人脐带血间充质干细胞分离培养体系的优化筛选

背景：目前所报道的脐带血间充质干细胞体外培养条件不尽相同,尚缺乏统一标准,且培养效率较低。 目的：拟对人脐带血间充质干细胞的分离方法、培养条件进行优化筛选。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-05/2008-04在中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院中心实验室完成。 材料：35份脐带血标本来源于北京协和医院妇产科顺产或剖宫产胎儿。 方法：应用淋巴细胞分离液法、羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法分别从脐带血中获得单个核细胞。细胞接种后,应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12、L-DMEM和MesencultTM不同培养基,在不同体积分数胎牛血清（5%,10%,20%）、不同细胞接种密度（5×106,1×107,5×107,1×108）下进行细胞培养。细胞传至第3代诱导成骨,行Von Kossa染色。 主要观察指标：不同分离方法、培养基、胎牛血清浓度、种植密度分离培养细胞的效果,脐带血间充质干细胞表面标记的表达及成骨情况。 结果：与淋巴细胞分离液法比较,羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法获得的单个核细胞数量明显增多（P < 0.05,P < 0.01）,羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法细胞原代培养时间显著短于另2种方法（P < 0.01）。应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或MesencultTM培养基,T25培养瓶中细胞接种密度为5×107时,培养效率高于其余各种条件组合（P < 0.01）。贴壁细胞表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45,CD90及CD133,经成骨诱导培养21 d后Von Kossa染色可见黑色矿化结节。 结论：应用羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法可以获得较多数量的脐带血单个核细胞,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或MesencultTM培养基、细胞接种密度为5×107时可以提高脐带血间充质干细胞的培养效率。     

慢性肝病与成体肝干细胞

慢性肝病中,肝细胞作为单能干细胞参与肝脏修复,还存在类似于动物致癌、损伤模型中卵圆细胞的肝干细胞或肝前体细胞,这些细胞均能活化并分化成肝细胞和胆管上皮,与临床慢性肝病的发生发展密切相关,主要包括胆管反应中的卵圆细胞和小肝细胞,定位于Hering管、汇管区、纤维间隔、汇管区旁肝实质、假小叶及炎症边界,根据超微结构特点分为三型,可以表达一系列标记物,还可能是骨髓、胰腺来源。     

老年Binswanger病患者智能障碍、事件相关电位及脑电图的对比

Ｂｉｎｓｗａｎｇｅｒ病 (ＢＤ)是由高血压及脑小动脉硬化引起的具有一定临床和病理特点的血管性痴呆〔1〕。近年来 ,事件相关电位 (ＥＲＰ) ,其中尤以Ｐ30 0 的测试为了解人类大脑认知功能开辟了一个客观的新途径 ,其中用于对痴呆患者的测试国内外已有不少报道〔2〕。我们着重探讨ＢＤ患者智能障碍与ＥＲＰ及脑电图的关系。　　一、对象与方法　　 1.对象 :ＢＤ组 :1995年至 2 0 0 0年诊治的ＢＤ患者共 43例 ,均符合Ｃａｐｌａｎ〔1〕提出的诊断标准。男 3 1例 ,女 12例。所有患者均进行了头颅ＣＴ扫描 ,其中 14例还进行了头颅ＭＲＩ检查。…     

TH17在结缔组织病相关性间质性肺病中的意义

目的探讨外周血Th17及IL-17在结缔组织病相关性间质性肺疾病的表达及意义。方法收集23例正常对照组及28例病理类型为非特异性间质性肺炎(NSIP)的结缔组织病相关性间质性肺疾病(CTD-ILD)患者的外周血单个核细胞及血浆,分别检测PBMC中Th17的比例及血浆中IL-17的表达情况,并收集入组患者肺功能指标TLC(pre/ref%)及DLco(pre/ref%)数据。结果与正常对照组相比,CTD-ILD患者组Th17比例明显增加,差别具有统计学意义(P0.05),CTD-ILD患者IL-17细胞因子的浓度较正常对照组的血浆浓度明显增加(P0.01)。但CTD-ILD患者外周血Th17及IL-17与患者肺功能指标TLC(pre/ref%)及DLco(pre/ref%)之间均无显著相关性。结论在CTD-ILD患者体内Th17及其细胞因子IL-17明显升高,可能参与疾病的发生。     

肠道病毒71型IgM抗体检测在手足口病早期诊断中的价值

目的 评估人肠道病毒71型(EV 71)IgM抗体在手足口病早期诊断中的价值.方法 自发病后连续每日采集2010年我院收治的38例手足口病患儿血清及咽拭子标本,分别检测EV 71IgM抗体、肠道病毒核酸、EV 71特异核酸.结果 38例手足口病患儿IgM抗体,按发病天数累加阳性率分别为:第1天60.5%、第2天71.1%、第3～4天81.5%、第5天92.1%、第6天92.1%;肠道病毒核酸阳性率为73.6%;EV 71特异核酸阳性率为60.5%.结论 EV 71 IgM抗体在手足口病发病的第1天即可出现,至第5天阳性率达到峰值,可作为手足口病早期诊断指标之一.     

