处于等渗环境中可自发激活一个电流特征与容积敏感性氯通道相似的氯通道。     

藏药二十一味寒水石丸中5个成分的测定

目的建立二十一味寒水石丸(寒水石、木香、牛黄、藏木香等)中木香烃内酯、去氢木香内酯、胆酸、土木香内酯和异土木香内酯的RP-HPLC测定方法。方法二十一味寒水石丸甲醇提取液的测定在迪马Diamonsil-2 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行,流动相分别为乙腈-水(65∶35)、甲醇-0.1%醋酸溶液(75∶25)和乙腈-0.1%磷酸水(52∶48);体积流量分别为1.0、0.8、1.0 m L/min;柱温均为30℃;其中木香烃内酯和去氢木香内酯检测使用二极管阵列检测器,检测波长225 nm;胆酸检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度90℃,氮气体积流量为1.6 L/min;土木香内酯和异土木香内酯的检测波长为220 nm。结果木香烃内酯、去氢木香内酯、胆酸、土木香内酯和异土木香内酯线性范围分别为0.043 5⁰.435μg(r=0.999 8)、0.0450.435μg(r=0.999 8)、0.045⁰.45μg(r=0.999 9)、0.506 50.45μg(r=0.999 9)、0.506 5².533μg(r=0.999 9)、0.642.533μg(r=0.999 9)、0.64².4μg(r=0.999 3)、0.642.4μg(r=0.999 3)、0.64².4μg(r=0.999 9);平均回收率分别为99.5%、99.7%、99.8%、99.3%、99.6%;RSD分别为0.8%、0.9%、1.3%、0.7%、1.1%(n=9)。结论本方法可用于二十一味寒水石丸中5个成分的定量测定。     

人急性淋巴细胞白血病细胞容积激活性氯电流的研究

目的: 研究人急性淋巴细胞白血病细胞系(Molt4细胞)容积激活性氯电流。方法: 采用膜片钳全细胞方式记录细胞外低渗液(160 mOsmol/L)激活的Molt4细胞容积激活性氯电流,分析该电流的特性。结果: Molt4细胞在等渗溶液中背景电流较小且稳定,低渗溶液诱导激活容积激活性氯电流,该电流呈现较明显的外向优势,在钳制电压0 mV~±120 mV及脉冲波宽200 ms条件下,没有观察到明显的电压依赖性失活和时间依赖性失活。该电流具有容积敏感性,可被细胞外高渗刺激所抑制。氯通道阻断剂他莫昔芬显著抑制容积激活性氯电流, 对内向电流和外向电流的抑制作用无显著差异。结论: Molt4细胞膜存在容积敏感性氯通道;低渗刺激可激活该通道产生容积激活性氯电流;该通道对氯通道阻断剂他莫昔芬敏感。