华支睾吸虫分泌蛋白基因（CsCrSP）的克隆和生物信息学分析

目的 筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因，克隆并构建重组表达载体。 方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选，通过BLASTn程序进行序列比对，识别华支睾吸虫新基因，并应用Motifscan，NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行结构域及进化树分析。 结果 筛选出华支睾吸虫未知基因Pcs004f03序列，含689 bp；应用Vecter NTI分析，理论相对分子质量（Mr）为21 000，完整的ORF含561 bp，编码187aa。该基因有潜在的糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶Ｃ磷酸化位点、cAMP-and cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点。利用软件在线搜索发现在第1～50aa内有一明显的信号肽，初步推断CsCrSP为一种分泌蛋白。结论 CsCrSP基因为华支睾吸虫富含半胱氨酸分泌蛋白基因。     

虫源性IgE依赖组胺释放因子诱导致敏肥大细胞释放组胺的研究

目的 制备日本血吸虫和华支睾吸虫IgE依赖组胺释放因子重组蛋白rSjHRF和rCsHRF，并观察两者诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。 方法 分别克隆SjHRF和CsHRF基因完整编码序列，将重组质粒分别转化大肠埃希菌BL21并诱导表达，亲和层析纯化可溶性表达的重组蛋白，将纯化的rSjHRF和rCsHRF分别与卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞一起孵育，利用荧光分光光度法测定肥大细胞组胺释放量，并制备2种重组蛋白诱导肥大细胞释放组胺的剂量依赖曲线和动力学曲线。 结果 成功构建重组质粒pET?鄄30?鄄rSjHRF和pET?鄄30?鄄rCsHRF，并获得纯化的可溶性重组蛋白rSjHRF和rCsHRF；2种重组蛋白诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺均具有剂量依赖性，当浓度为150 mg/L时，rSjHRF和rCsHRF诱导致敏肥大细胞组胺平均释放率为49.78%和32.63%；2种重组蛋白诱导致敏肥大细胞组胺释放率随时间延长而增加，在反应开始后约35 min，组胺释放率达到最高。 结论 重组虫源性IgE依赖组胺释放因子可诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺，提示该蛋白可能与寄生性蠕虫感染诱导机体Ⅰ型超敏反应的发生相关。     

棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶的作用

目的 检测棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶（rSjLDH）活性的影响。 方法 在已建立的rSjLDH标准酶活性测定体系中分别加入不同浓度的棉子酚（0~0.10 mmol/L）、 吡喹酮（0~0.20 mmol/L）及蒿甲醚（0~0.10 mmol/L），以相应药物溶剂作对照，分光光度法测定药物对rSjLDH活性的影响。用SPSS13.0软件统计结果，计算药物对酶活性的相对抑制率。 结果 与对照组比较，0.04 mmol/L棉子酚对rSjLDH催化丙酮酸还原为乳酸及乳酸氧化为丙酮酸的相对抑制率分别为59.1%和34.4%（P<0.01），0.10 mmol/L棉子酚分别为91.3%和89.1%（P<0.01）；0.06 mmol/L吡喹酮分别为5.77%和41.4%（P<0.05），0.20 mmol/L吡喹酮分别为83.8%和72.2%（P<0.01）。0.10 mmol/L蒿甲醚对rSjLDH则无抑制作用（P>0.05）。 结论 棉子酚及吡喹酮对rSjLDH活性均有显著的抑制作用，SjLDH可能是吡喹酮的分子靶标之一。     

家用型窄谱中波紫外线白癜风光疗仪的研制与应用

目的：研制和应用窄谱中波紫外线（NB—UVB）白癜风光疗仪治疗白癜风,观察治疗后的临床疗效。方法：根据窄谱中波紫外线治疗皮肤病的原理,研制一种家用型窄谱中波紫外线白癜风光疗仪,应用于白癜风的临床治疗,并研究和分析治疗后临床疗效。结果：应用白癜风光疗仪治疗白癜风33例中的39块皮损,总有效率为74．35％。结论：白癜风光疗仪治疗白癜风具有操作简便、临床疗效好、安全可靠的特点,值得临床上推广和应用。     

