汉坦病毒东方田鼠分离株ZT10的分子特性研究

目的 测定从东方田鼠分离到的汉坦病毒ZT10株的全基因序列,了解该株分子基础.方法 提取ZT10病毒总RNA,对L、M、S基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,回收纯化后,将其克隆至pGEM-T载体中,然后进行核苷酸序列的测定及分析.结果 L基因组片段长度为6530个核苷酸,编码2151个氨基酸,与3株Seoul型汉坦病毒的L片段同源性为95.8%～99.7%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低.将推导的ZT10株编码的氨基酸序列与其他汉坦病毒L片段氨基酸序列进行比较.显示ZT10编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域.基因组M片段长度为3651个核苷酸,编码1133个氨基酸.结论 序列分析表明,与Seoul型汉坦病毒的M片段同源性为84.0%～96.3%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低,与从田鼠分离的汉坦病毒(Prospect Hill virus,Tula virus,khabarovsk virus,Isla vista virus)M片段核苷酸同源性仅为57.5%～60.9%.S基因片段与SEO型病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%～96.0%和96.9%～97.9%,与HTN型病毒株76～118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.3%和81.9%,与其他型汉坦病毒的同源均很低.表明ZT10属于SEO型汉坦病毒.     

浙江东方田鼠分离汉坦病毒株S基因的克隆和序列分析

目的对国内首次从东方田鼠分离到的汉坦病毒（HV）ZT10S基因克隆进行序列分析。方法参考GenBank发表的汉坦病毒核蛋白基因序列，设计合成一对引物，提取分离株ZT10细胞培养物的总RNA，对ZT10S基因进行RT-PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，呈现一条约1．7kb的条带，回收纯化后，将其克隆至pGEM．T载体中，然后进行核苷酸序列的测定及分析。结果与4株SEO型病毒（SR-11、R22、Gu03、8610）核苷酸和氨基酸同源性分别为87．9％～96．0％和96．9％～97．9％，与HTN型病毒株76-118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71．3％和81．9％，与其他型汉坦病毒的同源性均很低，表明此分离株ZT10为SEO型汉坦病毒。结论为进一步研究其进化和变异提供了有利条件，也为生产SEO型汉坦病毒特异性核蛋白抗原，免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究奠定了基础。     

流行性出血热发病危险因素病例对照研究

目的 探讨流行性出血热（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ，ＥＨＦ）发病的保护因素。方法 采用１：１配对病例对照研究调查和分析有关的暴露因素。结果 调查了１８５例病例和对照，在单因素Ｘ＾２和多因素ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析中，室内鼠患、农少、外出、人均年收入和住房地面的材料均有统计学意义。在Ｐ〈０．０５显著水平下，室内鼠患、农活、外出、人均年收入和住房地面的ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归系数     

水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验

目的 建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法。方法 用VZV1毒种制备中和抗原，以50pfu左右病毒量加待测血清36℃和1h，接种Vero-E6单层细胞，烛缸法培养10d后，用结晶紫染色，计数pfu；以中和后pfu减少50％的血清最高稀释度为中和抗体滴度。结果 VZV1在Vero-E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形，平均Φ0.85mm，边界清晰；经试验3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度＜1：2，免后分别为1：16、1：31、1：64；5份中和抗体阳性血清经重复测试3次，中和抗体最多相差1个滴度；24份血清同时测定VZV中和、荧光、酶示抗体的GMT比值为1：1．83：46．25。结论 VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好，可用于VZV疫苗免疫效果考核。     

双价肾综合征出血热灭活疫苗加强免疫后中和抗体反应

目的：双价肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）灭活疫苗基础全程３针免后１年半加强１针免疫,观察两型的中和抗体反应水平。方法：对免疫志愿者加强免疫前和免疫后２０d采血,以空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测血清中ＨＦＲＳⅠ型（７６－１１８）和Ⅱ型（ＳＥＯＶ）中和抗体。结果：血学检测加强免疫后Ⅰ型中和抗体滴度ＧＭＴ１：２８．２９,Ⅱ型中和抗体滴度为１：３２．４９,比加强免疫前两型中和抗体滴度高３－１０倍。结论：加强免疫实属必要。     

