骨髓间充质干细胞体外诱导向内皮和上皮细胞的分化

背景：骨髓来源的间充质干细胞在体外具有多系分化潜能,但其在体外向肺组织细胞的分化能力尚存在争议。目的：体外诱导验证小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞和上皮细胞分化的能力。方法：分离小鼠骨髓来源的间充质干细胞,以内皮诱导液向内皮细胞分化。另外将小鼠骨髓间充质干细胞分别在以下诱导培养基中进行上皮诱导3周：单纯上皮诱导培养液,上皮诱导培养液加10μg/L转化生长因子β1,并以未经诱导的小鼠骨髓间充质干细胞作为阴性对照,肺泡上皮作为阳性对照。结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞在上皮诱导培养液中诱导培养3周后,部分细胞由梭形变为典型的卵石样上皮细胞形态,诱导后约 60%细胞表达广谱上皮细胞标志pan-CK,RT-PCR结果显示分化后的细胞表达上皮细胞特异标志CK18,未经诱导的间充质干细胞未表达。小鼠骨髓间充质干细胞在内皮诱导24h后即出现了典型的血管网状结构,vWF免疫荧光染色显示约 70%的细胞呈阳性,RT-PCR 显示分化后的细胞表达内皮细胞特异性标志CD31、vWF和 CD34。提示骨髓来源的间充质干细胞体外诱导培养具有跨胚层多系分化能力。     

成体组织来源的Sca-1+CD117-Lin-多潜能干细胞生物学特性分析

背景：关于成体干细胞可塑性机制的解释，目前多数学者接受的观点是多种组织器官内存在的成体干细胞其实并非均一的细胞群体，其中包含着更为原始的多潜能干细胞，但对于多潜能干细胞的起源、鉴别及其生物学特性仍缺乏了解。 目的：探讨从成体组织中能否分离出一群具有独特表型的更为原始的多潜能干细胞。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-03/2008-01在北京协和医学院基础学院组织工程中心完成。 材料：清洁级12.5~14.5 d BALB/C孕鼠10只。 方法：无菌条件下打开BALB/C孕鼠子宫获取胚胎体壁组织，胰蛋白酶消化后贴壁法制成细胞悬液，接种后免疫磁珠分选Sca-1+CD117-Lin-细胞群，当细胞达70%~80%融合时消化传代，取第5代细胞用于实验。 主要观察指标：倒置相差显微镜和扫描电子显微镜观察该类细胞的显微和超微形态，通过生长曲线和细胞周期观察其基本生长特性，采用流式细胞技术分析该群细胞免疫表型，以RT-PCR法检测胚胎干细胞相关抗原的表达情况，通过Von Kossa染色、油红O染色、甲苯胺蓝染色及免疫细胞荧光染色观察其向三胚层细胞分化的潜能。 结果：Sca-1+CD117-Lin-细胞贴壁生长，呈纺锤或短梭形，可在体外快速稳定扩增50代以上；传代后3~7 d为对数生长期，此后即进入平台期生长，倍增时间约为32 h，90.43%细胞处于G0/G1期，G2/M+S期的细胞比例为9.57%；细胞表型稳定，高表达Sca-1，不表达CD117，CD14，CD19，CD31，CD34，CD45和Flk-1，中度表达CD44；胚胎干细胞相关抗原Sox2，Oct-4及Nanog均呈阳性表达；诱导分化实验表明该细胞可以向中胚层来源的成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、外胚层来源的神经胶质细胞以及内胚层来源的肝细胞分化。 结论：从成体组织内可以分离出Sca-1+CD117-Lin-细胞群，其表达胚胎干细胞相关抗原，能够向三胚层分化，是一群更为原始的多潜能成体干细胞。     

慢性粒细胞白血病骨髓来源的间充质干细胞免疫调节功能的研究

目的:研究慢性粒细胞白血病骨髓来源的间充质干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞是否存在免疫功能的差异。方法:分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们对T 细胞周期、活化、抑制和增殖的作用。结果:CML 和正常志愿者骨髓来源的MSC 的细胞形态和表型没有差异,CML 患者来源的MSC 抑制T 细胞增殖的作用减弱,抑制T 细胞周期的作用减弱,抑制T 细胞活化的能力减弱,抑制T 细胞凋亡的作用增强。结论:CML 患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,使用CML 患者自体的MSC 移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML 患者最好选用异基因的MSC 移植治疗。      

慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性及其造血调控

由于慢性粒细胞白血病存在造血微环境异常和免疫异常,推测间充质干细胞可能在慢性粒细胞白血病的病理过程中扮演了一个重要角色。 目的：观察慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞的生物学特征和对造血调控的影响,比较其与正常人骨髓来源的间充质干细胞的异常。 方法：分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们的形态、表型、生长曲线和对T细胞活化的能力;将它们分别与脐带血干细胞共培养,检测共培养体系中对集落形成的影响和相关分子表达的差异。 结果与结论：慢性粒细胞白血病患者和正常志愿者骨髓来源的间充质干细胞的细胞形态、表型和干细胞的倍增时间均没有差异,慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞抑制T细胞活化的能力减弱;共培养体系中,悬浮细胞簇增加,说明造血干细胞与间充质干细胞之间的黏附性减弱,同时蛋白和RNA水平显示慢粒组中基质金属蛋白酶9升高,同时使ICAM-1的KitL从膜形式转变为可溶性形式。结果提示,慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞是细胞分化发育的微环境,其基础的机制在于基质金属蛋白酶9对细胞外基质的降解和黏附分子的裂解,改变骨髓微环境对造血干细胞黏附,增殖和分化的支持作用,导致造血干细胞异常增殖和动员,降低了恶变细胞对免疫细胞的敏感性导致免疫逃逸。     

小鼠骨髓来源Flk-1^＋间充质干细胞分离制备与生物学特点

背景：骨髓间充质干细胞具有广泛的应用前途,其三系分化的能力和免疫诱导特性使其具有再生医学的应用前景。目的：从小鼠骨髓中研究分离制备Flk-1＋间充质干细胞的新方法,检测了这类细胞的生物特性。方法：以小鼠骨髓为研究对象,分离单个核细胞,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测它们的细胞周期、表型和多系分化的能力。结果与结论：小鼠来源的骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,小鼠骨髓来源Flk-1＋间充质干细胞在光镜下均呈成纤维样或多角型贴壁生长,在体外相应的诱导液环境中均可以向三系分化。提示小鼠骨髓来源Flk-1＋间充质干细胞具有多向分化潜能。     

眶上动脉蒂反流轴型耳颞皮瓣的应用解剖

目的：明确额部各供血血管系统之间的吻合情况,为临床各型额部皮瓣特别是跨血管系统反流轴型皮瓣的应用提供解剖学基础。方法：成人尸体头面部肉眼解剖,观察眶上动脉、滑车上动脉和颞浅动脉额支的口径、走行和吻合状况等;成人头部标本制作血管铸型。结果：眶上动脉、滑车上动脉和颞浅动脉额支走行基本恒定,且三者存在众多吻合,吻合支集中区域上距眶上缘(4．9±0．4)cm,下为眶上缘水平,内侧距离前正中线1．0～1．4cm,外侧距离前正中线4．5～2．3cm。结论：额部有眶上动脉、滑车上动脉和颞浅动脉额支供血,吻合支丰富且吻合区域较恒定,故可制成多种类型的跨血管的反流式皮瓣。     

美容患者的心理分析及对策

美容患者是特殊的医疗群体,本文从心理学角度分析了求美者在求医目的、地位和判断标准等方面与求医者的区别。进一步指出求美者的心理波动可由医生的医疗技术和服务态度等影响,从而引发医疗纠纷。而防范的主要对策是建立在心理分析基础上的健全法律、据章行医、有所不为和心理沟通。     

树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞免疫治疗预计生存期低于3月的晚期恶性肿瘤患者

目的 探讨预计生存期小于3月的晚期肿瘤患者是否会从DC-CIK治疗中获益。方法 对13例预计生存期小于3月、ECOG评分大于3的患者进行DC-CIK治疗,同时检测治疗前后T淋巴细胞亚群的变化,对比治疗前后ECOG评分的变化,统计OS,观察不良反应。结果 末次DC-CIK治疗后两个月与治疗前对比,CD3+T细胞的增加和CD8+CD28-T细胞的减少差异有统计学意义。通过DC-CIK治疗11位患者ECOG评分得到改善,11位患者OS大于预计的3月,而且有7位患者至随访末仍然生存（均已大于6月）,无明显不良反应发生。结论 预计生存期小于3月的晚期肿瘤患者行DC-CIK治疗,是安全有效的。     

体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景：课题组从胎儿骨髓间充质干细胞的培养体系中鉴定出一类贴壁细胞,已证实此类细胞在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的：检测骨髓间充质干细胞的生物学特性,为慢性粒细胞白血病的治疗提供相关的依据。方法：以慢性粒细胞白血病患者骨髓为研究对象,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测其BCR/ABL融合基因的表达、免疫学特性和生长曲线,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提示慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的骨髓间充质干细胞水平上,对慢性粒细胞白血病的疾病起源及干细胞移植治疗有重要的意义。