精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板GMP-140表达的影响

目的 考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子(ACGN)对血小板GMP-140表达的影响.方法 制备精氨酸修饰的壳聚精(ACS)并朋红外光谱对其进行表征;用共沉降的方法制备精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子,用凝胶电泳阻滞实验对精氨酸修饰壳聚精与DNA的相互作用进行研究;用酶联免疫双抗夹心法测定血小板α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)表达来考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板激活的影响.结果 红外光谱结果显示精氨酸成功地接枝到壳聚糖上,在正负电荷比≥2:1时,ACS能完全阻滞DNA的迁移,表明所有的DNA均已被ACS完全包覆.壳聚糖基因纳米粒子(CGN)和ACGN在体外均不引起血小板的激活,但在体内则都引起轻微血小板激活.结论 精氨酸修饰壳聚糖纳米粒子对血小板GMP-140的表达没有引起明显的变化,有望成为一种新型的、安全的非病毒基因载体.     

载紫杉醇PLGA/F68纳米粒逆转多药耐药用于乳腺癌的治疗

目的载紫杉醇聚乳酸聚羟基乙酸共聚物（PLGA）/F68纳米粒逆转耐紫杉醇人乳腺癌细胞MCF-7/Taxol细胞多药耐药的可行性研究。方法使用超声乳化溶剂挥发法分别制备载紫杉醇PLGA和载紫杉醇PLGA/F68纳米粒（10%）,并对载紫杉醇纳米粒进行表征。载紫杉醇纳米粒的体外释放研究使用高效液相色谱进行分析。最后研究载紫杉醇纳米粒在耐紫杉醇人乳腺癌细胞MCF-7/Taxol细胞的细胞摄取和细胞毒性（PLGA/F68组、PLGA组和泰素组）。结果纳米粒呈球形,表面粗糙多孔,平均粒径250 nm左右,粒径分布比较窄,体外药物释放呈双相释放模型。载紫杉醇PLGA/F68纳米粒能够被耐紫杉醇人乳腺癌细胞MCF-7/Taxol细胞摄取。载紫杉醇PLGA/F68纳米粒比载紫杉醇PLGA纳米粒（P〈0.05）和泰素（TaxolR）（P〈0.05）有更高的细胞毒性。结论载紫杉醇PLGA/F68纳米粒能够逆转耐紫杉醇人乳腺癌细胞MCF-7/Taxol细胞的多药耐药,药用辅料Pluronic F68在乳腺癌治疗中具有潜在的应用前景。     

精氨酸修饰的壳聚糖作为基因载体的跨膜机制研究

目的研究证实精氨酸修饰壳聚糖（ACS）制备的载基因纳米粒子显著地提高壳聚糖（CS）基因载体的转基因效率,该文进一步探索ACS摄人及跨膜机制对基因转染效率的影响。方法用荧光标记的CS或者ACS与荧光素酶质粒DNA复合制备CS载基因纳米粒子[壳聚糖载基因纳米粒子（CGN）,精氨酸修饰壳聚糖载基因纳米粒子（ACGN）];与大鼠平滑肌细胞系A10细胞、不同跨膜通道的抑制剂（氯丙嗪、非律平和Dynasore）共孵育,以评价其基因递送的跨膜途径。通过与不同跨膜途径的抑制剂共转染,观察不同跨膜通道对转基因效率的影响。结果ACGN细胞摄入量是CGN的2倍[（1.534±0．016）μg／mg蛋白质US（0．755±0．007）μg／mg蛋白质1。与CGN相比,ACGN内吞通道有所改变,非律平（质量浓度5μg／mL,小窝蛋白内吞通道的特异抑制剂）能显著地抑制ACGN的细胞摄入（46．6％）和转基因效率（48．2％）,而小窝蛋白内吞通道对CGN作用不明显。结论实验数据显示,ACS改变了基因载体的内吞通道,促进了基因纳米粒子的细胞摄入量,同时也大幅度地提高了转基因效率。     

N-亚甲基磷酸化壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性及基因转染实验研究

目的 考察N-亚甲基磷酸化壳聚糖( NMPCS)基因纳米粒子的体外细胞毒性及基因转染效率.方法 采用均相反应法制备了NMPCS,用复凝聚法制备了NMPCS/DNA纳米粒子;通过MTT实验考察了NMPCS及其与DNA复合物对HeLa细胞的细胞毒性,以荧光索酶质粒为报告基因考察了NMPCS及NMPCS-CaZ+载体介导的体外基因转染效率.结果 NMPCS及其与DNA的复合物在体外表现出很小的细胞毒性,远远低于同等浓度时聚乙烯亚胺(PEI)的毒性.通过对壳聚糖进行亚甲基磷酸化修饰后,可大幅提高载体的基因转染效率.结论 N-亚甲基磷酸化壳聚糖有望成为一种新型、安全、高效的非病毒基因载体.     

