弓形虫表面抗原SAG3基因片段克隆及序列测定

目的 克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段，并进行序列分析。方法 设计合成引物，从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamH Ⅰ双酶切后，克隆到原核表达质检pGEX-47-2中，转化入大肠杆菌JMl09，用PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EooRⅠ和BamH Ⅰ双酶切鉴定，并进行序列的测定。结果 从弓形虫ZS2、RH和ZS1株DNA中扩增出1176bp的SAG3基因，构建重组质检pGEX-47-2-SAG3(pGEX—SAG3)，酶切产物的大小分别与预期相符。结论 成功地对弓形虫ZS2、RH和ZS1株SAG3基因进行体外扩增及构建原核表达重组质检pGEX-SAG3，并经酶切及序列分析所验证，为弓形虫SAG3表面抗原的表达、体外诊断研究做好准备。     

恶性疟原虫重组质粒DNA接种诱导BALB/c小鼠的免疫应答

目的：观察重组质粒ＤＮＡ直接免疫接种诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的免疫应答水平，为恶性疟原虫ＤＮＡ疫苗在动物和人体的应用提供依据。方法：构建编码多价保护性抗原的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＰＣＲ法检测免疫鼠的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、脾脏和肺组织中ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＥＬＩＳＡ、Ｔ淋巴细胞转化试验、体外抑制试验观察其诱导的体液免疫及细胞免疫水平。结果：用ＰＣＲ法从上述组织中均检测到ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＥＬＩＳＡ法测得免疫鼠血清的特异性抗体滴度达１２５６０，淋巴细胞转化试验显示恶性疟原虫可溶性抗原能特异性地剌激免疫鼠脾细胞增殖，免疫血清在体外还能抑制恶性疟红内期疟原虫的生长、发育。结论：编码恶性疟原虫多价保护性抗原的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８直接免疫接种，能特异性地剌激ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，其免疫血清在体外对疟原虫生长发育具有明显抑制作用。     

日本血吸虫再感染相关蛋白基因的克隆和原核表达

目的 从日本血吸虫(S．japonicum)尾蚴文库扩增S．japonicum再感染相关蛋白(RIRP)基因．进行克隆并原核表达出RIRP，为进一步的功能研究奠定基础。方法 根据已登陆的S．japonicum成虫期RIRP基因的序列设计两条特异引物，以S．japonicum尾蚴cDNA文库为模板扩增RIRP基因cDNA，将该基因的cDNA克隆入原核表达载体pGEX-4T-1和真核载体pcDNA3．1。转化的克隆通过氨苄青霉素的筛选、PCR扩增、双酶切和最后的测序鉴定。重组的pGEX-4T-1／RIRP在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE鉴定其在大肠埃希菌中的表达情况和分子质量。用抗-26 ku GST单抗作western杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。结果 从S．japonicum尾蚴文库中扩增出一条长为462 bp的cDNA片段，经测序证实其为RIRP基因的全长cDNA。它编码含153个氨基酸的蛋白质-RIRP，预测其分子质量单位为17．545ku。RIRP cDNA已被成功克隆人pGEX-4T-1和pcDNA3．1载体，大肠埃希菌BL21(DE3)编码一个约17ku的蛋白质。结论 RIRP基因首次从S．japonicum尾蚴文库中扩增出来，并成功构建了原核和真核表达载体，而且，它首次由大肠埃希菌表达，表达蛋白的分子质量单位约17ku。     

3种恶性疟原虫红内期抗原基因的测序和序列分析

目的　测定我国恶性疟原虫海南株 (FCC1/ HN)谷氨酸富集蛋白 (GARP)、丝氨酸重复抗原 (SERA)和裂殖子表面蛋白 1(MSA1)基因序列 ,并进行序列分析。　方法　采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 GARP、SERA和 MSA1基因片段 ,分别插入到测序载体上进行测序。应用 DNAstar软件辅助分析 3种抗原基因的结构及 3种抗原在不同恶性疟原虫株间的分化情况。　结果　恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP基因全长 2 2 6 3bp,编码6 82个氨基酸残基 ,谷氨酸占 2 3.6 1% ,包含 5个典型的氨基酸重复序列 ;SERA基因全长 344 8bp,编码 995个氨基酸残基 ,丝氨酸含量为 10 .6 5 % ,包含 1个连续 32个丝氨酸 (S)残基的序列 ;MSA1基因全长 5 0 85 bp,编码 16 94个氨基酸残基 ,MSA1的氨基酸序列符合 MAD2 0型特征。恶性疟原虫 FCC1/ HN株与 3D7、FC2 7株 GARP的序列差异主要集中于 C-末端 ;FCC1/ HN株与 FCR3、3D7、FCBR、Hondulas- 1株 SERA的序列差异主要集中于 N-端。FCC1/ HN株与MAD2 0、3D7、HN1、HN2、FC2 7、RO- 71、RO- 33、CAMP和 Palo- alto株 MSA1的同源性高 ,K1和 WEL L COME株 MSA1的同源性高 ,各分离株 MSA1的序列差异主要处于第 2至 16分区。　结论　了解了恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP、SERA和 MSA1的     