抽线缝合法在化脓性阑尾炎手术中的应用研究

目的研究抽线缝合法在急性化脓性(包括坏疽及穿孔)阑尾手术切口感染及住院时间的临床意义。方法选取我院2005～2010年化脓性(包括坏疽及穿孔)阑尾炎患者214例,根据入院顺序单双号随机采用抽线缝合法109例,逐层缝合法105例。结果抽线缝合法与逐层缝合法相比切口感染率降低(P<0.05),住院时间明显缩短(P<0.005),差异均有统计学意义。结论抽线缝合法易学易会,基层单位可开展,预防阑尾切口感染有效,不增加甚至减少患者痛苦,减轻患者经济负担,有很高的临床应用价值。     

BNIP3蛋白在缺血性心血管疾病中作用的研究

BNIP3为Bcl-2蛋白家族成员,属于仅含有BH-3结构域的BH3-only亚族。研究发现BNIP3含有的BH3结构域和羧基末端跨膜（TM）区在细胞死亡过程中起重要作用。随着对BNIP3在肿瘤进程中异常表达的研究不断深入,研究人员发现BNIP3在缺血缺氧性心血管疾病中也起到了关键作用,它也参与介导了心肌细胞死亡。现对BNIP3在缺血性心血管疾病方面的作用研究新进展进行综述。     

桐庐县青少年健康危险行为现况的研究

目的了解桐庐县青少年健康危险行为流行现状和特点。方法按浙江省青少年健康危险行为监测方案的实施要求,对桐庐县5所全日制学校(初中、高中和职业高中)1092名在校学生,采用中国青少年健康相关行为调查问卷进行无记名调查。结果19.4%的学生有打架行为;9.5%考虑过自杀,4.8%计划过自杀,1.0%曾采取措施自杀;36.5%想过离家出走,3.2%曾经离家出走;78.1%常感到孤独;44.2%被人恶意取笑;73.7%有失眠现象;严重受伤与扭伤的为12.2%和11.3%;57.8%步行乱穿马路,30.0%骑车带人,7.2%骑车逆行;23.1%到无安全防范措施地方游泳;有吸烟和饮酒史的分别为30.4%和61.9%;5.1%滥用镇静催眠类药物;20.3%希望增加上网时间,10.8%想停止上网不能自控,参加过网络赌博的有42.2%;有22.2%的学生不吃早餐,36.1%的学生存在偏食现象;82.7%的学生缺乏体力活动锻炼;高中阶段学生曾发生性行为的比例为1.4%。结论应该针对青少年危险行为的特点开展综合性干预措施。     

杆状病毒为载体的重组汉坦病毒S基因在Vero—E6细胞中的表达及其生物活性

目的 将汉坦病毒HV Z10株S基因（HV5）插入已含CMV基因的杆状病毒转移载体pDual-CMV,筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS,转化Vero-E6细胞,用于血清汉坦病毒抗体的检测。方法 以pEGFP-N1质粒为模板,通过PCR扩增CMV基因序列,酶切插入杆状病毒转移载体pFastTBacDUAL,构建含CMV的转移载体pDual-CMV。酶切含HV S基因的pMD19-Z10S质粒,插入pDual-CMV,构建pDual-CMV-HVS,转化感受态DH10BAC,筛选并取重组杆状病毒基因,转染TN细胞,筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS。BAC-pDual-CMV-HVS转化Vero-E6细胞,制备抗原片,用于血清中抗汉坦病毒抗体的检测并与传统方法进行比较。结果 经测序成功构建重组杆状病毒转移载体pDual-CMV-HVS,按杆状病毒表达系统操作方法,成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS,转化VeroE6细胞,经汉坦病毒抗体阳性血清检测,HV S基因在细胞中得到表达,与传统方法一致。结论 成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS重组杆状病毒,可用于汉坦病毒抗原片的制备,该抗原片制备方法简便、无需特殊设备,可用汉坦病毒抗体的检测。