uPA-uPAR系统对骨巨细胞瘤细胞p44(MAPK)信号转导的影响

目的研究uPA／uPAR系统对骨巨细胞瘤细胞MAPK信号转导的影响。方法分离并培养骨巨细胞瘤细胞，用免疫组化检测骨巨细胞瘤组织中uPAR的表达水平，用免疫共沉淀方法检测外源激活或阻断uPA—uPAR对骨巨细胞瘤细胞信号转导通路的p44（MAPK）蛋白磷酸化水平的影响。结果仅有单核基质细胞可以在体外培养中长期生存；在骨巨细胞瘤组织中uPAR主要表达在部分单核基质细胞和一些多核巨细胞的胞膜上；将uPA—ATF加入培养的骨巨细胞瘤细胞后，细胞信号通路上的p44蛋白磷酸化水平明显增高。用uPAR抗体处理后，细胞p44蛋白磷酸化水平明显降低。说明uPA—ATF具有细胞信号转导活性，该活性受uPAR拮抗剂的影响。结论本实验检测到uPA—uPAR系统是通过p44（MAPK）信号转导通路转导信息，从而调节骨巨细胞瘤细胞增殖、分化及其他生物学行为。     

MMP-2、TIMP-2的表达与骨巨细胞瘤复发的相关性

目的研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2(Tissue inhibitor of metalloproteinase-2)的表达与肿瘤血管形成和关系。方法用免疫组化SP法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2的表达情况,以CD31标记检测微血管密度(MVD),计算肿瘤复发组和非复发组MMP-2/TIMP-2的比值,分析这些指标与骨巨细胞瘤预后的关系。结果骨巨细胞瘤组织有高水平的MMP-2、TIMP-2和CD31表达。复发组表达MMP-2、MMP-2/TIMP-2比值以及MVD均显著高于非复发组,但与组织学分级无关。MMP-2与MVD呈正的直线相关。结论MMP-2/TIMP-2比值升高与骨巨细胞瘤的复发以及肿瘤血管形成有关。     

乳头状胶质神经元肿瘤临床病理特征

背景与目的:报道1例罕见的乳头状胶质神经元肿瘤(papillary glioneuronal tumor,PGNT),结合文献探讨其临床病理学特征。方法:对1例PGNT的临床表现、影像学特征、病理形态改变和免疫组化标记进行观察分析。结果:患者16岁,临床表现为头痛和偶发癫痫发作。MRI检查见右额顶叶脑实质内有边缘清楚的囊性病灶,囊壁薄,囊腔面见微小突起,囊内充有液体。组织学检查见肿瘤由小圆形细胞组成,类似脑室中央神经瘤瘤细胞,并见星形胶质细胞成分,类似毛细胞性星形细胞瘤样结构。囊腔面瘤细胞排列成特征性的假乳头样结构,中心为血管,表面为单层或多层胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形细胞。肿瘤与正常脑组织分界清楚,无包膜,靠近正常组织的瘤细胞成片排列,局部有中央神经细胞瘤的无核区结构,瘤细胞对神经元免疫组化Syn、NSE、CgA标记呈阳性反应。肿瘤中见个别中型神经节细胞分化细胞,未见坏死和核分裂相。患者术后追踪8个月,未见肿瘤复发。结论:PGNT是一种新鉴定的神经元-胶质混合性肿瘤实体,属良性脑肿瘤,预后良好。     

氯乙烯工人肝脏血管肉瘤

聚氯乙烯为生产与使用最广泛的合成塑料,而聚氯乙烯制造首先要生产氯乙烯单体,氯乙烯单体通过加热加压和催化剂存在下发生聚合,形成聚氯乙烯。过去一直认为氯乙烯毒性较低,对人的健康威胁不大,中毒的主要表现为麻醉作用,接触高浓度后,呈头晕、嗜睡、失定向力、步态不稳、视物模糊、手足发麻,但氯乙烯的麻醉作用比四氯化碳或三氯甲烷要弱。另外,氯乙烯还能引起手指末节肢端溶骨症和皮肤类硬皮病变化,但这些作用,在脱离接触后都可以得到改善。然而,近几年来国外一些期刊接二连三地报导了氯乙     

