体外转染JWA核酶反转录病毒载体对人肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响

目的：探讨JWA核酶基因转染对肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响。 方法：实验于2004-08／2005—04在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸病研究室完成。质粒pLXSN为第三军医大学附属新桥医院呼吸研究所惠赠。人肺动脉平滑肌细胞（C-12521）及平滑肌细胞生长培养基2（C-22162）购自德国Promo Cell公司。设计合成JWA核酶基因并构建于反转录病毒载体pLXSN上，转染体外培养的人肺动脉平滑肌细胞，经鉴定证实转染成功后，应用半定量反转录聚合酶链反应法测定细胞内JWA mRNA的表达，改良Boyden小室法测定细胞迁移情况，半定量反转录聚合酶链反应法及免疫细胞化学法检测α—SM actin表达量反映细胞表型变化。 结果：转染JWA核酶基因的细胞（P—JWARZ）JWA mRNA表达量较空载体转染细胞（P-pLXSN）及未转染细胞（肺动脉平滑肌细胞）显著降低，细胞迁移率显著增加，α—SM actin表达量显著减少（JWA mRNA：0.5812&;#177;0．0455，0．7823&;#177;0．0292，0．8169&;#177;0．0289；细胞迁移：29．6&;#177;4．72，7．2&;#177;1．44，6．6&;#177;1．92：α—SM actin mRNA：0．4418&;#177;0．0202，0．4767&;#177;0．0209，0．2661&;#177;0．0119；α—SM actin蛋白：0．2211&;#177;0．0093，0．3251&;#177;0．0085，0．3200&;#177;0．0095，P〈0．01）。 结论：JWA核酶基因转染可抑制人肺动脉平滑肌细胞内JWA基因的表达，使细胞分化为合成表型，促进细胞迁移。     

蛋白激酶Cα对哮喘患者白细胞介素-2、-4、-5mRNA表达的调节及银杏叶提取物对其的影响

早在1000多年前，我国民间就使用银杏治疗支气管哮喘（以下简称哮喘）和支气管炎。本研究通过观察银杏叶提取物的有效成分之一——BN52021作用于体外培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞后，蛋白激酶Cα（PKCα）及IL-2mRNA、IL-4mRNA、IL-5mRNA的变化，探讨银杏叶制剂治疗哮喘的部分作用机制。     

蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨蛋白激酶C(PKC) 核因子κB(NF κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　体外培养HPASMCs ,用工具药PKC激活剂 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)和NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC) ,将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA PDTC组在常氧和缺氧条件下培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGFmRNA表达 ,Westernblot法检测VEGF和NF κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达 ,免疫细胞化学法检测NF κBp6 5的表达和定位 ,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果　( 1)NF κBp6 5胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2 /M % :常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA PDTC组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 5 ) ;缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )VEGFmRNA和蛋白表达 :常氧对照组、PMA组、PMA PDTC组组间差异均无显著性 (P均 >0 0 5 ) ;缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA PDTC组、常氧PMA组 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5 )。 ( 3)缺氧PMA组NF κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2 /M %之间均呈正相关 (r =0 5 87～ 0 710 ,P均 <0 0 5 )。结论　常氧培养HPASMCs存在PKC NF κB信号转导通道 ;     

支气管哮喘患者血浆热应激蛋白60、70抗体表达及与发病的关系

当机体接触高温或其他应激因素如感染、缺氧、生理紧张等时可大量合成热应激蛋白（Hsps），而其中的一些应激因素常见于支气管哮喘（简称哮喘）的发生中。哮喘的发生与外界环境刺激和遗传因素有关，外界环境的刺激可诱导支气管上皮细胞Hsps（主要是Hsp60和Hsp70）的表达，而当机体由于病毒或支原体等感染导致免疫异常时，机体可产生针对Hsps的抗体。但Hsps抗体在哮喘患中是否存在，以及它们与哮喘发病的关系，目前国内、外尚少见报道。我们的研究拟探讨Hsp60、70抗体在哮喘发病中的作用。     

细胞信号转导在Th细胞分化中的作用

支气管哮喘(哮喘)是由多种细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患[1]。气道高反应性和可逆性气流受限是其病理特征。目前研究表明:Th1和Th2之间平衡失调是哮喘发病的重要机制。并认为Th2优势应答是哮喘发病的始动因素和维持因素,而对Th1优势应答在哮喘中的作用意见尚未统一。Kavita[2]研究表明:STAT4介导的细胞信号转导对由变态反应原诱导的气道反应的加重起着重要作用,而且Th1优势应答诱导产生的对嗜酸性粒细胞有趋化功能的趋化因子可引起哮喘患者气道极大的损伤。因此…     

白细胞介素-13在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达

IL-13是一种具有多种生物学活性的Th2型细胞因子，在调节炎症和免疫反应中发挥重要作用。目前研究发现，IL-13转基因大鼠肺组织可出现慢性阻塞性肺疾病（COPD）样病理改变”由此说明，IL-13可能参与了COPD的发生、发展。本研究旨在探讨COPD患者肺组织中IL-13表达及其与COPD的关系。     

吸呼肌疲劳治疗的研究近况

最近10余年来,呼吸肌疲劳在慢性呼吸衰竭发生过程中的作用逐渐受到重视,对其病理生理改变、生化改变、临床诊断方法及治疗措施等均进行了研究。本文简述近年来有关呼吸肌疲劳治疗研究的部分文献。一、药物治疗 (一)茶碱类茶碱类是目前研究较多的药物,多认为其具有增强呼吸肌收缩力、延缓疲劳发生、加快疲劳恢复的作用。Viires等采用大鼠单个膈肌纤维进行体外试验,15mg/L浓度的氨茶碱使其纠转收缩力增强11%。Delbono等用膈肌束试验结果与此相似。Kolbeck等观察10~(-4)mol/L茶碱对大鼠整块膈肌的作用,结果用药组收缩力较对照者增加15%;经过连续10分钟疲劳刺激后,用药组收缩力较对照组高26%。D-vito     

重视慢性阻塞性肺疾病患者的社区康复治疗

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种气流持续受限性疾病,常以呼吸困难,运动受限为主要临床表现。肺康复治疗已被证实能明显改善COPD的临床表现,提高生存质量。以社区为基础开展COPD患者的肺康复治疗可以减缓患者肺功能下降速率、降低患者住院率、减少家庭和社会经济负担。