我国脑膜炎奈瑟菌孔蛋白PorA、PorB的多态性分析

目的以蛋白质组学研究为基础,分析2003—2005年我国流脑暴发流行期间C群脑膜炎奈瑟菌菌株特征,建立以致病性相关蛋白多态性为目标的新分型方法。方法利用双向电泳和MALDI-TOF质谱鉴定分析2003—2005年流脑流行期内分离的66株C群脑膜炎奈瑟菌菌株及2株参考菌株的蛋白表达,重点分析与致病性相关的蛋白多态性特征。结果根据孔蛋白PorA、PorB在双向电泳中的多态性,建立了12个特征菌型。安徽菌株的PorA和PorB蛋白电泳谱型显示出了高度的一致性,而其他地区的菌株则显示出高度的多态性。结论PorA和PorB蛋白2-DE电泳谱型可以作为一种新的菌株分型方法,可能在菌型变迁检测和流脑暴发预警中具有重要应用前景。     

HLA-A*0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A^*0201(A^*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A^*0201cDNA,构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A^*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A^*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A^*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。     

HLA-A*0203-BSP的表达和复性及其四聚体的鉴定

目的：优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽（BSP）与HLA-A＊0203重链胞外域的融合蛋白（HLA—A＊0203、BSP），并制备负载HLA-A＊0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3 596-604的四聚体（HIA—A}0203／SVR）。方法：以HLA—A＊0203-BSP原核表达载体转化E．coli BL21（DE3）菌株，优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A＊0203／SVR单体，然后以BirA对其进行生物素化，并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A＊0203／SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4：1的比例混合形成四聚体，通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果：当IPTG的浓度为0．4mmol／L，于37℃诱导过夜后，融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量（Mr）为34003，与HLA—A＊0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分，约占菌体总蛋白的30％。负载抗原肽的可溶性HLA-A＊0203／SVR单体是在同时存在HLA-A＊0203，BSP、β2微球蛋白及HLA-A＊0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4：1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术（FCM）分析证实，该四聚体具有与HLA—A2^＋供者特异性CTL结合的活性。结论：HLA—A＊0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A＊0203／SVR四聚体具有与HLA-A2^＋供者特异性CTL结合的活性，为研究HLA—A＊0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。     

PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD L2剪切异构体可能与其功能的调变有关     

基于混合测序策略的两品种当归中类黄酮调控基因差异分析

目的 比较2个不同茎叶色当归品种岷归1号与岷归2号转录水平差异。方法 以2种颜色当归的新鲜叶片（带叶柄）和上端茎为材料,采用混合测序策略,应用全长转录组技术构建当归无参全长转录本文库,利用RNA-seq技术对两品种进行差异基因表达分析,再利用公共数据库对差异基因的生物学功能进行注释和精细分类,筛选调控当归茎叶色差异的主要候选基因。结果 当归转录本的测序结果良好,测序数据质量较高,当归全长转录本的34 528条序列在非冗余蛋白（NR）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）、SwissProt及KOG数据库中分别注释到33 947、33 241、29 150和22 601条。对两品种当归差异表达基因（DEGs）进行精细分类,具有生物学功能和分子功能的705个DGEs可分为11类,主要富集在初级代谢（17.87%）、逆境响应（14.47%）、次级代谢（11.49%）等功能上,与颜色有关的差异表达基因主要集中在类黄酮生物合成途径上。结论 两品种当归茎叶颜色差异的主要原因可能与调控类黄酮的生物合成基因的表达差异有关,可为后续进行功能验证,进一步明确与当归主要药效成分之间的联系奠定基础。     

医疗机构护理人员肌肉骨骼患病现况及影响因素研究

目的 调查医院护理人员肌肉骨骼患病情况并分析影响因素,指导制定有效的干预措施。方法 于2021年2—6月采用肌肉骨骼疾患调查表评估郑州市二级及以上医院护理人员肌肉骨骼患病情况,同时参照快速上肢评估方法评估人体工效学负荷等级,收集护理人员的人口学资料等,分析肌肉骨骼疾患发生的影响因素。结果 最终纳入1 031名护理人员,肌肉骨骼患病率为77.21%,以颈、肩、腰部患病更多见。多因素Logistic回归分析结果显示年龄（OR=1.520）、BMI≥24.0 kg/m²（OR=1.960）、有生育过（OR=1.114）、工龄（OR=2.208）、医院级别（OR=2.751）、科室（内科：OR=0.451、儿科：OR=0.671、妇产科：OR=0.184、急诊：OR=2.487、其他科室：OR=0.191）、人体工效学负荷等级（OR=2.560）是医院护理人员肌肉骨骼患病的影响因素。结论 医院护理人员肌肉骨骼患病率处于较高水平,受到多种因素影响,应当针对性采取干预措施帮助护理人员减少不良工作姿势、改善工作环境,降低肌肉骨骼患病率,提高医护人员身体健康水平。     