恶性疟原虫疫苗研究Ⅱ．一种新的化学拼接法重组多价保护性抗原的基因

将恶性疟原虫保护性抗原环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）、裂殖子表面抗原１和２（ＭＳＡ１和ＭＳＡ２）４种抗原中具有Ｔ和／或Ｂ细胞表位的６个基因片段，按照我们设计的方案排成一条线性序列，经在计算机上分析比较后，分成长短不一的８个基因片段（Ｆ１～Ｆ８），其中Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５和Ｆ７为正链片段，Ｆ２、Ｆ４、Ｆ６和Ｆ８为负链片段。每相邻两个片段间预设１５个互补碱基搭头。在ＤＮＡ合成仪上分别合成这８个片段后，把Ｆ２～Ｆ７６个片段分别磷酰化，按等摩尔浓度混合。经３０℃退火，使８个片段连接起来，然后按基因体外扩增的原理，填补互补碱基以外的缺口，重组成新的多价基因。我们把这种化学拼接法取名为“缺口填补法（Ｆｉｌｌｉｎｇ－ｑａｐＭｅｔｈｏｄ）”，经克隆和测序验证，表明这种方法具有效果好、经济、简便等优点。     

日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析

【目的】研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测。【方法】用5’端和3’端锚定PCR从尾蚴库中扩增，以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(open reading frame，ORF)；用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测。【结果】用5’端和3’端锚定PCR从尾蚴库中获得了亲免素基因5’端和3’端所缺序列，得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1438bp，其ORF长1296bp，编码431个氨基酸。利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列。并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF。【结论】成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA，为进一步的功能研究打下了基础。     

酷似结核性脑膜炎临床表现的脑膜癌病（附4例报告）

脑膜癌病系癌肿向颅内转移的一种特殊类型，癌细胞弥漫性浸润脑、脊髓软膜，而脑脊髓内无瘤块。本病早先多为尸检诊断，临床上易误诊为各种脑膜炎。本文就15例脑膜癌病患者中，4例酷似结核性脑膜炎患者的临床资料报告分析如下。1临床资料1、1一般资料：4例患者男3例，女1例，年     

亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位

目的 表达亚洲带绦虫（Taenia asiatica,Ta）成虫烯醇化酶（enolase,ENO）基因,并对其进行组织定位和免疫反应性分析。 方法 通过大规模测序从亚洲带绦虫cDNA文库中确定ENO基因,PCR扩增目的片段,将其克隆至表达质粒pET-30a（+）,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察重组蛋白的表达情况,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化重组蛋白,蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白的免疫反应性。将重组蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清,ELISA检测抗体水平,间接免疫荧光检测确定ENO在亚洲带绦虫成虫组织中的定位。 结果 PCR、双酶切和DNA测序结果均表明,重组质粒pET-30a（+）-TaENO构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白TaENO的相对分子质量（Mr）为47 000。经亲和层析获高纯度的蛋白,蛋白浓度为0.37 mg/ml。重组蛋白TaENO能被SD大鼠抗血清、感染亚洲带绦虫的猪血清和患者血清识别。间接免疫荧光检测结果显示,TaENO主要定位于成虫的表膜。 结论 纯化后的亚洲带绦虫成虫烯醇化酶重组蛋白具有较强的免疫反应性,烯醇化酶主要定位于成虫表膜。     

华支睾吸虫成虫RPEF基因产物及其抗RPEF多克隆抗体的制备

目的 体外制备华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因产物及抗RPEF多克隆抗体.方法 亲和纯化试剂盒纯化表达蛋白pGEX-4T-1-RPEF,凝血酶酶切表达蛋白制备重组蛋白RPEF,将重组蛋白RPEF免疫小鼠,制备多克隆抗血清,检测抗体滴度和抗血清特异性.结果 体外制备的RPEF蛋白经SDS电泳呈单一条带;酶联免疫吸附结果显示,免疫过程抗体滴度呈连续上升趋势;免疫印迹结果显示,小鼠抗血清具有抗RPEF特异性.结论 获得较专一的华支睾吸虫RPEF蛋白和RPEF抗血清.     

心脑安丸联合灯盏花素治疗脑梗死疗效观察

心脑安丸是我院名中医侯英俊主任医师创制.常用其治疗心、脑血管疾病.近三年来,我们运用其治疗缺血性脑梗死135例,疗效满意,现将结果报告如下. 1 临床资料 1.1 一般资料 共观察治疗247例,均为院心血管科住院患者.根据其就诊时间的先后顺序随机分为治疗组与对照组.其中治疗组135例,男82例,女53例;年龄42-76岁,平均年龄57岁;病程5-21天;同时伴有高血压89例,糖尿病23例,高脂血症68例.对照组112例,男77例,女35例;平均年龄58岁;病程6-20天,伴高血压者91例,糖尿病18例,高脂血症52例.两组在性别、年龄、病程等比较无显著性差异（P〉0.05）,具有可比性.