改良分子信标-双重实时荧光PCR快速检测SARS病毒

目的建立改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒的方法,用于SARS的早期诊断和动物溯源。方法利用改良分子信标技术、装甲RNA和双片段双色荧光技术,根据GenBank公布的SARS病毒聚合酶基因1b的阅读开放框架结构的保守序列,自行设计一对引物和探针,以部分临床标本的酶联吸附实验结果和传统细胞培养方法作为对照,建立分子信标检测SARS病毒的方法。对368份临床标本(咽漱液、血液、粪便、尿液)、52份细胞培养液和50份动物标本进行荧光PCR扩增。结果分子信标检测SARS病毒的方法灵敏度为10～100个拷贝ml,与流感病毒等呼吸道病毒无交叉反应。分子信标检测368份临床标本,20份阳性。其中确诊病例阳性率为21.27%(1047),确诊病例的咽漱液阳性率为43.48%,还分别从粪便和血清中检测到SARS病毒。52份细胞培养液,29份阳性,阳性率为55.77%。50份动物标本,23份阳性,阳性率为46%。结论改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒方法灵敏度高、特异性强,可用于SARS的临床早期诊断和动物溯源。     

2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒基因特性的分析

目的分析2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒血凝素(HA)基因的特性。方法将2007年深圳市分离到的Yamagata系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒根据197-199位氨基酸的差异可以划分为A、B、C3个分支。分支C在197位上有糖基化位点的增加,而分支A、B则未在该区域呈现出糖基化位点的特征性结构。此外与今年的国内代表株B/Fujianxinluo/54/06相比,除了40号位点上的氨基酸变异为共同存在外,其余大多数的氨基酸点变异是散发存在的。部分的变异位点处在HA1区的抗原表位,可能会导致病毒的抗原性改变。结论2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒与B/Fujianxinluo/54/06相比基因特性已发生变化,并呈现出多样性的变化趋势。     

深圳市1例成人重症水痘-带状疱疹病毒感染的实验室诊断

水痘-带状疱疹病毒(简称VZV)是引起人类水痘、带状疱疹的病原。水痘是一种常见的病毒感染性皮肤病,它经呼吸道传播,可发生于儿童和成年人,成年人易出现重症水痘患者。2002年7月,深圳市某医院收治1例罕见的全身包括面部均长满巨大疱疹,大的疱疹有9×4cm2,而且很多疱疹已经严重感染,疑似重症带状疱疹患者,并且15 d时照顾他的弟弟也开始出现水痘症状。我们分别采集了患者的疱疹液、急性期、恢复期血清及其弟弟恢复期血清,应用PCR-ELISA方法、PCR电泳     

深圳市传染性非典型肺炎患者聚合酶链反应及血清学检测研究

目的　探讨传染性非典型肺炎 (SARS)的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及血清学检测方法。方法　收集SARS临床诊断病例咽漱液标本 2 3份和血清 10 8份 ,应用SARS冠状病毒分子信标RT PCR、间接免疫荧光试验 (IFA)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别进行了病原学和血清学检测。结果　 2 3份SARS患者咽漱液用分子信标RT PCR检测 ,阳性 10份 ,阳性率为 4 3 4 8% (10 /2 3)。IFA法检测血清中SARS冠状病毒IgM抗体阳性率 (17 78% )明显低于ELISA法 (6 8 89% ) ,两者IgM阳性率存在显著性差异 (χ2 =2 3 94 ,P <0 0 0 5 ) ,两者IgG抗体阳性率无显著性差异 (χ2 =0 78,P >0 0 5 )。结论　IFA用于SARS病毒IgM检测 ,敏感性比ELISA差。IgM抗体检测宜于发病 10d后取标本 ;IgG抗体检测适于发病 2周后取标本。分子信标RT PCR可发展成为一种快速的SARS诊断检测方法 ,抗体检测简便、快速 ,可作为临床辅助诊断指标。     