肺炎克雷伯菌KbvR调控I型菌毛FimH的合成与功能研究北大核心CSCD

目的明确KbvR对I型菌毛顶端蛋白编码基因fimH的调控作用及其生物学功能。方法在kbvR基因敲除株的基础上构建kbvR与fimH基因的双敲除株,通过扫描电镜、RT-PCR、酵母凝集试验、细胞试验等方法分析在kbvR基因敲除及ΔkbvRΔfimH基因双敲除时细菌I型菌毛的形成、生物膜产生、对吞噬细胞的侵袭能力改变。结果RNA-seq及RT-PCR半定量试验显示kbvR基因敲除株中fimH基因表达增加,扫描电镜及酵母凝集试验显示kbvR基因敲除株菌毛形成能力增强。通过同源重组的方式在kbvR基因敲除株的基础上成功获得ΔkbvRΔfimH双基因敲除株。相对于kbvR基因敲除株,ΔkbvRΔfimH双基因敲除株菌毛形成降低,对抗巨噬细胞吞噬能力提升,但生物膜形成能力无明显变化。结论KbvR对肺炎克雷伯菌I型菌毛FimH蛋白合成起负调控作用,并通过对I型菌毛的合成而影响细菌的抗吞噬能力,但不参与细菌生物膜形成。     

个人剂量监测中异常结果的调查与分析

目的 对2014—2017年本实验室个人剂量监测过程中出现的异常结果进行调查与原因分析。方法 放射工作人员佩戴热释光个人剂量计监测个人剂量当量H_P(10),对测量结果超过调查水平的进行统计分析。结果 2014—2017年,本实验室共出现40个单位69人次个人剂量监测结果异常,其中从事诊断放射学的占83%;剂量结果在1.25～5.00 mSv占54%;导致剂量结果异常的主要原因有剂量计佩戴不规范（67%）、原因不明（20%）、工作量增加（10%）和设备维修（占3.0%）等。结论 加强放射工作单位对放射工作人员的管理及放射防护培训,提高个人防护意识。     

恶性胸腔积液对晚期非小细胞肺癌预后的影响

目的 探讨恶性胸腔积液对晚期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）预后生存的影响。方法 根据临床分期及有无胸腔积液将患者分为三组,用生存统计中的Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ表法做出三组生存曲线并比较显著性。结果 无胸腔积液的ⅢＢ期患者的生存与有胸腔积液的ⅢＢ期患者及Ⅳ期肺癌患者的生存期比较有显著性差异,而ⅢＢ期有胸腔积液的肺癌患者的生存期与Ⅳ期患者的生存期比较无显著性差异。在单因素及多因素预后分析中,胸腔积液均为     

超氧阴离子与硝酸甘油耐药关系的实验研究

目的 :采用持续经皮贴硝酸甘油 ( 0 .4mg/h) 72小时建立大白兔耐药模型 ,用鲁米诺化学发光技术测量血管壁超氧阴离子 (·O-2 )水平 ,探讨·O-2 水平与硝酸酯耐药性的关系。方法 :动物随机分为硝酸甘油组和对照组 ,贴膜 72小时后获取胸主动脉 ,观察血管环对不同浓度硝酸甘油的舒张反应和测量血管组织·O-2 、丙二醛 (MDA)水平和超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :硝酸甘油组血管环对硝酸甘油舒张反应明显减弱 (最大舒张反应 58.76±1 2 .96%vs94.68± 3.2 3% ,P <0 .0 5) ,硝酸甘油组血管组织·O-2 水平较对照组显著增加 ( 2 31 7.38± 889.0 3vs50 8±1 70 .94cps/g .ml,P <0 .0 5) ,而SOD活性和MDA水平无显著改变 (P >0 .0 5)。结论 :持续经皮贴硝酸甘油 72小时血管环产生了明显耐药 ,耐药的产生可能与血管壁超氧阴离子增加有关