IDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响

目的：检测吲哚胺2—3双加氧酶（IDO）基因修饰的细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。方法：将pEGFP-NI-mIDO真核表达载体转染至小鼠NIH 3T3成纤维细胞系。体外检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液中色氨酸水平的变化；使用CFSE标记技术，检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液对ConA刺激的小鼠T淋巴细胞增殖的影响。结果：将pEGFP-NI-mIDO转入NIH 3T3成纤维细胞，流式细胞术（FCM）检测到EGFP的表达；体外实验表明，成纤维细胞培养上清和转染pEGFP—NI的成纤维细胞培养上清可检测到一定量的色氨酸水平，而转染pEGFP-NI-mIDO的成纤维细胞培养上清未检测到色氨酸，提示pEGFP-NI-mIDO转染的成纤维细胞表达了具有活性的mIDO；使用CFSE标记技术，检测mIDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响，发现ConA刺激的IDO组，72h后亲代细胞占各代细胞的百分率明显高于对照组。结论：IDO基因修饰的成纤维细胞可抑制T淋巴细胞的增殖。     

紫外线对角质细胞线粒体功能及凋亡的影响研究

目的： 分析紫外线（UV）照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。 方法： 以紫外线低剂量（UVA2J/cm2，UVB10mJ/cm2）和高剂量（UVA6J/cm2，UVB30mJ/cm2）照射HaCaT细胞，继续培养15 h，用流式细胞仪检测线粒体膜电位（△ψm）、线粒体质量（mitochondrial mass）；使用碘化丙啶（PI）进行DNA染色并用流式细胞仪检测亚二倍体分析凋亡，以及进行Annexin V-FITC与PI共染色，用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。 结果： HaCaT细胞经紫外线照射后，△ψm下降的细胞比例随着照射剂量的增加而增加，对照组、低剂量组及高剂量组分别为7.94%±1.02%、25.87%±4.55%、39.27%±5.32%；线粒体质量降低的细胞比例同样随着照射剂量的增加而增加，对照组、低剂量组以及高剂量组分别为15.19%±1.58%、40.36%±4.41%、68.79%±5.46%。用PI检测DNA含量所产生的亚二倍体峰观测凋亡率，对照组、低剂量组以及高剂量组凋亡率分别为1.82%±0.51%、30.16%±5.47%、58.49%±5.98%。用Annexin V-FITC/PI染色分析细胞凋亡程度，其结果与PI-DNA染色所得结果一致，对照组仅有少量细胞死亡，低剂量组凋亡细胞较对照组为多（Annexin V-FITC单阳性细胞），高剂量组以坏死细胞为多（Annexin V-FITC/PI双阳性）。 结论： HaCaT细胞经紫外照射后，线粒体去极化作用增强，同时线粒体质量降低，这些变化与细胞凋亡相关。     

瘤苗免疫的实验研究

我们在进行莪术抗癌作用原理的实验研究中,发现用莪术处理的艾氏腹水癌瘤苗免疫昆明种小鼠,与碘乙酸瘤苗一样,均能使动物获得明显的免疫保护效应,进一步用615近交系小鼠的L615白血病作模型,同样发现,用莪术L615瘤苗与X线照射L615瘤苗主动免疫后,均     

白藜芦醇对活化小鼠T淋巴细胞IL-2和CD25表达的影响

目的：研究白藜芦醇(RSV)对活化的小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和CD25的影响，并探讨其免疫抑制机制。方法：无菌分离小鼠淋巴结细胞，与不同浓度的白藜芦醇共同孵育1小时后，用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化，继续培养6小时后收获细胞，进行胞内细胞因子染色，流式细胞仪检测IL-2的分泌情况，RT-PCR检测IL-2 mRNA的表达：24小时后检测CD25表达。结果：RSV对IL-2的分泌具有抑制作用，并呈剂量依赖性，同时RSV也能抑制T细胞表面活化分子CD25。结论：RSV对活化T细胞分泌的细胞因子IL-2及IL-2α链CD25的表达可能是RSV对T细胞具有免疫抑制作用的机制之一，并可能与T细胞活化通路的PKC-NF-κB信号传导途径相关。     

氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖

目的：探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。 方法： ①建立DNFB所致小鼠ACD模型，以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射，检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色，流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。 结果： ①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明，在500、125和31 mg/L组，OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。 结论: OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用，而且抑制小鼠淋巴细胞增殖；OMT是一种免疫抑制剂。     

成纤维细胞生长因子和胰岛素对小鼠软骨细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素对小鼠原代软骨细胞的影响。方法: 在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养, 采用WST1比色法和荧光染色法观察bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。结果:原代软骨细胞在0.4%胎牛血清培养基培养条件下, 不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明, bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖, 而且可使细胞分泌基质增多。结论:bFGF和胰岛素均能促进软骨细胞的增殖。     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。     

孕妇外周血中胎儿细胞对3种抗体表达的研究

目的：利用流式细胞仪研究孕妇血中胎儿细胞对三种抗体表达的情况。希望能更准确的标记孕妇血中的胎儿细胞。以助提高胎儿细胞的分离纯度。方法：用CD71、CD45、GPA（糖蛋白A）分别标记抗凝的22例孕妇血、28例脐血、30例正常未孕妇女血各100ul。在流式细胞仪上检测。同时对已标记2种抗体的2例20ml母血在流式细胞仪上进行胎儿细胞分离,并经PCR技术鉴定男性SRY基因。结果：1、正常未孕妇女血中几乎无CD71 细胞存在。2、在脐血和孕妇血中CD71 细胞主要有两群。高表达群和低表达群。有核红细胞（表达CD71 GPA /CD45-）主要在高表达群中,脐血是58.73%,孕妇血36.43%。3、无论是高表达群 低表达群,CD45 细胞占多数。在脐血中低表达群是90.86%,高表达群占22.26%。孕妇血CD71 低表达群中CD45 细胞占82.11%。高表达群CD45 细胞占79.29%。4、利用流式细胞仪分离已标记三种抗体的母血中胎儿细胞,经PCR技术鉴定分离后的标本中存在男性SRY基因的胎儿细胞。结论：1、正常未孕妇女血中几乎不存在有核红细胞。2=在脐血和孕妇血中有核红细胞主要有两群。高表达群和低表达群。有核红细胞主要在高表达群中。3、无论高表达群或低表达群。CD45 细胞（增殖的白细胞）仍占多数,说明依然缺乏识别胎儿细胞的特异性标记物。主张多参数标记胎儿细胞有利于提高分防细胞纯度。     

维生素C对大鼠肋骨生长板软骨细胞增殖和胶原合成的影响

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H Proline掺入法检测 2 5、5 0和 10 0mg/LAsc对第 2代RGC增殖和胶原合成的影响。3种浓度的Asc均能促进RGC胶原合成 (P <0 0 5 ) ,2 5mg/L和 5 0mg/LAsc的促胶原合成作用明显强于 10 0mg/L(P <0 0 5 ) ;2 5mg/L和 5 0mg/L的Asc促进RGC增殖 (P <0 0 5 ) ,10 0mg/L的Asc抑制RGC的增殖 (P <0 0 5 )。因此一定浓度的Asc具有促进RGC增殖和胶原合成的作用 ,2 5mg/L～ 5 0mg/L是较为合适的添加浓度。     

小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

目的：建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（GVHD）模型，为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法：以C57BL/6 (H-2^b) 小鼠为供鼠、BALB/c (H-2^d) 小鼠为受鼠，在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD，20%的小鼠长期存活（超过120 d），无急性GVHD表现；混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异，其中骨髓与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后5-14 d出现典型的弓背体位，存活期6-24 d，临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论：以供鼠骨髓与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植，100%引出致死性的急性GVHD。