功能化多壁碳纳米管对血管内皮细胞毒性的初步研究

目的:由于碳纳米管的广泛应用,其对人类及环境造成的影响日益受到人们的关注.血管是碳纳米管进入人体的首要通道之一,因此探讨功能化与原始状态的多壁碳纳米管对血管内皮细胞的细胞毒性作用具有重要意义.方法:自人脐静脉分离血管内皮细胞,免疫组化进行细胞鉴定.选择0.5～1 μm经羧基修饰的功能化多壁碳纳米管(f-CNTs)与同等长度未经修饰的多壁碳纳米管(p-CNTs)制备颗粒悬液,与血管内皮细胞共育后,利用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测细胞活力,透射电镜进行细胞形态学观察;制备碳纳米管透析液,通过MTT实验检测其对细胞的毒性作用.结果:①2种纳米管均对原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生一定的毒性作用,而且其细胞毒性随剂量递增呈上升趋势.与细胞共育24 h后,p-CNTs的毒性大于f-CNTs;而共育48 h及72 h后,f-CNTs毒性大于p-CNTs.②透射电镜实验表明,f-CNTs共育细胞内空腔明显多于p-CNTs,而空腔内f-CNTs聚集体紧密程度明显小于p-CNTs.③对2种多壁碳纳米管透析后的细胞培养基对细胞活力无明显影响.结论:根据上述结果笔者推测.p-CNTs细胞毒性的主导因素是聚集程度,f-CNTs对细胞毒性的主导因素为表面效应.进入细胞的碳纳米管数目增多,造成细胞损伤或阻断细胞内代谢通路,可能是共育后期f-CNTs细胞毒性大于p-CNTs的原因.     

十二烷基化壳聚糖基因支架血管内基因转运的实验研究

目的目前基因治疗方面存在的重要问题是缺乏有效的基因转运体系可以足量、安全地将治疗基因(无论病毒载体或非病毒载体)运送至体内靶细胞并提高其转染效率,以得到基因的高效表达。心血管内基因治疗的特殊性还在于很难把基因专一递送至血管组织的病灶处而不进入血液循环系统。实验研究提出了一种携带质粒DNA的烷基化壳聚糖纳米粒的血管内支架,可以有效地将质粒DNA递送至血管壁靶细胞并达到了高效转染的效果。     

右美托咪定在支气管肺泡灌洗过程中作用的研究

目的 考察右美托咪定在未建立人工气道的颅脑疾病患者支气管肺泡灌洗过程中的作用.方法 对46例颅脑疾病后无人工气道的肺部感染患者行支气管肺泡灌洗治疗,年龄17～82岁,平均年龄（56.6±9.2）岁,其中男性26例,女性20例.随机分为2组,其中对照组23例,支气管肺泡灌洗过程中接受咪达唑仑镇静;实验组23例,支气管肺泡灌洗过程中接受右美托咪定镇静.观察2组患者在支气管肺泡灌洗前和灌洗过程中的心率、平均动脉压及指脉氧等指标的变化.结果 支气管肺泡灌洗过程中最低指脉氧实验组高于对照组,最快心率实验组低于对照组,最低平均动脉压实验组高于对照组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.支气管肺泡灌洗过程中与灌洗前比较,2组心率均有增快,平均动脉压下降,指脉氧下降,但实验组各指标的幅度变化较小（P＜0.05）.结论 右美托咪定对患者呼吸和血压抑制较小,用于无人工气道的颅脑疾病患者的支气管肺泡灌洗过程相对安全有效.     

壳聚糖及其修饰物载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞分化的影响

目的 考察壳聚糖及烷基化修饰壳聚糖载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞是否有促分化作用.方法 将壳聚糖或烷基化修饰壳聚糖与去除内毒素的质粒DNA按N/P比为4∶1的比例通过静电作用制备载基因纳米粒子,然后将纳米粒子与人初始CD4+T细胞共孵育,于12、24、48 h以后分别取上清,离心,检测上清中细胞因子IL-4和IF...     

组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达

目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。