狂犬病毒核蛋白基因的克隆及表达

目的获得狂犬病毒CVS株核蛋白(N)基因并在大肠杆菌中表达,为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供抗原。方法RT-PCR扩增狂犬病毒CVS株核蛋白测序、并定向克隆入原核表达载体pET-28a,构建原核重组表达质粒pET-28a-N,转化大肠杆菌E.coliBL21,并经IPTG诱导在大肠杆菌中表达CVS株核蛋白。结果与结论扩增的CVS株N基因与发表的CVS株N基因序列完全一致,并在大肠杆菌中得到了高效表达,且表达产物具有免疫反应性,为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供了抗原。     

静脉输液教学训练的安全性研究

目的采用多人使用同一副输液器反复更换针头的方法进行输液训练并验证其安全性。方法按培养标本法采集输液前液体并将其作为对照组,采集输液后液体并将其作为实验组,对二者进行微生物学和细胞学定性检验,判断输液管中有无细菌和组织液污染,从而验证其训练方式是否安全、可靠。结果2项检查结果均为阴性。结论采用多人使用同一副输液器反复更换针头的方法进行静脉输液训练安全、可行,既能充分满足学生静脉穿刺练习的需要,又能减少实验消耗,不失为一种高效低耗的好方法。     

流行性出血热病毒的化学裂解和自融现象的观察

通过EHFV化学裂解和自融现象的研究,揭示乙醚所致的化学裂解属纵深裂解而非浅表式的剥离,因此不管分子大小、是峰形还是非峰形所在处管均具有不同程度的血凝素抗原活性;而在自融现象研究中,意外地发现,在4℃这个特定环境温度中,无牛血清病毒液内的病毒颗粒会自发地不断脱落大量包膜蛋白(主要由血凝素抗原加上极小量核衣壳蛋白组成),从而为制造EHFV亚单位提供了最廉价的简易手段.这种不受约束的外膜脱落现象可能是诱发、推动病毒变异的一种主要力量.     

浙江省蚊虫中乙型脑炎病毒的分离及鉴定

目的 对2007年浙江省采集的蚊虫标本进行病毒分离与鉴定.方法 2007年在浙江省采集蚊虫标本,用金黄地鼠肾细胞(BHK-21)分离病毒,对新分离的病毒进行血清学和分子生物学鉴定.结果 采集到4735只蚊虫,分离到2株致BHK-21细胞病变的病毒,经免疫荧光和RT-PCR试验鉴定为乙型脑炎病毒(JEV),利用病毒PrM区段进行基因分型分析,新分离的2株病毒属于基因Ⅰ型JEV.对这2株病毒的E基因区段进行分析,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.8%.与疫苗株SA14-14-2相比,核苷酸同源性在87.7%,氨基酸同源性在96.4%以上,共有14个共同的氨基酸位点差异.结论 在浙江省采集的蚊虫标本中分离到2株病毒,经鉴定为基因Ⅰ型JEV,是浙江省近年来首次分离.     

《药剂学》多媒体教学课件的设计与制作

目的 制作一套适用于药学类专业本、专科药剂学教学的多媒体教学课件.方法 利用计算机软件制作多媒体教学课件,采用生产现场实地拍摄设备的外观和结构,以动画演示设备的工作原理,以录像展示生产情景.融图、文、声、像、动画于一体.结果 制作完成的多媒体课件,可对药剂学教学中常用实验技术进行生动形象的动画讲解和操作演示.结论 利用多媒体课件进行辅助课堂教学和指导实践教学能有效提高教学质量.     

LC—MS／MS测定裂解流感疫苗中的去氧胆酸残留量

目的:建立流感疫苗中去氧胆酸残留量的LC-MS/MS测定方法。方法:采用液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱仪,多离子反应监测(MRM)定量法。用胆酸作内标,通过对试样净化预处理、色谱条件、质谱参数等的优化选择和方法回收率、精密度等的验证,建立了定量测定流感疫苗中去氧胆酸残留的理想方法。结果:方法检出限为0.005mg·L~(-1),定量限为0.010mg·L~(-1),在0.005～1.00mg·L~(-1)线性范围内,相关系数r为0.9998,回收率大于98.0%,方法精密度RSD小于4.0%(n=6)。结论:采用液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱仪,可快速测定流感疫苗中的去氧胆酸,结果准确可靠,重复性好,灵敏度高,建立的方法可以准确测定流感疫苗中去氧胆酸的残留量。     

人用H5N1禽流感疫苗检定评价

目的选用H5N1禽流感毒种（R1194和R1203）,按设计的生产工艺,制成的疫苗进行全面检定,选取其中较好毒株生产的疫苗,用于以后人用禽流感疫苗临床前研究的动物免疫。方法利用从国外引进2株H5N1禽流感病毒,设计生产3种疫苗（全病毒、裂解-1、裂解-2）的纯化工艺,优化纯化条件,全面检定制成的疫苗,比较2毒种生产疫苗的质量。结果2毒株在接种滴度104EID50/ml（半数鸡胚感染剂量/ml）,培养温度34.5℃,培养时间3 d的条件下,病毒增殖滴度较高;检定结果证明,制成的所有疫苗中反映质量的内毒素、卵清蛋白、总蛋白、总蛋白与血凝素之比这4项指标,明显优于国家标准;3种工艺疫苗的电镜形态完全不同;经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,全病毒疫苗和裂解-2疫苗的蛋白条带形态相似,但裂解-1疫苗在32 KD左右的条带缺失;毒种R1203株疫苗的产量明显高于R1194株。结论设计的3种生产疫苗的纯化工艺,均可生产出高质量的疫苗;毒种R1203株的疫苗产量高于毒种R1194株;可用R1203毒株,按3种不同工艺生产的疫苗接种动物,观察免疫效果。     

用升温培养法分离污水和粪便中沙门氏菌属

为了从污水、粪便或可疑食物中快速检出沙门氏菌属,一些学者曾提出良好的选择培养基。1953年Harvey等报告升温培养能提高粪便中沙门氏菌属的检出率。1966年Spino报告41.5℃培养可提高地面水中沙门氏菌属的检出率。1969年Morahan等采用41℃培养从河水中检出10种不同血清型的沙门氏茵。本文比较了37℃和41℃两种培养温度对检出污水和粪便中沙门氏菌的效果。     

汉坦病毒中国疫苗株Z10核蛋白免疫原性的研究

汉坦病毒株Ｚ10是浙江省卫生防疫站出血热重点实验室于 80年代分离成功 ,具有血凝滴度高、抗原性强等特点[1] ,后用作生产肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)Ⅰ型和双价疫苗的毒株 ,用该病毒株生产的疫苗接种疫区人群 ,经现场流行病学考核 ,保护率在 95 %以上 ,具有很好的防病效果[2 ] 。为研究Ｚ10株核蛋白的生物学特性 ,我们将Ｚ10株核蛋白基因插入到原核表达质粒 ｐＥＴ2 8ａ,构建成重组表达质粒 ,转化大肠杆菌ＢＬ2 1(ＤＥ3) ,进行核蛋白的表达 ,并将表达产物免疫家兔 ,研究其免疫原性 ,为进一步研究基因工程疫苗打下基础。一、材料与方法1.材料…