深圳市流感指数的制定及应用

目的 探索疾病监测数据的应用新模式,提升疾病监测质量。方法 采用综合评分法,对流感样病例百分比的基线值和平均值、每周流感病毒检测阳性率和每周流感样病例暴发疫情起数的高低程度评分和计算权重系数,建立“流感指数”判定方程。结果 “流感指数”分为4个等级,分别为极易发生（Ⅰ级,指数值3.6~4）、易发生（Ⅱ级,指数值2.6~3.5）、较易发生（Ⅲ级,指数值1.6~2.5）和较少发生（Ⅳ级,指数值1~1.5）。结论 “流感指数”是将疾病监测数据转化为实际应用的新尝试,具有良好的社会效益。     

基因沉默机制与预防对策

随着转基因技术在高等生物中的广泛应用 ,转基因沉默受到越来越多的重视。转基因沉默可发生在转录和转录后两种水平。转基因的甲基化、重复拷贝以及与内源基因的同源序列都可以引起转基因的沉默现象。引起转基因的沉默机制有多种 ,本文论述了目前引起转基因沉默的主要机制和几点预防对策     

2011-2012年深圳市呼吸道腺病毒分子分型及其流行特征

目的了解2011-2012年深圳地区致病性呼吸道腺病毒(AdV)的病原体基因亚型和遗传进化及其流行特征,分析深圳地区呼吸道腺病毒的流行规律和传播途径。方法收集2011年1月至2012年12月深圳地区31个流感样病例监测哨点2 822份样本,先用荧光定量PCR方法筛查流感样病例,筛查后的阴性样本进一步进行呼吸道腺病毒等13种常见呼吸道病毒的核酸检测。对检测出的109份腺病毒阳性标本进行病毒分离,感染Hep-2受体细胞后共获得71份AdV稳定细胞毒株,用腺病毒六邻体基因作为靶基因,扩增其中的50份腺病毒阳性标本,纯化扩增产物后直接用于序列分析,在GenBank上进行序列比较,确定其病毒亚型并进行系统进化分析。结果 2011-2012年深圳市腺病毒感染患者的高发年龄段人群为小于7岁的儿童,1~2岁婴幼儿发病率最高;4-6月和10-12月为每年发病高峰期。在2 822份流感样病例咽拭子标本中,经定量PCR方法确定为AdV核酸阳性共109份,核酸阳性率为3.86%,从109份核酸阳性样本中分离病毒71份,病毒分离率为68.93%。50份分离的呼吸道腺病毒分子分型结果为1型AdV 6例,占12%;2型AdV 4例,占8%;3型AdV 27例,占54%;4型AdV 3例,占6%;5型AdV 4例,占8%;7型AdV 5例,占10%;另外有复合型AdV(HAdV-un)1例,占2%。结论近两年来深圳地区呼吸道Adv感染以3型为主,腺病毒引起的呼吸道疾病主要发生在每年的4-6月,感染人群主要是1~2岁婴幼儿。     

缺硒饲养ICR小鼠加快肠道病毒71型在体内的复制研究

目的观察硒蛋白对手足口病病原体肠道病毒71型（EV71）在感染动物体内复制的影响情况。方法将30只雌性ICR小鼠分为常规饲料组、缺硒饲料组和加硒饲料组,各种饲料饲养小鼠6周后,通过电感耦合等离子体质谱仪（ICP—MS）测定小鼠外周血中硒的含量以及荧光定量PCR方法测定动物体内肠道病毒EV71的载量．然后用病毒空斑实验测定病毒滴度并用酶促法来测定主要硒蛋白酶的活性。结果通过测定外周血中硒的含量发现,缺硒饲料组的ICR小鼠硒含量为0．081μg／g,显著低于常规饲料组0．135μg／g和加硒饲料组的0．128μg／g,差异有统计学意义（P〈0．01）;用荧光定量PCR方法测定EV71载量,加硒饲料组ICR小鼠体内EV71核酸扩增Ct值,明显高于缺硒饲料组（P〈0．05）;ICR小鼠体内主要硒蛋白酶（GPX1）的活力在缺硒饲料组的动物体内显著低于加硒饲料组：病毒空斑实验结果表明,缺硒饲料组的ICR小鼠体内EV71病毒复制活力显著高于其他两组。结论缺硒可能导致硒蛋白GPX1合成减少或其活力降低从而加快EV71在宿主内的复制。