脑微出血与脑卒中相关性的临床研究

目的通过核磁共振T2*加权梯度回波成像(MRI GRE-T2*WI)筛查脑微出血(CMB),探讨CMB与卒中发生、发展之间的关系,及其与卒中危险因素之间的联系。方法纳入脑血管病患者140例,其中腔隙性脑梗死组58例、脑梗死组42例,脑出血组40例;另收集同期30例住院或门诊非血管病患者作为对照组。登记所有患者血压、血脂、血糖、既往史等基线资料,行MRI GRE-T2*WI扫描,记录各组脑微出血发生例数、部位、数目,进行统计分析。结果所有170例患者中,CMB患者的血压、血脂、血糖等较无CMB患者高,症状明显,对比明确(P均<0.05);各脑卒中组的CMB发生率均明显高于对照组(P均<0.05);各脑卒中组CMB分级构成不同(P<0.05),脑出血组CMB重度发生率明显高于其它各组;有CMB的各脑卒中组CMB总体均数比较,自发性脑出血组>腔隙性脑梗死组>脑梗死组。结论高血压病、糖尿病、高脂血症是影响CMB发生的显著因素;CMB作为微出血病变,在预测脑出血病变方面具有一定意义,可通过对CMB的诊断了解脑部出血的部位等基本信息,为以后的治疗带来方便;MRI GRE-T2*WI扫描的诊断方法为脑出血病变的常规诊断方法,此种方法在诊断脑出血病变准确度高,优势明显,因此,对于临床的诊断治疗具有显著的价值,可推广。     

恶性疟原虫己糖转运体编码基因的体外扩增、克隆及表达

[目的 ]体外扩增、克隆和表达恶性疟原虫海南分离株的己糖转运体 (PfHT1)基因 ,为研究其保护性免疫创造条件。 [方法 ]恶性疟原虫FCC1/HN株的体外培养 ;碱裂解法提取基因组DNA ;PfHT1基因的PCR扩增、克隆 ;脂质体介导法转染HEPG2细胞株及真核表达。 [结果 ]从恶性疟原虫海南分离株基因组DNA中扩增出特异性的编码PfHT1的基因序列 ,片段大小为 15 16bp ;成功构建 pN3 HT1真核表达重组质粒并在肝癌细胞HEPG2中稳定表达。 [结论 ]体外成功扩增、克隆恶性疟原虫PfHT1编码序列 ;重组质粒转染成功并获稳定表达融合蛋白的 pN3 HT1/HEPG2细胞株     

恶性疟原虫海南FCC1/HN株有性期特异抗原Pfs25基因的克隆和序列分析

利用ＰＣＲ扩增技术从恶性疟原虫海南ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组中特异扩增编码Ｐｆｓ２５抗原全基因序列，扩增产物经纯化回收后，用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法进行ＤＮＡ序列测定，结果显示ＦＣＣ１／ＨＮ株Ｐｆｓ２５基因序列与ＮＦ５４株者基本一致，仅在第３９２位碱基存在置换（Ｇ→Ｃ）和该密码子编码的氨基酸的变化（１３ｌａａ：Ｇｌｙ→Ａｌａ），进一步的酶切位点分析显示该位点碱基置换产生新的ＰｓｔⅠ酶切位点（３９３），再用ＰｓｔⅠ消化纯化的ＰＣＲ产物，产生２条大小分别为３９３ｂｐ和２７０ｂｐ的ＤＮＡ片段，测序和酶切结果都证实扩增的目的基因确为编码有性期特异抗原Ｐｆｓ２５基因。另将纯化的ＰＣＲ产物用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ双酶切后，定向克隆入ｐｃＤＮＡ３载体，转化大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１，随机挑取氨苄青霉素抗性菌落进行ＰＣＲ扩增验证和用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ双酶切鉴定，结果证明重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆｓ２５含有编码Ｐｆｓ２５抗原基因。     

华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10-20及E94-102表位的克隆表达与生物学特性初步研究

【目的】 原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102),初步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互关系&#65377;【方法】 将E10-20及E94-102克隆至pGEX-4T-1载体,表达纯化重组蛋白,用Western Blotting和间接ELISA法检测CsLDH免疫血清对表位重组蛋白的识别,同时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体系,比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影响&#65377;【结果】 成功构建pGEX-4T-1-E10-20及pGEX-4T-1-E94-102重组质粒,SDS-PAGE鉴定表达的重组蛋白,菌体裂解液经亲和层析纯化,获得与GST融合表达的蛋白E10-20及E94-102&#65377;两表位重组蛋白均可被CsLDH免疫血清识别,而对E94-102更易于识别;重组CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清识别,而不能被对照血清识别&#65377;E94-102免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸的反应&#65377;【结论】 表位结构和功能研究深化了对CsLDH结构的理解,并为开辟CsLDH疫苗研究新路径奠定基础&#65377;     

日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分的双向电泳分析

目的：分析日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分。方法：双向电泳法。结果：用双向电泳分析雌雄虫体多肽斑点分别有310个和290个，匹配的蛋白点为51个。日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白中存在一些共同多肽斑点，但不同的多肽斑点较多。结论：日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分存在较大差异，值得进一步研究。     

时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用

时间分辨荧光免疫分析（Time—resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）是一种新型的体外超微量分析技术．被公认为是目前灵敏度最高的分析方法之一，并以其独特的优势近些年迅速发展，已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域。本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述。