原发与复发性成胶质细胞瘤中 DNA错配修复蛋白、p53蛋白表达和 DNA倍性的差异

目的：探讨原发与复发性成胶质细胞瘤的临床病理特点和分子遗传学差异。方法：应用免疫组化和流式细胞学方法对 32例广东籍成胶质细胞瘤 hMSH2,hMLH1和 p53蛋白表达及 DNA倍性进行检测,结合临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果：32例成胶质细胞瘤患者的 DNA倍性与 p53的表达存在显著的相关性(P< 0.05),23例非整倍体 DNA含量的肿瘤中,有 20例(87.0％)出现 p53蛋白的过度表达。在原发与复发性成胶质细胞瘤中,肿瘤的 DNA含量和 p53蛋白表达有显著的差异性(P< 0.05),复发性成胶质细胞瘤中,有 87.5％(14/16)出现了 p53蛋白的过度表达,93.8％(15/16)为非整倍体的 DNA含量;而原发性成胶质细胞瘤,则有 56.3％(9/16)呈 p53表达正常表达,50.0％(8/16)是二倍体或近二倍体 DNA含量。另外,丢失了 hMSH2蛋白的 2例成胶质细胞瘤,全部是复发性的肿瘤,均呈 p53蛋白的过度表达和非整倍体的 DNA含量。结论：广东籍成胶质细胞瘤患者的发病年龄明显低于欧美人。绝大多数的复发性成胶质细胞瘤是沿染色体不稳定性(Chromosomal instability,CI)途径而发展,多数出现 p53基因的异常表达,少部分肿瘤可同时涉及微卫星不稳定(Microsatellite.instability,MSI)途径;约一半的原发性成胶质细胞瘤既不沿 CI途径发展,也未出现 p53基因的异常,同时又无证据显示与 MSI途径有关     

年轻人结直肠癌早期诊断和临床分期的分子标记

目的探讨与年轻人结直肠癌(CRC)早期诊断和临床分期密切相关的分子标记。方法运用免疫组织化学和流式细胞学方法对63例年轻结直肠癌和对应的16例腺瘤组织中β-连接素(β-catenin)、hMSH2、hMLH1和P53蛋白表达和DNA倍性进行检测,结合肿瘤的Dukes分期,分析它们之间的差异与相关性。结果在63例年轻CRC中,肿瘤组织的DNA倍性与患者的Dukes分期有显著的相关性(P<0.05),非整倍体DNA含量的肿瘤,80.8%发生在DukesC或D期的CRC。P53蛋白的过度表达(76.0%)也倾向于浸润晚期的肿瘤;而hMSH2或hMLH1蛋白丢失的肿瘤70.0%是浸润早期的CRC。在16例配对的年轻结直肠腺癌和腺瘤组织中,β-catenin和DNA错配修复(MMR)蛋白表达间差异无显著性意义(P>0.05),8例β-catenin核浆聚集的CRC中,其对应的腺瘤有5例同时出现β-catenin的核浆聚集;丢失了hMSH2或hMLH1蛋白的3例CRC,其对应的3例腺瘤均丢失相应MMR蛋白。结论β-catenin和MMR蛋白hMSH2,hMLH1可以作为年轻CRC早期诊断中较为理想的分子标记;而肿瘤的DNA倍性和P53蛋白表达是患者临床分期中有用的参考指标。     

脂质沉积性肌病4例误诊分析

目的通过分析4例被误诊的脂质沉积性肌病的临床及病理特点,探讨脂质沉积性肌病被误诊的原因及与假肥大型肌营养不良、肢带型肌营养不良及多发性肌炎的鉴别诊断。方法分析4例脂质沉积性肌病患者的临床特点、实验室检查、肌活检资料,并复习相关文献。结果4例患者均以四肢近端无力为首发症状,被误诊为假肥大型肌营养不良、肢带型肌营养不良或多发性肌炎,经肌活检证实为脂质沉积性肌病。结论脂质沉积性肌病是由于长链脂肪酸代谢障碍导致的疾病,临床上应与相关肌病相鉴别,病理检查是确诊该病的主要根据。     

MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备

[目的]构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体.[方法]利用RTPCR方法扩增MAGE-3基因片段,连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEXMAGEE-3并测序.将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化.用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性.[结果]构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达一相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3.制备了兔抗GST-MAGE-3抗体.Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合.[结论]获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体、为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具.     

正、反义hTERT基因真核表达载体的构建与鉴定

目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,并将扩增产物TA首先克隆至pGEMR-T载体,然后双酶切pGEM-T载体回收目的片段再克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(±)中,并对重组体进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实构建的正、反义hTERT基因真核表达载体克隆成功,插入片段测序结果与Genebank的hTERT cDNA的部分序列完全一致。结论成功地构建了正、反义hTERT基因真核表达载体,为下一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗打下了实验基础。     

~(60)Coγ射线诱导食管癌细胞凋亡的研究

笔者在本实验中用不同剂量60 Ｃｏγ射线照射人食管癌细胞系Ｅｃａ 10 9,研究照射前后癌细胞的凋亡率的变化和检测凋亡相关基因ｐ5 3、ｂｃｌ 2和ｂａｘ的表达 ,探讨放射诱导食管癌细胞凋亡的分子机理。一、材料和方法1 细胞培养 :人食管癌细胞系Ｅｃａ 10 9细胞由河南省肿瘤研究所提供。培养液为含 10 %新生牛血清及青霉素 (10 0Ｕ ｍｌ)和链霉素 (10 0 μｇ ｍｌ)的ＲＰＭＩ 16 40。细胞置于 37℃、5 %ＣＯ2 、饱和湿度的培养箱内培养 ,每隔 3ｄ传代 1次。2 照射处理 :在细胞呈指数生长期时 ,随机分为对照组和实验组 ,照射前 2 4ｈ更换培…