两种不同方法检测HIV抗体结果的比较

目的 对化学发光和酶联免疫法(ELISA)检测HIV抗体的方法进行评价,比较检测结果的差异,为HIV初筛的方法的选择和临床应用提供参考.方法 以HIV抗体确认实验结果为金标准,对3000例我院就诊的患者同时应用两种方法检测,对两结果进行比较,评价两种检测方法筛查HIV感染者的特异性、灵敏度.结果 ELISA检测法阳性率为0.93％,特异性为99.93％,灵敏度为89.66％,化学发光法阳性率为1.03％,特异性为99.93％,敏灵度为100％.结论 两种方法均适合HIV的初筛,都具有较高的特异性,化学发光法的灵敏度要优于ELISA方法.     

临床实验室仪器间比对实验探讨

目的 按照ISO15189要求对两台强生VITROS 3600化学发光分析仪上的相同项目进行比对试验,以评估检测结果的一致性.方法 分别使用两台仪器对anti-HCV的精密度,准确度进行验证试验,并对临床收集的Anti-HCV阴性10份、阳性10份和弱阳性20份血清样本共40份进行比对试验,检测结果行统计学分析.结果 两台仪器阴性和阳性质控品批内精密度变异系数分别为5％、4％、7.14％和7.23％,批间精密度分别为9.47％、7.7％和8.04％、7.6％,均小于ISO15189要求的CV(15％),两仪器准确度为100％,质控品检测结果差异无统计学意义(P＜0.05).临床样本检测结果相关性分析R2 =0.9984,具有良好的一致性.结论 两台强生VITROS 3600化学发光分析仪检测结果,一致性良好,具有可比性.     

ACS患者动脉粥样斑块稳定性相关细胞因子变化的临床意义

目的：探讨急性冠脉综合征（ACS）病人血清中的细胞因子基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP1）、sICAM-1、sVCAM-1水平与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性及临床意义。方法：用ELISA检测ACS病人血清中sICAM-1、sVCAM-1、MMP-1、TIMP-1水平,并与正常对照组进行比较分析。结果：ACS组血清sICAM-1、sVCAM-1、MMP-1、TIMP-1水平均非常明显地高于正常对照组（P〈0.01）。结论：外周血中sICAM-1、sVCAM-1、MMP-1、TIMP-1水平增高与ACS相关,能反映冠脉粥样硬化斑块的稳定情况,可作为评价冠状动脉粥样硬化斑块稳定性与病变严重程度的一个参考指标。     

TGF-α与IGF-Ⅱ在血液透析前后的变化及意义

研究多肽生长因子ＴＧＦ－α与ＩＧＦ－Ⅱ在长期血透患者血清及体液中的表达特征。方法：彩放射免疫分析法,检测４５例维持性ＨＤ患者血清及１２ｈ尿液中ＴＧＦ－α与ＩＧＦ－Ⅱ的水平。结论尿毒症状态或血透过程透析膜等因素可激活单核细胞使产生ＴＧＦ－α和ＩＧＦ－Ⅱ增多。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠C57-TgN(adr2.0)SMMU品系的免疫病理研究

目的: 研究乙型肝炎病毒 (HBV)转基因小鼠C57 TgN(adr2. 0型)SMMU品系的免疫病理学特征, 并与临床人慢性乙肝相比较。方法: 以 20只SPF级肝脏有明显病变的HBV转基因小鼠为研究对象, 用间接免疫荧光法通过流式细胞仪, 分别检测转基因小鼠及正常C57BL/6小鼠外周血淋巴细胞表面CD3、CD4和CD8表达的水平, 同时取其肝组织和5例本院病理科存档确诊为慢性中度乙型肝炎患者的肝组织石蜡标本, 用EnVision免疫组化染色法检查肝组织内T细胞亚群的分布。结果: 转基因小鼠外周血淋巴细胞表面CD3、CD4和CD8表达的水平低于正常对照组小鼠; 肝组织内浸润的单个核细胞多数为CD3 CD4 细胞, 未发现CD57 、CD8 细胞。慢性乙型肝炎患者的肝组织内浸润的单个核细胞主要为CD3 CD4 或CD3 CD8 细胞和少量CD57 细胞。结论: C57 TgN(adr2. 0型 )SMMU的HBV转基因小鼠外周血及肝组织中CD的表达与人慢性乙肝患者的外周血及肝组织有明显不同。